微生物檢測(cè)培訓(xùn)

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-無(wú)菌操作與GLP學(xué)習(xí)目的Explaintheimportanceofasepsisinthemicrolab/無(wú)菌的重要性Explainthemethodsusedtosterilizeequipment/設(shè)備滅菌的方法Identifywaystoprepareasepticworkplace/無(wú)菌工作區(qū)域的準(zhǔn)備Identifypracticeforaseptictechniqueduringtestingprocess/實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的無(wú)菌技術(shù)Explainhowtosetupalabsoitpromotesasepticpracticeandsafety/實(shí)驗(yàn)室布局Identifywaystoensuresafetywhileworkinginalab/安全工作主要內(nèi)容介紹無(wú)菌技術(shù)無(wú)菌的過(guò)程實(shí)驗(yàn)的無(wú)菌技術(shù)實(shí)驗(yàn)室布局GLP要點(diǎn)安全工作無(wú)菌的重要性第一章在微生物實(shí)驗(yàn)室,必須達(dá)到一定程度的無(wú)菌狀態(tài),免于微生物污染.假如在一個(gè)骯臟的實(shí)驗(yàn)室或者早先打翻過(guò)樣品的地方作微生物實(shí)驗(yàn),引入新的微生物污染樣品的幾率是很大的.微生物的實(shí)驗(yàn)可以分為兩大部分:準(zhǔn)備培養(yǎng)基和樣品檢驗(yàn).事實(shí)上,保持整個(gè)實(shí)驗(yàn)室清潔是非常重要的,這樣就不用在滅菌前擔(dān)心太多了,然而,滅菌后必須保證樣品或者培養(yǎng)基免受污染.其實(shí),可以把滅菌想像成”一扇門”,在培養(yǎng)基中或者一些設(shè)備比如吸管的微生物都在滅菌過(guò)程中被殺死了,沒(méi)有微生物困擾實(shí)驗(yàn)了.必須保證滅菌后的環(huán)境(門后的部分)的潔凈,杜絕滅菌后的培養(yǎng)基和設(shè)備受到污染.無(wú)菌技術(shù)–高壓濕熱滅菌(Autoclave)要點(diǎn)描述原理在壓力下產(chǎn)生的濕熱的蒸汽殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)體和孢子.密封滅菌鍋必須密閉以阻隔外部空氣,

避免空氣的存在會(huì)影響壓力并降低滅菌鍋里面的溫度滅菌壓力在滅菌國(guó)內(nèi),合適的滅菌溫度是通過(guò)壓力達(dá)到的,

壓力對(duì)于滅菌沒(méi)有效用但是使蒸汽溫度上升.對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)操作來(lái)說(shuō),15lbs/inch2時(shí)的1210C并趕走所有空氣可以達(dá)到滅菌的效果滅菌時(shí)間當(dāng)?shù)竭_(dá)一定的溫度和壓力時(shí),

需要保持一定的時(shí)間來(lái)達(dá)到效果,為了殺滅微生物,1210C必須保持至少15分鐘培養(yǎng)基的滅菌大部分情況下,實(shí)驗(yàn)室配置培養(yǎng)基后應(yīng)滅菌,滅菌時(shí)應(yīng)根據(jù)供應(yīng)商指導(dǎo),

使用合適的溫度時(shí)間;有些培養(yǎng)基不適合滅菌的.器皿的滅菌當(dāng)滅菌那些器皿時(shí),

需要考慮使用數(shù)量,比如,一天用10根吸管,在滅菌時(shí),一般就可以以10根為一包,這樣可以減低器皿在使用過(guò)程中遭受微生物的污染的可能性.滅菌條在滅菌過(guò)程中,可以用滅菌條來(lái)監(jiān)控效果,滅菌條在滅菌前是有顏色的,滅菌后會(huì)變成黑色.重新滅菌假如一次滅菌無(wú)效,可以重新進(jìn)行滅菌過(guò)程,但是,培養(yǎng)基是不可以進(jìn)行第二次滅菌的,應(yīng)拋棄.儲(chǔ)存滅菌完成后,培養(yǎng)基和器皿應(yīng)妥善儲(chǔ)存.一般來(lái)說(shuō),培養(yǎng)基應(yīng)存放于避光的潔凈空間,同時(shí)應(yīng)參照供應(yīng)商的指示.

第二章無(wú)菌技術(shù)–過(guò)濾(Filtration)要點(diǎn)描述簡(jiǎn)述物理分離方法,使用高效過(guò)濾將微生物從液體培養(yǎng)基分離使用于對(duì)熱敏感的培養(yǎng)基和化學(xué)品,

比如,當(dāng)需要酒石酸來(lái)調(diào)節(jié)OSA的酸度時(shí)由于不需要加熱和冷卻過(guò)程,過(guò)濾比高溫濕熱滅菌省時(shí)間,過(guò)濾頭0.2微米的過(guò)濾頭可以分離所有的細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)體,

把它安裝在針筒末端.第二章無(wú)菌技術(shù)能夠保持滅過(guò)菌的培養(yǎng)基,器皿免受微生物污染保證實(shí)驗(yàn)的有效性第二章無(wú)菌過(guò)程注意點(diǎn)要點(diǎn)描述綜述一旦培養(yǎng)基或者器皿經(jīng)過(guò)滅菌過(guò)程,這種滅菌狀態(tài)應(yīng)保持直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束.區(qū)域最好能把培養(yǎng)基準(zhǔn)備區(qū)域(門外)和實(shí)驗(yàn)區(qū)域(門內(nèi))分開(kāi).關(guān)于實(shí)驗(yàn)室布局在第五章討論工作臺(tái)面工作前必須消毒,可以用70%的酒精,

也可以用含氯的消毒劑.在第六章具體討論消毒時(shí)間不管使用何種消毒劑,需要提供充分的消毒時(shí)間來(lái)殺滅微生物,

一般5-10分鐘.可以用紙巾擦干表面潔凈臺(tái)必須有2個(gè)光源:普通照明用和殺菌紫外光.

紫外燈用于保持工作臺(tái)面免于微生物污染.在使用前仍然需要使用消毒劑清潔.擺放應(yīng)該有好習(xí)慣把工作桌面的物品擺放好,把移動(dòng)放到最低限度,

避免帶來(lái)污染鑷子如果使用薄膜過(guò)濾法,需要準(zhǔn)備一個(gè)小燒杯并有少量酒精,

鑷子不用時(shí)就放在杯子里培養(yǎng)基培養(yǎng)基使用前,應(yīng)該有相關(guān)日期,比如配置日期,或者實(shí)驗(yàn)室收到日期(直接使用的培養(yǎng)基).假如沒(méi)有所需日期,

這個(gè)培養(yǎng)基不能使用.實(shí)驗(yàn)服穿著干凈的實(shí)驗(yàn)服,袖子應(yīng)卷起至肘部以避免碰到培養(yǎng)基或樣品帶來(lái)污染,當(dāng)然,做實(shí)驗(yàn)前要洗手.第三章實(shí)驗(yàn)的無(wú)菌技術(shù)注意點(diǎn)–前采樣個(gè)人衛(wèi)生酒精燈樣品應(yīng)無(wú)菌采得使用無(wú)菌采樣袋或者采樣瓶采樣員應(yīng)戴防護(hù)手套,在采樣前燒采樣口樣品容器應(yīng)緊閉并安全儲(chǔ)存.萬(wàn)一培養(yǎng)基或者樣品濺到實(shí)驗(yàn)服上,應(yīng)在做完一個(gè)實(shí)驗(yàn)后換上干凈的咳嗽或者鼻塞可能會(huì)帶來(lái)微生物并影響實(shí)驗(yàn),

應(yīng)戴好防護(hù)手套面罩.

在第六章具體討論使用本森燈或者酒精燈,在實(shí)驗(yàn)前點(diǎn)燃火焰在實(shí)驗(yàn)區(qū)域產(chǎn)生一個(gè)防護(hù)層,可以防止那些懸浮在空氣中的微生物掉落在工作臺(tái)面上或者培養(yǎng)基上.第四章實(shí)驗(yàn)的無(wú)菌技術(shù)注意點(diǎn)–中開(kāi)瓶瓶口培養(yǎng)皿開(kāi)瓶前,

應(yīng)用清潔劑的紙巾清潔瓶蓋和附近區(qū)域,除去蓋子上可能留存的微生物蓋子打開(kāi)后,玻璃瓶口應(yīng)進(jìn)行滅菌,

可以在酒精燈上方旋轉(zhuǎn)瓶口和螺紋,一般2-3秒.

當(dāng)打開(kāi)培養(yǎng)皿時(shí),

不能完全移除蓋子,而應(yīng)該保持在培養(yǎng)皿的上側(cè),從而能夠倒入培養(yǎng)基或者樣品,這樣可以減少空氣灰塵或者微生物的污染;倒完培養(yǎng)基或者樣品后,

瓶口重新過(guò)火,蓋蓋子,用消毒劑清潔.第四章實(shí)驗(yàn)的無(wú)菌技術(shù)注意點(diǎn)–中濾膜鑷子打開(kāi)薄膜包裝,絕對(duì)不能碰到薄膜!用鑷子把薄膜移除包裝并放到過(guò)濾頭上,過(guò)濾的漏斗不能完全移開(kāi),只需移開(kāi)一點(diǎn)點(diǎn)放入濾膜即可過(guò)濾完后,用鑷子把濾膜轉(zhuǎn)到培養(yǎng)皿中,放置于中間用鑷子轉(zhuǎn)移濾膜過(guò)火時(shí),拿住鑷子的尾部,放到火焰上,保持一下能夠到火就好,時(shí)間太長(zhǎng)會(huì)在尖部結(jié)碳

拿鑷子的時(shí)候,尾部向上直至燒完.第四章實(shí)驗(yàn)的無(wú)菌技術(shù)注意點(diǎn)–后實(shí)驗(yàn)結(jié)束打掃廢棄物實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱;剩余的培養(yǎng)基可以放回儲(chǔ)存區(qū)域,蓋子必須蓋緊

拋棄廢棄物,比如樣品袋;可回用的物品放在遠(yuǎn)離工作區(qū)域的地方以回收,清洗,滅菌.用含有消毒劑的紙巾清潔工作臺(tái)面.在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中暴露于微生物的物品應(yīng)作為有害廢棄物這些廢棄物可能含有微生物并致病;假如含有致病菌可能會(huì)產(chǎn)生公共衛(wèi)生的事件.最好廢棄物能夠進(jìn)行濕熱滅菌第四章實(shí)驗(yàn)室布局一個(gè)設(shè)計(jì)合理的實(shí)驗(yàn)室能提供一個(gè)合格的環(huán)境以支持實(shí)驗(yàn)?zāi)軌虬踩行У剡M(jìn)行.首先,需要為實(shí)驗(yàn)室選擇一個(gè)合適的物理位置:遠(yuǎn)離其他操作區(qū)域,比如,生產(chǎn)或者儲(chǔ)運(yùn)沒(méi)有從其他區(qū)域進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的直接入口實(shí)驗(yàn)室必須是微生物實(shí)驗(yàn)專用實(shí)驗(yàn)室應(yīng)分為準(zhǔn)備區(qū)域和測(cè)試區(qū)域.濕熱滅菌鍋,作為這兩個(gè)區(qū)域的典型的分隔(門).這種分隔保證了能有效使用無(wú)菌技術(shù)并幫助防止培養(yǎng)基和樣品的交叉污染.假如兩個(gè)區(qū)域無(wú)法分開(kāi),實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備和測(cè)試兩個(gè)行為來(lái)區(qū)分不同的區(qū)域.第五章實(shí)驗(yàn)室布局–要點(diǎn)通風(fēng)和氣流安保工作區(qū)域微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該有單獨(dú)的通風(fēng)系統(tǒng),與其他操作區(qū)域的空氣供給分開(kāi);房間應(yīng)該是負(fù)壓的,

這表示實(shí)驗(yàn)室里面的空氣永遠(yuǎn)是向內(nèi)流動(dòng)的;空