鐵蛋白操作規(guī)程SOP

文件編號(hào)：YHBE-JYK-MYS-003標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程鐵蛋白測(cè)定編制人：劉鳳婷生效日期：2018年1月1日審核人：鐘劍版本號(hào)/修訂號(hào)：1/4批準(zhǔn)人：張延亮發(fā)布部門：檢驗(yàn)科頁(yè)碼數(shù)：9-12頁(yè)鐵蛋白測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1檢驗(yàn)申請(qǐng)單獨(dú)檢驗(yàn)項(xiàng)目申請(qǐng)：鐵蛋白測(cè)定（縮寫(xiě)FERR）；組合檢驗(yàn)項(xiàng)目申請(qǐng)：貧血檢查組合或腫瘤標(biāo)志物檢查組合；臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗(yàn)申請(qǐng)。2標(biāo)本采集與處理2.1標(biāo)本米集2.1.1常規(guī)靜脈采血約2ml,不抗凝，置普通試管中?；虿捎煤蛛x膠的真空采血管。2.1.2檢驗(yàn)申請(qǐng)單和血標(biāo)本試管標(biāo)上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識(shí)符。2.1.3急診標(biāo)本米集后，在檢驗(yàn)申請(qǐng)單上填寫(xiě)標(biāo)本米集時(shí)間。2.1.4標(biāo)本采集后與檢驗(yàn)申請(qǐng)單一起及時(shí)運(yùn)送至檢驗(yàn)科。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對(duì)不合格標(biāo)本予以拒收。2.1.5下列標(biāo)本為不合格標(biāo)本2.1.5.1標(biāo)本量不足：少于0.3ml的全血標(biāo)本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對(duì)于測(cè)定和吸樣有干擾的標(biāo)本：如近期使用鼠源性單克隆抗體診斷后米取。2.1.5.3無(wú)法確認(rèn)標(biāo)本與申請(qǐng)單對(duì)應(yīng)關(guān)系的。2.1.5.4其他如標(biāo)識(shí)涂改、標(biāo)本試管破裂等。2.2標(biāo)本保存2.2.1接收標(biāo)本后在30min內(nèi)將標(biāo)本離心分離出血清，避免溶血。離心必須達(dá)到4000rpmX15min，離心后的血清中不能含有顆粒物或微量纖維蛋白。標(biāo)本保存時(shí)間：室溫（15?25°C）下可穩(wěn)定8h，普通冰箱中（2?8°C）穩(wěn)定48h。需較長(zhǎng)時(shí)間保存應(yīng)將血清存放于-20C。冰凍標(biāo)本僅可凍融一次。2.2.3已完成測(cè)試的標(biāo)本保持完整的識(shí)別號(hào)，置2?8C冰箱內(nèi)保存7d。2.3標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)2.3.1米血前使受檢者保持平靜、松弛、避免劇烈活動(dòng)。2.3.2米血后應(yīng)使血液充分凝固，不建議使用抗凝的血液標(biāo)本。3方法原理鐵蛋白測(cè)定采用雙位點(diǎn)加心化學(xué)發(fā)光免疫分析法，其檢測(cè)原理來(lái)如下：第一步：將標(biāo)本與包被著抗FERR抗體的超順磁性磁珠以及抗FERR抗體-堿性磷酸酶標(biāo)記物添加到反應(yīng)管中，經(jīng)過(guò)孵化，標(biāo)本中的FERR和包被在磁珠上的抗FERR抗體結(jié)合，同時(shí)FERR抗體-堿性磷酸酶標(biāo)記物與樣本中FERR另一位點(diǎn)結(jié)合。反應(yīng)完成后，磁場(chǎng)吸附磁珠，洗去未結(jié)合的物質(zhì)。第二步：將化學(xué)發(fā)光物添加到反應(yīng)管內(nèi)，發(fā)光底物（AMPPD）被堿性磷酸酶所分解，脫去一個(gè)磷酸基，生成一個(gè)不穩(wěn)定的中間產(chǎn)物，該中間產(chǎn)物通過(guò)分子內(nèi)電子轉(zhuǎn)移產(chǎn)生間氧苯甲酸甲酯陰離子，處于激發(fā)態(tài)的間氧苯甲酸甲酯陰離子從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，再通過(guò)光電倍增管對(duì)反應(yīng)中所產(chǎn)生的光子數(shù)進(jìn)行測(cè)量。所產(chǎn)生光子數(shù)與樣本內(nèi)鐵蛋白的濃度成正比。樣本內(nèi)分析物的量油校準(zhǔn)曲線來(lái)確定。文件編號(hào)：YHBE-JYK-MYS-003標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程鐵蛋白測(cè)定編制人：劉鳳婷生效日期：2018年1月1日審核人：鐘劍版本號(hào)/修訂號(hào)：1/4批準(zhǔn)人：張延亮發(fā)布部門：檢驗(yàn)科頁(yè)碼數(shù)：9-12頁(yè)4試劑及其他用品4.1試劑：邁瑞專用鐵蛋白測(cè)定試劑盒，由公司出品。未打開(kāi)的試劑包保存于2?8°C避光保存穩(wěn)定保存18個(gè)月，不可凍存。開(kāi)啟的試劑包載入系統(tǒng)中可使用28d。4.2試劑盒組分試劑1(Ra):組分：包被著抗FERR抗體的超順磁性微粒，懸浮于緩沖液，含防腐劑。試劑2(Rb)：組分：抗FERR抗體-堿性磷酸酶標(biāo)記物稀釋于緩沖液，含防腐劑。試劑3(Rc)組分：樣本處理液，含防腐劑。4.3其他試劑與用品4.3.1化學(xué)發(fā)光底物4.3.2清洗緩沖液、反應(yīng)杯等。5校準(zhǔn)品與校準(zhǔn)模式5.1校準(zhǔn)品：深圳邁瑞公司提供的FERR校準(zhǔn)液，需貯2?8C。5.2校準(zhǔn)類型和校準(zhǔn)點(diǎn)數(shù)目：非線性模式，6個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)。5.3校準(zhǔn)周期：在同一批號(hào)試劑的使用效期內(nèi)校準(zhǔn)曲線有效，但在間隔28d后需要重新校準(zhǔn)。每當(dāng)：①更換試劑批號(hào)或出現(xiàn)質(zhì)控漂移時(shí)；②儀器進(jìn)行全面保養(yǎng)后；③儀器的重要零件更換后，進(jìn)行一次校準(zhǔn)。5.4校準(zhǔn)液重建方法：液體試劑，直接使用。6質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則6.1質(zhì)控品：采用深圳邁瑞公司提供配套的質(zhì)控品。6.2質(zhì)控液重建方法：液態(tài)質(zhì)控血清，即開(kāi)即用，無(wú)需特殊準(zhǔn)備。6.3質(zhì)控品測(cè)定：在每一批標(biāo)本中測(cè)定質(zhì)控血清一次。6.4質(zhì)控規(guī)則：采用L-J質(zhì)控圖，以土3s為失控限。標(biāo)準(zhǔn)差由本室實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得出。6.5如出現(xiàn)失控情況，按室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序采取各種有效的糾正措施及時(shí)糾正，并在確認(rèn)重新回復(fù)到控制狀態(tài)后開(kāi)始標(biāo)本檢測(cè)。7適用儀器深圳邁瑞公司CL-1200i自動(dòng)發(fā)光免疫分析儀。8標(biāo)本檢測(cè)步驟裝載試劑…進(jìn)行校準(zhǔn)…進(jìn)行質(zhì)控…輸入標(biāo)本檢測(cè)項(xiàng)目…加載標(biāo)本f標(biāo)本測(cè)定…結(jié)果復(fù)核…報(bào)告9主要分析參數(shù)無(wú)須輸入操作參數(shù)，儀器根據(jù)預(yù)設(shè)的分析項(xiàng)目參數(shù)和試劑條碼的信息自動(dòng)進(jìn)行分析。標(biāo)本量15此。10結(jié)果計(jì)算儀器根據(jù)校準(zhǔn)曲線自動(dòng)給出每個(gè)標(biāo)本測(cè)定結(jié)果。測(cè)定結(jié)果單位以ng/mL表示。11檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及范圍11.1結(jié)果的報(bào)告文件編號(hào)：YHBE-JYK-MYS-003標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程鐵蛋白測(cè)定編制人：劉鳳婷生效日期：2018年1月1日審核人：鐘劍版本號(hào)/修訂號(hào)：1/4批準(zhǔn)人：張延亮發(fā)布部門：檢驗(yàn)科頁(yè)碼數(shù)：9-12頁(yè)11.1.1結(jié)果經(jīng)審核后，確認(rèn)準(zhǔn)確無(wú)誤后發(fā)出報(bào)告。11.1.2報(bào)告單上標(biāo)明結(jié)果的計(jì)量單位、參考區(qū)間、報(bào)告日期、時(shí)間、操作者和審核者簽名，并有與申請(qǐng)單相同的醫(yī)學(xué)信息。11.1.3如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響的也在報(bào)告單上指出。11.2報(bào)告范圍：12.00?135.00ng/ml，超過(guò)此范圍的結(jié)果報(bào)告時(shí)必須附有證明該結(jié)果準(zhǔn)確可靠的文字說(shuō)明，例如：系根據(jù)標(biāo)本稀釋后重復(fù)測(cè)定的結(jié)果。12操作性能精密度：批內(nèi)CVV4.0%。分析范圍：0.5~1500ng/ml。靈敏度：0.5ng/ml。方法的有限性及干擾因素：膽紅素W5mg/L、TGW9g/L、HbW3g/L在檢測(cè)允許的精密度范圍內(nèi)對(duì)結(jié)果沒(méi)有影響。13參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平參考值（血清）：成年：12?135ng/mL14臨床意義14.1鐵蛋白分子是由一個(gè)分子量為45000的蛋白質(zhì)外殼和含鐵的核心組成。肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和肝、脾、骨髓的紅細(xì)胞再生中心（日￡細(xì)胞）存在高濃度鐵蛋白，在這些組織中的鐵蛋白是人體中過(guò)多鐵的主要儲(chǔ)存場(chǎng)所和紅細(xì)胞再生中心，可防止高濃度游離鐵的蓄積和中毒。鐵蛋白也存在于人血漿中，血清鐵蛋白濃度變化與人鐵貯存有關(guān)，是檢測(cè)人體鐵代謝的良好參考指標(biāo)。14.2正常成人的血清鐵蛋白水平為100~300ng/ml，但因性別和年齡而不同。女性的鐵蛋白水平與年齡有明顯的正相關(guān)，但男性無(wú)這種關(guān)系。男性血清鐵蛋白的平均濃度一般是育齡期女性的三倍。14.3血清鐵蛋白水平是缺鐵性貧血的敏感指標(biāo)，可早期檢出缺鐵性貧血。血清鐵蛋白濃度低于10ng/mL或15ng/mL為缺鐵性貧血評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。濃度高于300ng/mL或400ng/mL為鐵超負(fù)荷診斷標(biāo)準(zhǔn)。典型血色沉著病患者血清鐵蛋白濃度在1000ng/mL到5000ng/mL之間。14.4血清鐵蛋白水平還是一個(gè)鐵劑治療療效的評(píng)價(jià)指標(biāo)。14.5血清鐵蛋白水平升高還可見(jiàn)于急、慢性肝病，慢性腎功能衰竭，和某些腫瘤時(shí)。受損肝臟細(xì)胞釋放出的鐵蛋白、血漿鐵蛋白清除系統(tǒng)受到破壞、腫瘤細(xì)胞合成的鐵蛋白和血細(xì)胞生成導(dǎo)致的鐵貯存增加都會(huì)促使血清鐵蛋白水平的升高。15結(jié)果審核以及與相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。15.2審核者認(rèn)真審核每一個(gè)測(cè)定結(jié)果，對(duì)發(fā)出報(bào)告結(jié)果的可靠性負(fù)責(zé)，并在報(bào)告單的審核者處簽名。15.3相關(guān)項(xiàng)目：與其他貧血相關(guān)指標(biāo)如RBC、HCT、HB以及EPO、葉酸等的關(guān)系，如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析與查找原因16有關(guān)引用程序與文件16.1 CL-1200i自動(dòng)發(fā)光免疫分析儀儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。16.2免疫檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序。16.3檢驗(yàn)結(jié)果審核程序。文件編號(hào)：YHBE-JYK-MYS-003標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程鐵蛋白測(cè)定編制人：劉鳳婷生效日期：2018年1月1日審核人：鐘劍版本號(hào)/修訂號(hào)：1/4批準(zhǔn)人：張延亮發(fā)布部門：檢驗(yàn)科頁(yè)碼數(shù)：9-12頁(yè)16.4標(biāo)本送檢和接收程序。17參考文獻(xiàn)17.1陸永綏，張偉民主編.臨床檢驗(yàn)管理與技術(shù)規(guī)程.杭州:浙江大學(xué)出版社，2004.17.2鐵蛋白測(cè)定試劑說(shuō)明書(shū)。17.3葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第三版）.東南大學(xué)出版社