婦血安薄膜衣片的質(zhì)量控制

婦血安薄膜衣片的質(zhì)量控制

女性血安膜片是廣東德鑫制藥有限公司開(kāi)發(fā)的具有特定療效的中藥。它主要由12味中藥組成：貞子、當(dāng)歸和母字。具有活血化瘀、抗瘀、益肝腎、止血調(diào)經(jīng)、止血調(diào)經(jīng)的功效。用于血瘀期的延長(zhǎng)治療。婦血安片原劑型為糖衣片(國(guó)藥準(zhǔn)字Z20010123)。為了提高產(chǎn)品質(zhì)量,本試驗(yàn)擬定了婦血安薄膜衣片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),優(yōu)化了三七、女貞子、丹參和白術(shù)的TLC鑒別方法,增加了仙鶴草、黨參的定性鑒別,并優(yōu)化了當(dāng)歸中阿魏酸(ferulicacid,1)的含量測(cè)定方法。1自制規(guī)格、預(yù)制板規(guī)格HP1100型高效液相色譜儀,配備HPG1311A型四元梯度泵,HPG1313A型自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng),HPG1315A型二極管陣列檢測(cè)器,HPG1313型真空在線脫氣機(jī),HPG1316A型柱溫箱及HPChemStation6.0色譜工作站(美國(guó)Agilent公司)。薄層色譜硅膠G(青島海洋化工有限公司,自制規(guī)格10cm×10cm,厚度0.5mm);預(yù)制板(青島海洋化工廠分廠,規(guī)格10cm×10cm,厚度0.25mm)。婦血安薄膜衣片(規(guī)格0.25g/片,批號(hào)小試-1、小試-2、小試-3、B090601、B090602和B090603)和所有陰性對(duì)照樣品均來(lái)自廣東德鑫制藥有限公司;丹參對(duì)照藥材(批號(hào)120923-200509)、女貞子對(duì)照藥材(批號(hào)121041-200302)、白術(shù)對(duì)照藥材(批號(hào)120925-200708)、三七對(duì)照藥材(批號(hào)120941-200807)、仙鶴草對(duì)照藥材(批號(hào)120966-200505)、黨參對(duì)照藥材(批號(hào)121057-200805)、1對(duì)照品(批號(hào)0773-9910)、原兒茶醛(2)對(duì)照品(批號(hào)110810-200506)、三七皂苷R1(3)對(duì)照品(批號(hào)110745-200617)、人參皂苷Rb1(4)對(duì)照品(批號(hào)110704-200921)和人參皂苷Rg1(5)對(duì)照品(批號(hào)110703-200726)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。甲醇為色譜純,水為純化水,其他試劑均為分析純。2方法和結(jié)果2.1氯甲烷-甲醇-水3-三甲基”-3-甲基苯磺酸酯的合成取本品5片,研細(xì),加70%甲醇30ml,超聲(功率120W,頻率40kHz,下同)45min,過(guò)濾。濾液蒸干,剩余物加水30ml使溶解,用水飽和的正丁醇(20ml×3)提取,合并正丁醇液,用0.2%氫氧化鈉溶液洗滌(20ml×3),將正丁醇液蒸干,剩余物加乙醇1ml使溶解,作為供試品溶液。取三七對(duì)照藥材1g,加70%甲醇20ml,超聲處理45min,過(guò)濾,濾液蒸干,剩余物加乙醇2ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液。取3、4、5對(duì)照品,加乙醇制成濃度均為1mg/ml的混合溶液,作為對(duì)照品溶液。取三七陰性對(duì)照樣品2.5g,同法制成陰性對(duì)照溶液。照TLC法(中國(guó)藥典2010年版一部,附錄ⅥB,下同),分別吸取上述溶液各5uf06dl,點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13︰7︰2)的下層溶液為展開(kāi)劑,展開(kāi)至8cm,取出,晾干,日光下檢視,供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。結(jié)果見(jiàn)圖1。2.2女貞子的tlc法按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。取女貞子對(duì)照藥材1g,加70%乙醇20ml,超聲處理30min,過(guò)濾,濾液水浴蒸干,剩余物加乙醇2ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液。取女貞子陰性對(duì)照樣品2.5g,同法制成陰性對(duì)照溶液。照TLC法,分別吸取上述溶液各5uf06dl,點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-三氯甲烷-甲醇(4︰3︰1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,噴10%硫酸乙醇溶液,105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰,日光下檢視,供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的紫紅色斑點(diǎn)。結(jié)果見(jiàn)圖2。2.3氯甲烷-丙酮-甲醛對(duì)照品溶液的制備取本品5片,研細(xì),加70%乙醇25ml,超聲處理30min,過(guò)濾,濾液蒸干,剩余物加水10ml使溶解,通過(guò)AB-8型大孔吸附樹(shù)脂柱(1.5cm×8cm),用水40ml洗脫,取洗脫后的水溶液備用。再用20%乙醇40ml洗脫(流速3ml/min),收集洗脫液,蒸干,剩余物加乙醇2ml使溶解,作為供試品溶液。取丹參對(duì)照藥材0.5g,加水20ml,加熱回流30min,離心(2000r/min)10min,取上清液,用乙酸乙酯提取(15ml×2),取乙酸乙酯層,蒸至2ml,作為對(duì)照藥材溶液。取2對(duì)照品,加無(wú)水乙醇制成濃度為50uf06dg/ml的溶液,作為對(duì)照品溶液。取丹參陰性對(duì)照樣品2.5g,同法制成陰性對(duì)照溶液。照TLC法,分別吸取上述溶液各5uf06dl,點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-丙酮-甲酸(8︰2.2︰1.3)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,噴以新鮮配制的2%三氯化鐵-1%鐵氰化鉀(1︰1)溶液,在日光下檢視,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的藍(lán)色斑點(diǎn)。結(jié)果見(jiàn)圖3。2.4對(duì)照藥材和陰性對(duì)照樣品的制備取“2.3”項(xiàng)下的水溶液,用乙酸乙酯(25ml×3)提取,合并乙酸乙酯液,蒸干,剩余物加乙酸乙酯1ml使溶解,作為供試品溶液。取白術(shù)對(duì)照藥材0.5g和陰性對(duì)照樣品2.5g,同法制成對(duì)照藥材溶液和陰性對(duì)照溶液。照TLC法,分別吸取上述溶液各10uf06dl,點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,正己烷-三氯甲烷(4︰8)為展開(kāi)劑,另一槽放5ml氨水,展開(kāi),取出,噴以10%硫酸乙醇溶液,105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰,在紫外光燈(365nm)下檢視,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見(jiàn)圖4。2.5仙皇草的tlc法取本品5片,研細(xì),加70%乙醇25ml,超聲處理30min,過(guò)濾,濾液蒸干,剩余物加水30ml使溶解,用乙酸乙酯提取(15ml×3),合并乙酸乙酯液,用0.2%氫氧化鈉溶液提取(20ml×3),合并堿液,加稀鹽酸調(diào)至pH中性,再用乙酸乙酯(30ml×2)提取,合并乙酸乙酯液,蒸至2ml,作為供試品溶液。取仙鶴草對(duì)照藥材1g,加70%乙醇20ml,超聲處理30min,過(guò)濾,濾液蒸干,剩余物加乙醇2ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液。取仙鶴草陰性對(duì)照樣品2.5g,同法制成陰性對(duì)照溶液。照TLC法,分別吸取上述溶液各5uf06dl,點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,正己烷-乙酸乙酯-甲酸(9︰3︰0.5),展開(kāi),取出,噴以10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰,在紫外光燈(365nm)下檢視,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見(jiàn)圖5。2.6樣品的制備和鑒別取本品5片,研細(xì),加水40ml,加鹽酸4ml,加熱回流30min,過(guò)濾,濾液用石油醚(bp30~60℃)洗滌(20ml×2),再用二氯甲烷(20ml×3)提取,合并二氯甲烷液,蒸干,剩余物加二氯甲烷1ml使溶解,作為供試品溶液。取黨參對(duì)照藥材1g,加水20ml,加鹽酸2ml,加熱回流1h,過(guò)濾,濾液同法制成對(duì)照藥材溶液。取黨參陰性對(duì)照樣品2.5g,同法制成陰性對(duì)照溶液。照TLC法,分別吸取上述溶液各5uf06dl,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10︰4︰1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,在紫外燈(365nm)下檢視,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見(jiàn)圖6。2.71重量測(cè)定2.7.1對(duì)照品溶液和試品溶液的制備對(duì)照品溶液:精密稱取1對(duì)照品10mg,置100ml量瓶中,加甲醇溶解并定容,搖勻,作為對(duì)照品貯備液(0.1mg/ml),備用。精密量取1對(duì)照品貯備液2ml,置10ml量瓶中,加甲醇定容,搖勻即得20uf06dg/ml的1對(duì)照品溶液。供試品溶液:取本品20片,研細(xì),精密稱取細(xì)粉5g,置具塞錐形瓶中,精密加入5%甲酸甲醇溶液100ml,稱重,超聲處理30min,用5%甲酸甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量,搖勻,過(guò)濾,精密量取續(xù)濾液50ml,蒸干,剩余物加水20ml使溶解,用乙酸乙酯提取(30ml×3),收集乙酸乙酯液,蒸干,剩余物加適量甲醇使溶解,并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中,加甲醇定容,搖勻,即得。陰性對(duì)照溶液:取當(dāng)歸陰性對(duì)照樣品5g,同法制成陰性對(duì)照溶液。2.7.2流動(dòng)相-1%冰乙酸溶液uf06d色譜柱KromasilC18柱(4.6mm×250mm,5uf06dm);流動(dòng)相甲醇-1%冰乙酸(33︰67);流速1.0ml/min;柱溫25℃;檢測(cè)波長(zhǎng)330nm;進(jìn)樣量10uf06dl。理論板數(shù)按1峰計(jì)算不低于3000,方中其他成分不干擾測(cè)定。見(jiàn)圖7。2.7.3標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性回歸法分別取對(duì)照品貯備液0.5、1、2、4、6和8ml,置10ml量瓶中,加甲醇定容,搖勻,制成系列濃度1對(duì)照品溶液。分別進(jìn)樣,記錄色譜圖,以峰面積A為縱坐標(biāo)、以進(jìn)樣量m為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,得回歸方程。A=5027.25m+1.48,r=0.9999。結(jié)果表明1在5~80uf06dg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.7.4穩(wěn)定性試驗(yàn)取1對(duì)照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣5次,計(jì)算得RSD為1.02%。取同一供試品溶液,分別在放置0、2、4、8、10和12h時(shí)進(jìn)樣,依法測(cè)定,結(jié)果RSD為0.79%,表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。取同批樣品,按“2.7.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,連續(xù)平行操作6份,分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果,本品1的平均含量為0.146mg/g,RSD為1.49%。2.7.5加樣回收率試驗(yàn)取1對(duì)照品,加甲醇配成1mg/ml的溶液,備用。取本品20片(批號(hào)B090601),研細(xì),精密稱取細(xì)粉2.5g,共6份,各置具塞錐形瓶中,分別精密加入上述1對(duì)照品溶液0.4ml,加5%甲酸甲醇溶液100ml,按“2.7.1”項(xiàng)下制備供試品溶液,分別進(jìn)樣測(cè)定,結(jié)果平均回收率為98.9%,RSD為1.12%(n=6)。2.7.6供試品溶液取3批樣品,各2份,按“2.7.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,分別進(jìn)樣測(cè)定,結(jié)果1含量分別為(75.92±0.18)、(68.38±0.06)和(67.86±0.26)uf06dg/片。3高效液相色譜圖當(dāng)歸為方中君藥,1為其主要藥效成分。原糖衣片