金銀花提取工藝的改進(jìn)

金銀花提取工藝的改進(jìn)

金銀花是薔薇科植物科的一個(gè)干燥的花蕾和花朵。為臨床常用中藥,其主要藥用有效成分是綠原酸和異綠原酸。綠原酸是一種由咖啡酸和奎尼酸縮合而成的縮酚酸,具有抗菌、增高白細(xì)胞、抗腫瘤、清除自由基等作用,易溶于水、醇溶液和丙酮等溶劑,其分子結(jié)構(gòu)中有酯鍵、不飽和雙鍵及多元酚等三個(gè)不穩(wěn)定部分,提取時(shí)不能高溫、強(qiáng)光及長(zhǎng)時(shí)間加熱。藥理學(xué)證明,綠原酸具有保護(hù)心血管的活性。人體的低密度脂蛋白被氧化是引起心血管病的一個(gè)重要原因,綠原酸能有效保護(hù)人體的低密度脂蛋白中α-tocopherol,對(duì)其氧化起抑制作用。中藥制劑中,目前制備金銀花提取物多采用煎煮法、浸漬法和回流法等。其中最常見(jiàn)的方法為煎煮提取法,但由于提取條件沒(méi)有優(yōu)化,綠原酸提取得率較低,金銀花得不到充分利用,導(dǎo)致資源浪費(fèi)。我公司生產(chǎn)的金芪降糖顆粒、銀黃顆粒等產(chǎn)品均使用到金銀花。在產(chǎn)品生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn),使用傳統(tǒng)的水提取及40%乙醇(pH=6)提取出的綠原酸提取率少,得率極不穩(wěn)定,為提高綠原酸提取率,充分使用藥材,對(duì)制備金銀花提取物的工藝方法進(jìn)行了探討。1材料和設(shè)備1.1綠原酸對(duì)照品/藥品微生物檢定所金銀花,藥材中綠原酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.5%,由河南省宛西制藥股份有限公司質(zhì)量控制中心檢測(cè);綠原酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,純度98.7%);HPLC用水為超純水,乙醇為食用級(jí),其他試劑為分析純,均經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過(guò)后使用。1.2酶活劑1100Series高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司)、SHZ-D循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限公司),生產(chǎn)用3m3醇提罐(江蘇沙家浜化工設(shè)備公司),2000L球形濃縮器(上海德科制藥設(shè)備廠)。2方法和結(jié)果2.1在正交試驗(yàn)中選擇最佳提取方法2.1.1乙醇量、回流時(shí)間根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道及生產(chǎn)實(shí)際情況,影響綠原酸提取效率的因素有2個(gè),分別是含乙醇量(A)、回流時(shí)間(B)。采用L9(34)正交試驗(yàn)安排金銀花的提取工藝,以藥材中綠原酸提取率作為評(píng)價(jià)指標(biāo),選擇溶劑含乙醇量、回流時(shí)間2個(gè)因素,每個(gè)因素設(shè)3個(gè)水平,因素水平見(jiàn)表1。2.1.2提取劑為正交因素表取炮制好的金銀花藥材,具塞錐形瓶中,分別按正交因素表制備各樣品,稱定,提取后取出,冷卻后補(bǔ)回原質(zhì)量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,離心,備用。2.1.3綠色原酸測(cè)定分別吸取上述各樣品溶液10μL注入高效液相色譜儀,依法測(cè)定綠原酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。結(jié)果見(jiàn)表2,方差分析見(jiàn)表3。2.1.4花中綠原酸的提取由表2可知,比較極差可直觀看出,因素B的極差最小,數(shù)據(jù)處理時(shí)作為最小誤差項(xiàng)。由表2和表3可知,各因素對(duì)提取金銀花中綠原酸的影響程度為:A>B,因素A有顯著性差異,即含乙醇量對(duì)提取率有顯著性影響。因此,對(duì)綠原酸提取的最佳工藝組合為A3B2,即選用70%乙醇溶液12倍量,提取兩次,每次1h。溶劑濃度和提取時(shí)間對(duì)有效成分提取均有影響,通過(guò)對(duì)以上因素的分析,可以看出提取時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)也不宜太短。下一步將通過(guò)中試生產(chǎn)試驗(yàn),進(jìn)一步驗(yàn)證該提取工藝的穩(wěn)定性。2.2測(cè)試測(cè)試2.2.1提取液的制備以最佳工藝A3B2組合,取金銀花300kg,分別用70%乙醇7倍、5倍回流提取兩次,分別為1h、1h,提取液合并過(guò)濾,濃縮至一定比例。制備得4批樣品:樣1、樣2、樣3、樣4。2.2.2綠色原酸測(cè)定分別吸取上述各樣品溶液10μL注入高效液相色譜儀,依法測(cè)定綠原酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。并與實(shí)際生產(chǎn)中數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比,結(jié)果見(jiàn)表4。2.2.3原提取方案的確定由表4可知,驗(yàn)證試驗(yàn)方案結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了該試驗(yàn)方案的穩(wěn)定性,同時(shí)對(duì)比原生產(chǎn)提取工藝結(jié)果,可以看出本試驗(yàn)方案對(duì)比原提取方案綠原酸提取率提高了20%。不管藥材中綠原酸量如何,相同的提取工藝提取綠原酸的提取率穩(wěn)定不變,同時(shí)在生產(chǎn)過(guò)程中,藥液濃縮相對(duì)較快,同時(shí)回收后的乙醇經(jīng)過(guò)調(diào)比,可以繼續(xù)用于后續(xù)的產(chǎn)品提取,可以重復(fù)利用,節(jié)約了成本,減少了不必要的浪費(fèi)和廢液的排放。3不同ph值的提取采用正交試驗(yàn)法對(duì)樣品的提取條件進(jìn)行了優(yōu)化,確定了采用70%乙醇為提取液,提取兩次,每次各1h的樣品提取方法。從以上試驗(yàn)可以得出,用70%乙醇提取金銀花,提高了原藥材中綠原酸提取率,同時(shí)也減少了不必要的浪費(fèi),節(jié)約了資源,試驗(yàn)結(jié)果表明,該工藝穩(wěn)定,可控易行。生產(chǎn)用40%乙醇(pH=6)提取,需要用鹽酸調(diào)pH值為6,藥液中帶入了CL-,很難清除掉;藥典中用80℃溫水溫浸,濃縮過(guò)程中容易破壞綠原酸成分。試驗(yàn)方案用70%乙醇提取解決了以上問(wèn)題,所用70%乙醇無(wú)需調(diào)pH值,便于操作;70%乙醇易回收,回收溶劑可以重復(fù)利用,且濃縮過(guò)程中溫度不會(huì)過(guò)高,保證了綠原酸成分的相對(duì)穩(wěn)定性。如果用于綠原酸純品的提取,可多重復(fù)提取幾次,使提取率達(dá)到百分之九十以上。金銀花提取過(guò)程受多種因素影響,70%乙醇提取時(shí)溫度變化不大,同時(shí)可以提取出更多的有效成分。綠原酸為熱敏性物質(zhì),溫度過(guò)高,會(huì)造成綠原酸的分解,這就要求提取溫度不能過(guò)高,70%乙醇提取時(shí)溫度穩(wěn)定在80℃左右,保證了綠原酸不被破壞,并能保證有效物質(zhì)的充分溶出;濃