氣相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方麝香注射液中4種成分

氣相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方麝香注射液中4種成分

復(fù)方麝香注射液由麝香、廣茉3430；香、婆羅洲、薄蓮腦、菖蒲、郁金香等六味中藥組成。它具有化痰開(kāi)放、安神安神的功效，可用于由粘液熱和內(nèi)閉引起的中風(fēng)昏迷。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有GC法測(cè)定制劑中麝香酮的含量和冰片、薄荷腦、廣藿香等藥材的薄層定性鑒別,為了更好的控制該制劑的質(zhì)量,作者建立了毛細(xì)管氣相色譜法同時(shí)測(cè)定制劑中薄荷腦、龍腦、百秋李醇和麝香酮4種組分的含量,各組分峰得到了良好的分離,可以用于本制劑的質(zhì)量控制。1對(duì)照品和聚山梨酯80ShimadzuGC-2010Plus氣相色譜儀。水(自制重蒸餾水)。薄荷腦、龍腦、百秋李醇、麝香酮和正十八烷對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(含量測(cè)定用,薄荷腦批號(hào):0728-200005;龍腦批號(hào):110881-200504;百秋李醇批號(hào):110772-200404;麝香酮批號(hào):0719-200606;正十八烷批號(hào):111636-200402);聚山梨酯80由生產(chǎn)企業(yè)提供(批號(hào):050310);復(fù)方麝香注射液由生產(chǎn)企業(yè)提供。2方法2.1空氣流量及升溫程序Rtx-Wax30m×0.25mm×0.25μm氣相色譜柱;氫火焰離子化檢測(cè)器;氮?dú)饬髁?0.8mL/mim;氫氣流量40mL/min;空氣流量:400mL/min。分流比80∶1;升溫程序:起始溫度140℃,保持2min,每分鐘升溫10℃,終止溫度220℃,保持4min;進(jìn)樣口、檢測(cè)器溫度:260℃。理論板數(shù)按薄荷腦峰計(jì)算應(yīng)不低于10000。2.2聚山梨酯溶液取薄荷腦、龍腦、百秋李醇、麝香酮對(duì)照品適量,精密稱定,加少量醋酸乙酯使溶解,再加2%的聚山梨酯80溶液適量,70℃水浴加熱使溶解,制成每1mL含薄荷腦0.3mg、龍腦0.3g、百秋李醇0.1mg、麝香酮0.1mg的溶液。取溶液1.0mL,精密加入內(nèi)標(biāo)溶液適量,使每1mL含正十八烷0.1mg,即得。2.3試驗(yàn)溶液的制備取樣品溶液混勻,精密加入內(nèi)標(biāo)溶液適量,使每1mL含正十八烷0.1mg,即得。2.4陰性對(duì)照溶液的制備按照處方比例,分別取除薄荷腦外的其余藥材、取除冰片外的其余藥材、取除廣藿香外的其余藥材和取除人工麝香外的其余藥材各1份,按原工藝制成不含薄荷腦、不含冰片、不含廣藿香和不含人工麝香的陰性對(duì)照樣品,照供試品溶液的制備項(xiàng)下的方法,制成缺薄荷腦、缺冰片、缺廣藿香和缺麝香的陰性對(duì)照樣品溶液。2.5內(nèi)標(biāo)溶液的配制精密稱取正十八烷對(duì)照品適量,加少量醋酸乙酯使溶解,再加2%的聚山梨酯80于70℃水浴加熱使溶解,放冷,加2%聚山梨酯80至刻度,搖勻,制成每1mL含2.0mg的溶液,作為內(nèi)標(biāo)溶液。2.6薄荷腦、缺廣充香的測(cè)定分別取薄荷腦、龍腦、百秋李醇、麝香酮對(duì)照品和正十八烷內(nèi)標(biāo)混合溶液、缺薄荷腦的陰性對(duì)照樣品溶液、缺冰片的陰性對(duì)照樣品溶液、缺廣藿香陰性對(duì)照樣品溶液、缺人工麝香的陰性對(duì)照樣品溶液和供試品溶液各1.0mL,置2mL氣相色譜專用瓶中,精密吸取1μL注入氣相色譜儀,測(cè)定,即得。3結(jié)果3.1試驗(yàn)結(jié)果的測(cè)定按上述氣相色譜法分別進(jìn)樣測(cè)定,見(jiàn)圖1～6。缺薄荷腦的陰性對(duì)照樣品溶液色譜圖,在薄荷腦色譜峰相應(yīng)位置上未見(jiàn)干擾;缺冰片的陰性對(duì)照樣品溶液色譜圖,在龍腦色譜峰相應(yīng)位置上未見(jiàn)干擾;缺廣藿香的陰性對(duì)照樣品溶液色譜圖,在百秋李醇色譜峰相應(yīng)位置上未見(jiàn)干擾;缺人工麝香的陰性對(duì)照樣品溶液色譜圖,在麝香酮色譜峰相應(yīng)位置上未見(jiàn)干擾。以薄荷腦對(duì)照品進(jìn)樣重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果RSD為1.86%(n=6),最低檢出限為4.5ng,定量限為9.0ng;以龍腦對(duì)照品進(jìn)樣重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果RSD為1.79%(n=6),最低檢出限為3.7ng,定量限為7.4ng;以百秋李醇對(duì)照品進(jìn)樣重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果RSD為2.08%(n=6),最低檢出限為2.1ng,定量限為4.2ng;以麝香酮對(duì)照品進(jìn)樣重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果RSD為1.90%(n=6),最低檢出限為2.5ng,定量限為5.0ng。3.2薄荷腦標(biāo)準(zhǔn)曲線分別取薄荷腦、龍腦、百秋李醇、麝香酮對(duì)照品適量,精密稱定,加2%的聚山梨酯80溶液使溶解,分別制成每1mL含薄荷腦0.8928mg、龍腦0.7408mg、百秋李醇0.452mg、麝香酮0.266mg的溶液,作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取薄荷腦對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5,1.0,2.0,3.0,6.0,10.0mL置10mL量瓶中,加2%的聚山梨酯80溶液稀釋至刻度,再分別精密加入內(nèi)標(biāo)溶液0.50mL,搖勻,作為薄荷腦標(biāo)準(zhǔn)曲線用溶液;分別精密吸取龍腦、百秋李醇、麝香酮對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,10.0mL置10mL量瓶中,同法制成龍腦、百秋李醇、麝香酮標(biāo)準(zhǔn)曲線用溶液。照上述氣相色譜方法測(cè)定。分別精密吸取上述溶液各1.0μL,注入氣相色譜儀,記錄色譜圖,計(jì)算薄荷腦、龍腦、百秋李醇、麝香酮峰面積積分值與內(nèi)標(biāo)峰面積積分值比。由溶液濃度(Cmg/mL)對(duì)峰面積比值(A)線性回歸,得薄荷腦回歸方程A1=4.876×10-3+8.798C1,r=0.9999(n=6);龍腦回歸方程A2=3.114×10-3+9.414C2,r=0.9999(n=7);百秋李醇回歸方程A3=-6.058×10-2+13.64C3,r=0.9998(n=7);麝香酮回歸方程A4=0.1303+14.03C4,r=0.9997(n=7)。試驗(yàn)結(jié)果表明,薄荷腦、龍腦、百秋李醇、麝香酮對(duì)照品分別在濃度0.04251～0.8503mg/mL、0.03528～0.7055mg/mL、0.02152～0.4305mg/mL、0.01267～0.2533mg/mL范圍內(nèi),線性關(guān)系良好。3.3精密度與內(nèi)標(biāo)態(tài)取同一批樣品溶液6份,按上述氣相色譜法,測(cè)定薄荷腦、龍腦、百秋李醇、麝香酮峰面積積分值與內(nèi)標(biāo)正十八烷峰面積積分值比值A(chǔ)1、A2、A3、A4,結(jié)果RSD分別為1.91%、1.78%、1.83%、1.92%(n=6),表明本法的精密度較好。3.4峰面積積分測(cè)定取同一份樣品溶液,放置0,2,4,8,10,24h,按上述氣相色譜法,測(cè)定薄荷腦、龍腦、百秋李醇、麝香酮峰面積積分值與內(nèi)標(biāo)正十八烷峰面積積分值比值A(chǔ)1、A2、A3、A4,結(jié)果RSD分別為2.27%、3.17%、1.31%、2.90%(n=6),表明本品在放置24h內(nèi)較穩(wěn)定。3.5樣品中龍腦、薄荷腦、百秋李醇、香精酮的含量精密稱取同一批樣品6份,按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法,分別測(cè)定樣品中龍腦、薄荷腦、百秋李醇、麝香酮的含量,結(jié)果龍腦、薄荷腦、百秋李醇、麝香酮的RSD分別為2.85%、2.16%、2.45%、2.30%。表明本法的重現(xiàn)性較好。3.6百秋李醇對(duì)照品溶液的制備精密吸取已知含量樣品0.50mL共24份,6份分別精密加入預(yù)先制備好的薄荷腦對(duì)照品溶液各0.50mL;6份分別精密加入預(yù)先制備好的龍腦對(duì)照品溶液各0.50mL;6份分別精密加入預(yù)先制備好的百秋李醇對(duì)照品溶液各0.50mL;6份分別精密加入預(yù)先制備好的麝香酮對(duì)照品溶液各0.50mL;再各精密加入內(nèi)標(biāo)正十八烷50μL(每1mL含正十八烷2.2928mg/mL),按上述氣相色譜法,分別測(cè)定薄荷腦、龍腦、百秋李醇、麝香酮和正十八烷的峰面積積分值,計(jì)算樣品中薄荷腦、龍腦、百秋李醇、麝香酮的含量,結(jié)果薄荷腦、龍腦、百秋李醇、麝香酮平均回收率分別為99.76%(RSD=1.48%)、99.36%(RSD=1.99%)、99.15%(RSD=1.67%)、98.87%(RSD=1.57%)。表明本法準(zhǔn)確、可靠。3.714.配合香劑中龍腦和薄蓮腦的含量測(cè)定按上述氣相色譜法,分別測(cè)定國(guó)內(nèi)5家生產(chǎn)企業(yè)共14批復(fù)方麝香注射液中龍腦、薄荷腦、百秋李醇和麝香酮的含量,結(jié)果見(jiàn)表1。4氣相色譜分離試驗(yàn)結(jié)果4.1曾選擇醋酸乙酯、正己烷等極性較低的溶劑提取樣品中的主要待測(cè)成分,由于樣品制備過(guò)程中加入聚山梨酯80作為表面活性劑,使溶液萃取過(guò)程中乳化較嚴(yán)重,造成方法的回收率較低。曾選擇頂空進(jìn)樣毛細(xì)管氣相色譜方法,擬減少對(duì)色譜柱污染,提高樣品分離度,制劑中龍腦和薄荷腦的含量測(cè)定取得了較滿意的結(jié)果,但廣藿香中主要成分百秋李醇和人工麝香中的麝香酮由于含量較低等因素的影響,經(jīng)多次試驗(yàn)均未能滿足頂空進(jìn)樣的方法學(xué)要求。4.2柱溫是氣相色譜分離的重要參數(shù),在色譜條件的摸索過(guò)程中,曾參照有關(guān)文獻(xiàn),比較120℃、130℃、140℃、160℃等恒溫和多種程序升溫方法,在滿足系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)要求下,盡可能使樣品中各種成分不在色譜柱中殘留和縮短分