谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力測(cè)定

谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力測(cè)定（改良賴氏法）一，實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆昭灞彼岚被D(zhuǎn)移酶（ALT，也稱谷丙轉(zhuǎn)氨酶，GPT）活性測(cè)定的原理。熟悉轉(zhuǎn)氨酶活性測(cè)定的操作方法。了解測(cè)定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性的臨床意義。二，相關(guān)理論體內(nèi)蛋白質(zhì)處于不斷降解與合成的動(dòng)態(tài)平衡食物蛋白質(zhì)經(jīng)消化吸收的氨基酸和體內(nèi)組織蛋白質(zhì)降解產(chǎn)生的氨基酸混在一起，分布于體內(nèi)各處，作為參與代謝的氨基酸庫氨基酸分解代謝的主要反應(yīng)是脫氨基作用肝臟的脫氨基方式有:氧化脫氨基，氨基轉(zhuǎn)換作用及聯(lián)合脫氨基氨基轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)氨酶：催化氨基酸與酮酸之間氨基轉(zhuǎn)移的一類酶RiIH—C—NHRiIH—C—NH2!COOH4-COOHRi1c=oICOOHH—C—NH2COOH谷丙轉(zhuǎn)氨酶glutamic-pyruvictransminaseGPT又稱丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶alanineaminotransferaseALTCOOHI

ch2ch2+ch-nh2三.磅氨作用的意義COOHIch2c=oICOOHGOT.COOHICH2ch2+c=oICOOHCOOHIch7I-CH-NH.I-COOH正常時(shí)轉(zhuǎn)氨酶主要分布在細(xì)胞內(nèi)，血清中酶活力很低 酮戊二酸 天冬氨酸GOT以心臟細(xì)胞中活力最大，其次為肝臟細(xì)胞GPT則以肝臟細(xì)胞中活力最大谷丙轉(zhuǎn)氨酶的臨床意義如果GPT血清值超過正常上限2—3倍，并持續(xù)兩周以上，表明有肝膽疾病存在的可能。參考范圍：0-50U/L,卡門氏單位0-25KarU四?酶活力單位（U,activeunit）國際單位：61年酶學(xué)委員會(huì)建議使用統(tǒng)一單位，在特定條件下，1分鐘內(nèi)轉(zhuǎn)化1mmol底

物所需的酶量，稱為一個(gè)國際單位（IU,又稱U）1個(gè)卡門氏單位的定義是：在溫度25°C,pH7.4,波長340nm,光徑lcm的條件下，1ml血清使反應(yīng)液的吸光度下降0.001的轉(zhuǎn)氨酶活性?？ㄩT氏單位和國際單位換算1IU/L=2.1KarU五，實(shí)驗(yàn)原理血清中的丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT），在37C、pH7.4的條件下，可催化基質(zhì)（底物）液中的丙氨酸與a-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸。ch3COOHch3COOHOOHh2h2n-c-hALTOOH3兀、OOH3兀、pH7.4OOH+h2N-C-Hocs-iL-丙氨酸底物 丁酮戊二酸L-丙氨酸底物 丁酮戊二酸曠丙酮酸產(chǎn)物 L-卷氨酸生成的丙酮酸可與起終止和顯色作用的2,4二硝基苯肼發(fā)生加成反應(yīng)，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，進(jìn)而在堿性環(huán)境中生成紅棕色的苯腙硝醌化合物，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與丙酮酸的生成量，亦即與ALT活性的高低成正比關(guān)系。據(jù)此與同樣處理的丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液相比較，便可算出或通過標(biāo)準(zhǔn)曲線查出血清中ALT的活性六，試劑盒組成成份（R1）基質(zhì)液L-丙氨酸及a-酮戊二酸（R2）顯色劑2,4-二硝基苯肼（R3）NaOH標(biāo)準(zhǔn)液丙酮酸鈉七，實(shí)驗(yàn)步驟血清GPT活性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以各管酶活力單位的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線圖。試劑（“1）0123蒸餾水100100100100標(biāo)準(zhǔn)液050100150R1基質(zhì)液500450400350相當(dāng)于酶活力（KarU）0285797

R2顯色劑 500 500 500 500混勻，37°C恒溫20分鐘R3Na0H5005000500050000混勻，室溫恒定3分鐘，505nm波長，0號(hào)管調(diào)零，測(cè)定各管吸光度，制作工作曲線。血清GPT活性測(cè)定試劑（“l(fā)）空白（B）測(cè)定（U）樣本—100蒸餾水100—R1基質(zhì)液500500混勻，37C恒溫30分鐘R2顯色劑500500混勻，37C恒溫20分鐘R3NaOH5