結(jié)核分枝桿菌實驗活動風險評估報告

標題：結(jié)核分枝桿菌風險評估報告第六節(jié)結(jié)核分枝桿菌實驗活動風險評估報告一、生物因子1.形態(tài)與染色結(jié)核分枝桿菌細長略彎曲，端極鈍圓，大小約（1～4)μm×(0.3～0.6)um,呈單個或分枝狀排列，有時呈V、Y、人字型排列，無鞭毛和芽孢。多數(shù)學者認為結(jié)核分枝桿菌無莢膜。結(jié)核分枝桿菌常用萋-尼氏（Ziehl-Neelsen)抗酸性染色法染色，染色后結(jié)核分枝桿菌呈現(xiàn)養(yǎng)物中，形態(tài)常不典型，可呈顆粒狀，串球狀，短棒狀，長絲形等；或受物理因素、化學因樣品可看到的革蘭染色陽性顆粒的球狀微粒型。2.生長特性和培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌為緩慢生長細菌，較普通細菌生長十分緩慢，在動物體內(nèi)繁殖代時約為油酸血清（白蛋白）瓊脂培養(yǎng)基和蘇通液體培養(yǎng)基等，在良好的培養(yǎng)條件下，生長代時約3.生化反應結(jié)核分枝桿菌能夠產(chǎn)生硝酸鹽還原酶，可使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽；在酸性條件下，非結(jié)核性分枝桿菌不能產(chǎn)生硝酸鹽還原酶，因此可用于結(jié)核分枝桿菌與牛分枝桿菌的鑒別。長時的煙酸聚集量較牛分枝桿菌及其他分枝桿菌高。煙酸砒啶環(huán)的氮與聯(lián)苯胺及溴化氰作用后，呈現(xiàn)桃紅色或紅色沉淀反應。通過煙酸試驗可以將結(jié)核分枝桿菌同其他分枝桿菌區(qū)分。4.免疫學特性抗結(jié)核免疫反應在結(jié)核分枝桿菌感染中起著根本作用，免疫系統(tǒng)能有效地抵抗大多數(shù)就會大大增加。結(jié)核分枝桿菌是胞內(nèi)感染菌，其免疫主要是以T細胞為主的細胞免疫。當結(jié)核分枝桿標題：結(jié)核分枝桿菌風險評估報告結(jié)核分枝桿菌的免疫屬于感染免疫，又稱有菌免疫，即只有當結(jié)核分枝桿菌或其組分5.遺傳特性和胞嘧啶（C）含量。結(jié)核分枝桿菌基因組在進化過程中形成了不同的分枝，主要有北京家家族有高毒力和高致病性。6.耐藥性結(jié)核分枝桿菌產(chǎn)生耐性的機制主要是靶編碼基因的突變所致。結(jié)核分枝桿菌的自然耐藥突變率為10-10～10-5之間。當結(jié)核分枝桿菌的編碼基因發(fā)生突變后，其對耐藥的敏感性表型漸增加，直至成為耐藥菌優(yōu)勢菌群。耐藥結(jié)核分枝桿菌可以分為原發(fā)耐藥、初始耐藥和繼發(fā)藥物也產(chǎn)生敏感性的改變。結(jié)核桿菌可侵犯全身各器官，但以肺結(jié)核為最多見。結(jié)核病是一種古老的疾病，也許有“結(jié)核”。1973年，湖南長沙馬王堆漢墓出土的2100年前的女尸身上發(fā)現(xiàn)左上肺門均有結(jié)核病灶。因而，結(jié)核的名稱就此被應用至今。1000～10000，則其痰涂片陽性率為40%～50%。病人排菌量越大，其密切接觸者的感染率也同，其毒力也不同，因而其傳染性亦不同。感染的結(jié)核桿菌活力越強，數(shù)量越大，傳染性也感染藥物敏感菌的結(jié)核病患者在未治療時的相對傳染性為100%。通常，結(jié)核病患者經(jīng)一治療時相對傳染性為100%，在治療時則降為27.3%。結(jié)核分枝菌主要通過呼吸道傳播，傳染源主要是排菌的肺結(jié)核病人（尤其是痰涂片陽性，標題：結(jié)核分枝桿菌風險評估報告未經(jīng)治療者）的痰。飛沫感染為最常見的方式，健康人吸入患者咳嗽、打噴嚏時噴出的飛沫而受感染。直徑小于10um的痰滴可進入肺泡腔，或因其重量輕而漂浮于空氣中較長時間，結(jié)核菌侵襲而機體免疫力不足時，感染后可能發(fā)病。其他感染途徑，如經(jīng)皮膚、消化道、泌菌感染后，在感染個體的機體多種組織內(nèi)形成肉芽腫和干酪樣鈣化灶為特征的慢性傳染病。2.易感人群結(jié)核病主要是人群之間傳播的傳染病，發(fā)生結(jié)核桿菌傳播主要取決于傳染源排3.易感者的自身因素結(jié)核桿菌進入人體，引起易感者機體的復雜反應。易感者的身體和心圍，制止其擴散，使病灶愈合。潛伏期尚不明確，可能為數(shù)天、數(shù)月、數(shù)年。（七）劑量—效應關系傳染源排出的飛沫受壓力和黏度的影響而大小不一。飛沫核直徑為1～10um者在空氣中劑量。不同小鼠株系也有耐受和敏感性程度上的差異。癥、菌體成分和代謝物質(zhì)的毒性，以及機體對菌體成分產(chǎn)生的免疫損傷有關。結(jié)核分枝桿菌可通過呼吸道、消化道或皮膚損傷侵入易感機體，引起多種組織器官的結(jié)必須通過競爭才能生存并和易感細胞黏附。肺泡中無正常菌群，結(jié)核分枝桿菌可通過飛沫微現(xiàn)。現(xiàn)受破壞，釋放出的大量菌在肺泡內(nèi)引起炎癥，稱為原發(fā)灶。標題：結(jié)核分枝桿菌風險評估報告（2）原發(fā)后感染：病灶亦以肺部為多見。病菌可以是外來的（外源性感染）或原來潛伏在病灶內(nèi)（內(nèi)源性感染）。由于機體已有特異性細胞免疫，因此，原發(fā)后感染的特點是病灶多局限。一般不累及鄰近的淋巴結(jié)，被纖維素包圍的干酪樣壞死灶可鈣化而痊愈。若干酪樣結(jié)節(jié)破潰，排入鄰近支氣管，則可形成空洞并釋放大量結(jié)核分枝2.肺外感染部分患者體內(nèi)的結(jié)核分枝桿菌可進入血液循環(huán)引起肺內(nèi)、外播散，如腦、腎結(jié)核，痰菌被咽入消化道也可引起腸結(jié)核、結(jié)核性腹膜炎等。拉伯甘露聚糖、磷脂、某些分泌性蛋白等有關。但在整體水平和細胞水平仍未得到可滿意的解釋病原性毒力因子。其致病性可能與在宿主體內(nèi)頑強增殖和引起機體的病理性免疫反應有表明年內(nèi)發(fā)病率為30%，近年報告降低為10%。我國無確切統(tǒng)計數(shù)字可依據(jù)。在發(fā)病者中近半數(shù)在感染后半年至兩年內(nèi)于機體抵抗力低時發(fā)病。90%的結(jié)核菌感染者可保持終生不發(fā)病。經(jīng)13年230次傳代而獲得的減毒活疫苗株。結(jié)核分枝桿菌的耐藥性變異隨著化療藥物的應用而產(chǎn)生，耐藥利福平藥物結(jié)核分枝桿菌多聯(lián)系ropB基因突變，而異煙肼、吡嗪酰胺多聯(lián)系katG和inhA、pncA基因的突變。一株結(jié)核分枝桿菌可以發(fā)生多到對十幾種藥物的耐藥，印度等國家就陸續(xù)報道了全耐藥結(jié)核分枝桿菌（TDR-TB）。1.在自然環(huán)境中的穩(wěn)定性與對溫度的敏感性在自然條件下結(jié)核分枝桿菌在室內(nèi)陰暗潮濕4～5年。另有資料表明，室內(nèi)的結(jié)核分枝桿菌微滴核約60%～71%，可存活3h，48%～56%中的條件下，使用8～10g/m3甲醛熏蒸12h以上，可有效殺滅空氣中和光滑表面物品上的結(jié)核分枝桿菌。對結(jié)核分枝桿菌污染的室內(nèi)空氣，可用甲醛氣體熏蒸的方法進行終末消毒。標題：結(jié)核分枝桿菌風險評估報告菌對日光敏感，日光照射2h以上可殺死結(jié)核分枝桿菌，紫外線對結(jié)核分枝桿菌有一定殺滅作用，用輻射強度在100ｕw/cm2以上的30w紫外線燈，在相對濕度50%～70%的條件下，照射40min以上，對空氣中結(jié)核分枝桿菌的殺滅效果可達99.9%以上。免疫，如體表屏障、呼吸道的纖毛上皮、肺泡巨噬細胞、嗜中性白細胞、單核細胞、巨噬細地區(qū)的保護力在0%～80%不等，尤其是對HIV感染者，無法接種卡介苗以提供保護。種因素的影響，即感染結(jié)核菌毒力的大小和身體抵抗力的強弱。對已感染結(jié)核菌但沒有發(fā)生知情同意基礎上進行。3.診斷結(jié)核病的診斷分為臨床診斷和實驗室診斷肺結(jié)核病的診斷參照肺結(jié)核診斷標準（ws288-2008）；肺外結(jié)核的診斷依據(jù)臨床癥狀和實驗室結(jié)果進行判斷。（2）實驗室診斷①細菌學檢測細菌學檢測包括涂片顯微鏡檢查、分離培養(yǎng)和藥敏試驗。標本的選擇或相應部位分泌液或組織細胞。病。分離培養(yǎng)的結(jié)果可信度高，一般2～3周內(nèi)肉眼可見菌落，但個別菌需6～8周，檢測時標題：結(jié)核分枝桿菌風險評估報告藥敏試驗是指對分離后的結(jié)核分枝桿菌在耐藥培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，以獲得結(jié)核分支桿菌對抗結(jié)核藥物的敏感情況。藥敏試驗是診斷耐藥結(jié)核病的主要方法，但傳統(tǒng)藥敏試驗需要4周，影響了耐藥結(jié)核病的及時診斷。②免疫學檢測結(jié)核菌素試驗是應用結(jié)核菌素進行皮膚來測定機體對結(jié)核分枝桿菌是種感染。細胞免疫介導的結(jié)核菌γ干擾素釋放試驗（T-cellinterferongammarelease斑點（ELISPOT）法定量檢出受檢者全血或外周血單個核細胞對結(jié)核分枝桿菌特異性抗原的核分枝桿菌的抗體，可以使用ELISA、膠體金等方法，但特異性和敏感性都不高，僅可作為結(jié)核病輔助診工具。③分子檢測通過檢測結(jié)核分枝桿菌或耐藥結(jié)核分枝桿菌特異的基因片段從而推斷結(jié)需要進行進一步的應用評價。3.治療結(jié)核分枝桿菌是能侵襲機體任何組織、器官引起進行性疾病的致病菌。人型結(jié)核強增殖引起炎癥反應，以及誘導機體產(chǎn)生遲發(fā)性變態(tài)反應性損傷有關。結(jié)核分枝桿菌可粒性肺結(jié)核、浸潤性肺結(jié)核和空洞性肺結(jié)核。結(jié)核分枝桿菌對一般抗生素不敏感。對鏈球菌素、異煙肼、利福平、乙胺丁醇等藥物敏感。對于非耐藥結(jié)核病有WHO推薦的DOTS發(fā)現(xiàn)治療和管理策略。按照標準的DOT規(guī)定，及時就診、及時確診、規(guī)范治療和管理，家庭以及社會均造成巨大的經(jīng)濟壓力。耐藥結(jié)核病的臨床表現(xiàn)與普通結(jié)核病無明顯差外耐藥結(jié)核病的臨床表現(xiàn)據(jù)不同發(fā)病部位而不同。耐藥結(jié)核病的診斷和治療需到市級以上的專業(yè)或定點結(jié)核病醫(yī)療機構進行診治，通過標準化治療方案、個體治療方案和經(jīng)驗治療方案的結(jié)合，以及特殊治療措施的實施能達到較好的治療效果。1.實驗室本身事故BSL-2及BSL-3實驗室中尚未發(fā)生過結(jié)核分枝桿菌感染事故。2.有關實驗室已發(fā)生的事故迄今為止未見有關證實是由于在實驗室操作結(jié)核桿菌而感染人標題：結(jié)核分枝桿菌風險評估報告二、風險評估與風險控制2.實驗操作過程（1）菌株的傳代①操作過程②風險因素（見表8-20）。表8-20菌株的傳代過程中可能出現(xiàn)的風險及控制措施操作險體濺出出破碎生概率較低中較低較低風險控制措施整個活動中動作輕柔，以防止磨菌管破裂吸管動作輕柔險低風險低風險低分險低分險①操作過程理鹽水后，加幾滴到磨菌管中。標題：結(jié)核分枝桿菌風險評估報告②風險因素（見表8-21）。表8-21菌懸液制備過程中可能出現(xiàn)的風險及控制措施序號序號實驗操作落險體濺出出破碎生概率較低中風險控制措施動作輕柔，勿劇烈操作，以防止液體濺出動作輕柔，勿劇烈操作，以防止菌落濺出動作輕柔，防止磨菌管破裂殘留風險低風險低風險低分險（4）菌液稀釋和接種①操作過程的菌液，平移至2ml滅菌生理鹽水中，即稀釋10-2mg/mL菌液；用同樣方法再進行100線法均勻接種至作為對照的中性改良羅氏培養(yǎng)基及含藥培養(yǎng)基表面，應注意使菌液盡可②風險因素（見表8-22）。表8-22菌懸液稀釋和接種過程中可能出現(xiàn)的風險及控制措施序序號12操作稀釋接種可能風險生氣溶膠液體濺出風險發(fā)生概率中較高風險控制措施吸管操作輕柔，勿劇烈操作，以防止氣溶膠殘留風險低風險低風險①操作過程可能風險稱全柜生物安全柜發(fā)生可可能風險稱全柜生物安全柜發(fā)生可能對實驗人員柜內(nèi)盡量少放儀器和物品，不要阻塞后面氣口處的空氣流控制措施培養(yǎng)箱離心機振蕩器二氧化碳泄漏；電源短路；培養(yǎng)物產(chǎn)生氣溶膠離心管發(fā)生破裂氣溶膠人員接觸污周圍無液體存在2.定期更換二氧化碳培養(yǎng)箱的空氣濾膜3.嚴格規(guī)范操作，定期檢查配備離心機有安全套筒，可轉(zhuǎn)移到生物安全柜內(nèi)處理人員接觸污人員樣品接必須使用塑料的器皿，因為玻璃可能會破裂釋放出感染性標題：結(jié)核分枝桿菌風險評估報告②風險因素（見表8-23）。表8-23菌懸液培養(yǎng)過程中可能出現(xiàn)的風險及控制措施序號序號實驗操作可能風險破碎概率低移送培養(yǎng)管時動作謹慎殘留風險低風險對于生物安全柜和壓力蒸汽滅菌器，每年有專人維護、檢測；每年舉辦兩次周期性培訓，確驗活動儀器設備相關風險識別與控制見表8-24。表8-24XXXBSL-3實驗室結(jié)核分枝桿菌實驗操作儀器設備風險識別與控制措施后果描述性不大可能及實驗室的高度危險盡量減少操作者后面的人員走動，操作者不要頻繁移動及揮動手臂以免破壞定向氣流，前面的空氣柵格不要被吸管或其他材料擋住；生物安全柜的風扇在工作開始前及操作結(jié)束后至少要再運行5min。實驗開始前開啟安全柜排風，待壓力穩(wěn)定后再進行實驗可能性低染可能性低染釋放可能性低標題：結(jié)核分枝桿菌風險評估報告滅菌器膠、泄露和容器破裂保存管泄露人員接觸高溫部位，發(fā)生燙傷接種環(huán)滅菌低，不能滅菌可能性極低可能性中等觸污染人員樣品接觸污染人員發(fā)生燙傷接種環(huán)滅菌不徹底物質(zhì)，而且可能傷及操作者。在操作結(jié)束后，容器應在生物安全柜里才能重新啟動操作培訓，做好個人防護操作培訓，做好個人防護定期檢修測項目。工作人員多年從事結(jié)核病實驗室工作，具有扎實的理論技術和豐富的實踐經(jīng)驗。所有進入BSL-3實驗室人員都需經(jīng)過考察，在近期內(nèi)均接受過微生物操作技術與實驗室本實驗室根據(jù)我中心當前及將來業(yè)務開展需要，組織制訂人員培訓計劃。在常規(guī)微生物的理解力。工作人員要充分了解其實驗工作的性質(zhì)和特點，并正確使用個人防護裝備。進入BSL-3實驗室須得到實驗室負責人的批準，應詳細登記出入時間，并保證兩名以上的人員同時進入。實驗人員素質(zhì)可能存在的風險及控制措施見表8-25.表8-25XXXBSL-3實驗室結(jié)核分枝桿菌實驗操作人員風險識別與控制明細表潛在風潛在風人員健康水平發(fā)生可能性技術培訓不足或操作不熟練導致誤操作實驗人員身體狀況不佳或患有基礎疾病后果嚴中控制措施關培訓及演練BSL-3實驗室前需測量體溫，體溫高于37℃者不能進入標題：結(jié)核分枝桿菌風險評估報告未經(jīng)授未經(jīng)授未經(jīng)授權人員進權人員入BSL-3實驗室登記出入時間，并保證兩名以上的人員同時進入（四）意外事件、事故帶來的風險實驗室意外事件包括感染性物質(zhì)的破碎及在臺面、地面和其他表面溢出。感染性物質(zhì)濺入眼睛，皮膚刺傷、誤接觸污染物（如標識不清、消毒不徹底等原因）、皮膚刺傷是發(fā)生概罩及防護服，帶高質(zhì)量雙層手套，有接觸污染物時應立即消毒并更換新的外層手套。同時，對工作臺面及發(fā)生濺灑的表面及時進行可靠的消毒滅菌。1.工作人員實驗活動的非生物風險（化學、物理、輻射、電氣）①電氣設備的設計及制造不符合相關安全標準的要求。②需要備用電源的設備未連接備用電源。完成電氣安全測試和設備符合安全使用要求之前使用。④電氣設備使用人員未接受正確操作培訓，操作方式不正確，降低電氣安全性。⑤電氣設備使用人員未定期檢查設備的可能引起電氣故障的破損。⑥非專業(yè)人員從事電氣設備和電路工作。⑦未經(jīng)授權開展需要授權的工作。⑧未采取措施對設備去污染以減少維護人員受化學或生物性污染的風險。⑨對所有電器設備未定期進行檢查和測試，包括接地系統(tǒng)。生電流超負荷從而避免火災。漏電保護器用于保護人員而避免觸電。?實驗室的所有電器未接地，未采用三相插頭。?實驗室的所有電器設備和線路不符合國家電氣安全標準和規(guī)范。②化學品的毒性作用在操作某些化學品或吸入它們的蒸汽時會對人體健康產(chǎn)生不良影響。除液、肺、肝臟、腎臟和胃腸道系統(tǒng)，以及其他器官和組織造成不良影響或嚴重損害，而有些化學品具有致癌性或致畸性。似的癥狀，并使出現(xiàn)事故的可能性增大。標題：結(jié)核分枝桿菌風險評估報告④長期反復接觸許多液態(tài)有機溶劑可能造成皮膚損害，這可能是由于有機溶劑的去脂效果，另外還可能出現(xiàn)過敏和腐蝕癥狀。⑤實驗室未按要求保存滿足日常使用量的化學品。大量的化學品未儲存在專門指定的房間或⑥相容化學品未分類存放。的猛烈爆炸。因此，疊氮化物不應該與銅或鉛（如污水管以及