Chap4 藥物的含量測定方法

藥物的含量測定是指測定藥物中所含的主成分的量，目的:判斷藥物的優(yōu)劣。定義第四章藥物的含量測定方法

化學(xué)分析法

重量分析容量分析含量測定儀器分析法效價測定（生物學(xué)法）可見紫外分光高效液相色譜法氣相色譜法藥物的含量測定容量分析法三種分析方法光譜分析法色譜分析法特點(diǎn)操作簡單、結(jié)果準(zhǔn)確，耐用性高，但專屬性差特點(diǎn)特點(diǎn)簡便快速、靈敏度高，有一定的準(zhǔn)確度，但專屬性稍差靈敏度與專屬性都高，有一定的準(zhǔn)確度，但結(jié)果需要對照品適用于準(zhǔn)確度與精確度要求較高的樣品測定適用于靈敏度要求較高，樣本量較大的分析項(xiàng)目適用于專屬性和靈敏度要求較高的復(fù)雜樣品第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)容量分析法定義將已知濃度的滴定液，由滴定管滴加到被測藥物的溶液中，直至滴定液與被測藥物反應(yīng)完全，然后根據(jù)滴定液消耗的濃度和被消耗的體積，按化學(xué)計量關(guān)系式計算出被測藥物的含量。亦稱滴定法特點(diǎn)1.方法簡便易行：儀器價廉易得，操作簡便快速2.方法耐用性高：影響測定的試驗(yàn)條件與環(huán)境因素少3.測定結(jié)果準(zhǔn)確：誤差低于0.2%4.方法專屬性差：對相近雜質(zhì)干擾缺少選擇，適用于主成分含量較高的樣品(如原料藥)分析第一節(jié)定量分析方法容量分析法有關(guān)計算例:用碘量法測定維生素C的含量時，《中國藥典》規(guī)定：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于8.806mg的維生素C（C2H8O6）T(滴定度):1ml滴定液(mmol/L)相當(dāng)于被測藥物的毫克數(shù)被測藥物滴定液藥物分子量滴定液濃度滴定度的計算示例一計算VitC的滴定度T碘量法測定VitC含量M(C6H6O6)=176.13，C(I2)=0.05mol/Lm=0.05mol/L11M=176.13示例二異煙肼的滴定度溴酸鉀法測定異煙肼含量[M(C6H7N3O)=137.14]，C溴酸鉀=0.01667mol/Lab滴定含量計算W測=NFTV取用倍數(shù)濃度校正因數(shù)滴定度消耗體積例:VitC的含量測定:精密稱取本品0.1332g,置錐形瓶中,加稀醋酸與新沸過的冷蒸餾水的混合液(1:10)110ml,加淀粉批示液1ml,用碘滴定液(0.05014mol/L)滴定至藍(lán)色,用去15.02ml,每1ml的碘液(0.05mol/L)相當(dāng)于8.806mgC6H8O6，計算本品是否符合藥典規(guī)定的含量限度。藥典規(guī)定含C6H8O6不得低于99.0%。濃度校正因數(shù)滴定度消耗體積F=實(shí)際C規(guī)定C計算步驟W測=NFTV×———0.050140.05×8.806×10-3×15.02=0.13263(g)VitC的百分含量(%)VitC%=W測W樣0.132630.1332==99.57%=10.1332樣品中VitC含量(W測)又例非那西丁含量測定精密稱取本品0.3630g加稀鹽酸回流1小時后，放冷，用亞硝酸鈉滴定液（0.1010mol/L）滴定，用去20.00ml。每1ml亞硝酸鈉液（0.1mol/L）相當(dāng)于17.92mg的C10H13O2N，請計算非那西丁的含量。需做空白試驗(yàn)的計算公式W測=NFT（V-V0）例:萘普生的含量測定：精密稱取本品0.4960g，加甲醇45ml溶解后，再加水15ml與酚酞指示劑3滴，用NaOH滴定液（0.1078mol/L）滴定，同時用空白試驗(yàn)校正，求萘普生百分含量?！吨袊幍洹芬?guī)定每1mlNaOH滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于23.03mgC14H14O3。按干燥品計算，含C14H14O3不得少于98.5%。滴結(jié)果如下：V=19.85ml，V0=0.10ml，干燥失重=0.40%。光譜分析法藥典收載紫外可見分光度法原子吸收分光光度法紅外分光度法熒光分析法火焰光度法二、光譜分析法

紫外可見分光度法基于物質(zhì)對紫外區(qū)(200~400nm)和可見光區(qū)(400~760nm)的單色光輻射建立起來的光譜分析法朗伯-比爾定律基礎(chǔ)紫外可見分光度法方法特點(diǎn)與適用范圍1.簡便易行：本法使用的儀器價格比較低廉，操作簡單，易于普及2.靈敏度高：適用于低濃度試樣分析3.準(zhǔn)確度較高：本法誤差在2%~5%之間，適用于對測定結(jié)果的準(zhǔn)確度要求較高的樣品4.專屬性較差：本法通常不受一般雜質(zhì)的干擾，但對結(jié)構(gòu)相近的有關(guān)物質(zhì)缺乏選擇性。本法比較少應(yīng)用于原料藥的含量測定，可用于制劑的含量測定，更多的應(yīng)用于生物制劑的定量檢查本法紫外區(qū)須選用石英比色皿，比色皿一般為1cm，吸光度在0.3~0.7之間為宜，選用最大吸收光波長。紫外可見分光度法含量測定方法3種方法對照品比較法吸收系數(shù)法計算光度法(少用)紫外可見分光度法含量測定方法1.對照品比較法分別配制供試品溶液和對照品溶液,所用溶劑量兩者相同,在規(guī)定的波長下測定吸光度.按下式計算結(jié)果紫外可見分光度法含量測定方法2.吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法:引入吸光系數(shù)的含量計算方法含量%=—————1%1cmE1%1cmE（）供（）標(biāo)藥典記載[例]

已知VitB12在361nm處的百分吸收系數(shù)為207，現(xiàn)測得其水溶液的吸收度為0.414，吸收池厚度為1cm，求其濃度。解：C=AL1%1cmE=————=0.00200()0.414207×1g/100ml單位?[例]精密稱取VitB12供試品25.0mg，加水溶解并稀釋制成1000mL，于1cm厚的吸收池中，在361nm處測得吸收度為0.507，已知其百分吸收系數(shù)為207，求其百分含量。解：C=m/V=25×10-3/1000（g/ml）=（g/100ml）2.5×10-3

1%1cmE()供=A/CLVitB12%=————1%1cmE1%1cmE（）供（）標(biāo)=202.8/207=97.97%=0.507/(2.5×10-3×1)用A算出（）供，再用其與已知（）標(biāo)比值1%1cmE1%1cmE=202.8[例]用UV法測定對乙酰氨基酚的含量：精密稱取本品0.0410g，置250ml量瓶中，加0.4%NaOH溶液50ml,溶解后,加水于刻度,搖勻。精密量取5ml,置100ml量瓶中,加0.4%NaOH溶液10ml,溶解后,加水至刻度,搖勻。在257nm處測得吸收度為0.580，按其百分吸收系數(shù)715計算，求其百分含量。解：C=m/V=（g/100ml）8.2×10-4

1%1cmE()供=A/CLVitB12%=————1%1cmE1%1cmE（）供（）標(biāo)=707.3/715=98.93%=0.580/8.2×10-4=707.3特點(diǎn)：靈敏度高，可達(dá)10-10～10-12g/ml

要求低濃度下測定須做空白測定熒光弱的藥物可衍生化后測定(二)熒光分析法(三)色譜分析法1.HPLC1.1內(nèi)標(biāo)法

As：內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積或者峰高AR:對照品的峰面積或者峰高Cs:內(nèi)標(biāo)物質(zhì)濃度CR：對照品濃度兩步:(1)測f;(2)測含量(1)測f(用標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)物)As’：內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積或者峰高Ax:供試品的峰面積或者峰高Cs’:內(nèi)標(biāo)物質(zhì)濃度f：校正因子(2)測含量(用樣品與內(nèi)標(biāo)物)示例一炔諾酮的含量測定

照高效液相色譜法(附錄ⅤD測定)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(65:35)為流動相，檢測波長為244nm。理論塔板數(shù)按炔諾酮峰計算不低于1500，炔諾酮峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度及主成分峰后一雜質(zhì)峰與主成分峰的分離度均應(yīng)符合要求。內(nèi)標(biāo)溶液的制備取黃體酮約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。測定法

取本品約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取此溶液2ml與內(nèi)標(biāo)溶液3ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜儀，記錄色譜圖；另取炔諾酮對照品適量，精密稱定，同法測定。按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計算，即得。例HPLC法測定磺胺嘧啶的含量對照品+內(nèi)標(biāo)溶液配制：精密稱取對照品50.0mg，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度,搖勻。精密量取5ml,置25ml量瓶中,精密加內(nèi)標(biāo)溶液(0.20mg/ml)5ml,加流動相至刻度,搖勻。供試品+內(nèi)標(biāo)溶液配制：精密稱取本品50.5mg，照上法配制。取上述兩種溶液各10μl進(jìn)樣，測得對照品和內(nèi)標(biāo)峰分別為1350和1040，供試品峰和內(nèi)標(biāo)峰分別為1313和1013。求SD的含量。解：由于對照品和供試品稀釋倍數(shù)相同，所以直接按質(zhì)量代替濃度計算As/CsAr/mr=f=As/CsAx/mx1040/0.201350/50.0=f=1013/0.201313/mx解之,得:mx=49.924(mg)SD%=49.924/50.5=98.86%2.外標(biāo)法(二)GC內(nèi)標(biāo)法第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法不經(jīng)有機(jī)破壞經(jīng)有機(jī)破壞直接測定配位滴定法氧化還原滴定法水解后測定酸水解堿水解經(jīng)還原分解后測定濕法破壞——凱氏定氮法干法破壞高溫灼燒法氧瓶燃燒法第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法(一)、直接測定法葡萄糖酸鈣EDTA配位滴定富馬酸亞鐵鄰二氮菲-硫酸鈰滴定葡萄酸銻鈉間接碘量法(二)、經(jīng)水解后測定法適用范圍：金屬原子不直接于碳原子相連或某些C-M鍵結(jié)合不牢固的有機(jī)金屬藥物。第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法1、堿水解法三氯叔丁醇銀量法返滴定2、酸水解法適用范圍：含鹵素有機(jī)藥物結(jié)構(gòu)中鹵素原子結(jié)合不牢固的藥物。EDTA配位滴定第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法(三)、經(jīng)還原分解后測定法適用范圍：碘原子直接與芳環(huán)連接的含碘有機(jī)化合物。泛影酸3NaI第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法

含氮、硫、硫柳汞、氯化鈉的生物制品、含氮有機(jī)合成藥物測定的前處理和生物制品中金屬元素測定時生物基質(zhì)的去除。H2SO4-HNO3H2SO4-HClO4H2SO4-H2SO4HNO3-KMn