當歸六黃湯分煎樣品與合煎樣品中黃芩苷含量的比較

當歸六黃湯分煎樣品與合煎樣品中黃芩苷含量的比較【摘要】目的對當歸六黃湯合煎液與分煎液中黃芩苷的含量進行比較，為其臨床應用提供依據(jù)。方法采用反相液相色譜法，DIKMAODS-C18(mm×250mm,5μm)色譜柱，以甲醇-水－磷酸(55∶45∶)為流動相，檢測波長為280nm，柱溫30℃，流速為ml·min-1。結(jié)果當歸六黃湯分煎樣品中黃芩苷含量明顯高于合煎樣品。結(jié)論為當歸六黃湯分煎顆粒的臨床應用提供一定的參考。

【關(guān)鍵詞】當歸六黃湯黃芩苷高效液相色譜法

當歸六黃湯出自李東垣《蘭室秘藏》，由當歸、生地黃、熟地黃、黃連、黃芩、黃柏、黃芪7味中藥組成。用于發(fā)熱盜汗，面赤心煩口干唇燥，大便干結(jié)，小便黃舌紅苔黃，脈數(shù)。主治陰虛火旺證。臨床上多用于各種原因引起的盜汗［1］。湯劑迄今仍是中醫(yī)臨床最主要的給藥模式，但湯劑的煎煮具有隨意性，使用也不方便，因而近年出現(xiàn)了中藥配方顆粒。中藥配方顆粒是以批量的單味中藥飲片為原料，分別加水煎煮、濃縮、干燥而得，經(jīng)單劑量包裝，使用時按處方混合后開水沖服，與中藥湯劑的分煎相似。傳統(tǒng)中藥湯劑是按方配藥，加水共煎而得，即合煎。分煎與合煎制得湯劑的藥效學、臨床療效方面的研究已經(jīng)有了一些報道［2］，但有關(guān)其化學組成方面的報道較少。本實驗以黃芩中黃芩苷為指標性成分，采用HPLC法比較該方“分煎”和“合煎”制得的湯劑中黃芩苷的含量變化，從中藥復方湯劑中有效成分的含量方面為中藥配方顆粒應用于臨床提供理論依據(jù)。

1儀器與材料

Aglient1100高效液相色譜儀(包括真空脫氣機，自動進樣器，四元泵，DAD檢測器)，HP1100/WIND3D工作站。黃芩苷對照品購自中國藥品生物制品檢定所。甲醇為色譜純；水為純凈水；其它試劑均為分析純。

藥材經(jīng)貴陽中醫(yī)學院生藥實驗室董麗莎教授鑒定，當歸為傘形科植物當歸Angelicasinensia(Oliv.)Diels的干燥根，黃芩為唇形科植物黃芩ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥根，黃連為毛茛科植物黃連CoptischinensisFranch.的干燥根莖，黃柏為蕓香科植物黃皮樹的干燥樹皮PhellodendronchinenseSchneid.。黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)mongholicus(Bge.)Hsiao的干燥根。地黃為玄參科植物地黃RehmanniaglutinosaLibosch.的新鮮或干燥塊莖。

2方法與結(jié)果

中藥配方顆粒、傳統(tǒng)湯劑、陰性樣品的制備

中藥配方顆粒樣品稱取黃芪120g，先加8倍量的水，煎煮1h后過濾，濾渣加6倍量的水煎煮1h，過濾，合并濾液，濃縮，減壓干燥，粉碎。分別稱取生地、熟地、黃連、黃柏、當歸、黃芩各60g，按上述方法進行制備，即得各味藥材的浸膏粉。

傳統(tǒng)湯劑樣品按處方比例稱取各味藥材粗粉，加20倍量的水，煎煮至10倍量，過濾，濃縮，減壓干燥，粉碎，即得傳統(tǒng)湯劑樣品。

陰性樣品按照處方比例稱取除黃芩外的各味藥材浸膏粉，混合均勻，即得分煎陰性樣品；按照處方比例稱取除黃芩外的各味藥材，加20倍量的水，煎煮至10倍量，濃縮，減壓干燥，即得合煎陰性樣品。

色譜條件色譜柱為DIKMAODS-C18(250mm×mm,5μm)；流動相為甲醇-水－磷酸(55∶45∶)；流速為ml/min；檢測波長為280nm；柱溫30℃。

對照品溶液的制備精密稱定在60℃減壓干燥4h的黃芩苷對照品適量，加甲醇制成μg/ml的溶液，備用。

供試品溶液制備精密稱定當歸六黃湯分煎與合煎浸膏粉各約g，置100ml容量瓶中，加70％乙醇，稱重，超聲45min，放冷，補足減失重量，過濾，續(xù)濾液過μm微孔濾膜即得黃芩苷供試品溶液。對照品、樣品色譜見圖1～3。

線性關(guān)系考察分別精密吸取2，4，6，8，10ml的黃芩苷對照品溶液于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度。按在上述色譜條件進樣10μl，以峰面積積分值(A)為縱坐標，進樣量(X)為橫坐標，繪制標準曲線，計算得回歸方程為：A=，r=95，結(jié)果表明黃芩苷在8～μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1對照品色譜圖

圖2分煎樣品色譜圖

圖3合煎樣品色譜圖

精密度實驗精密吸取黃芩苷對照品溶液10μl，連續(xù)進樣6次，在上述色譜條件下測定，RSD＝%，表明精密度良好。

重復性實驗精密稱取同一批分煎浸膏粉、合煎浸膏粉各6份，按上述供試品溶液的制備方法和色譜條件測定，計算黃芩苷的含量，RSD分別為RSD＝%、RSD＝%。結(jié)果表明該方法具有良好的重復性。

穩(wěn)定性實驗精密稱取分煎液浸膏粉、合煎液浸膏粉各g，按供試品溶液的制備方法處理，分別在0，2，4，6，8h進樣，按上述色譜條件下測定，RSD分別為％，％，表明當歸六黃湯分煎、合煎樣品在8h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收率實驗分別精密稱取已知含量分煎浸膏粉、合煎浸膏粉各9份，加入適量黃芩苷對照品溶液，按供試品溶液制備方法處理，上述色譜條件下測定RSD分別為％，％。結(jié)果見表1～2。

表1分煎樣品的加樣回收率實驗

表2合煎液的加樣回收率實驗

樣品含量的測定按照供試液制備方法分別處理6份樣品，在“”項色譜條件下進行測定。結(jié)果見表3。

表3黃芩苷含量測定結(jié)果

*為每處方中含量

表4黃芩苷無重復雙因素方差分析

由表4可知，當歸六黃湯分煎樣品和合煎樣品中黃芩苷的含量有顯著性的差異。由此可以得出不同處理方法對黃芩苷的含量有一定的影響，采用傳統(tǒng)煎煮方法得到的傳統(tǒng)湯劑其平均含量均低于顆粒湯劑的平均含量。

3討論

對提取溶媒進行考察，采用不同濃度的甲醇［3］與乙醇［4］超聲提取，實驗結(jié)果表明用70％乙醇為提取溶媒，黃芩苷的含量較高。

對提取時間進行考察，用70％乙醇分別超聲15，30，45，60min，實驗結(jié)果表明黃芩苷超聲45min含量最高。

采用《中國藥典》，2005版(Ⅰ部)所載流動相甲醇∶水∶磷酸，指標性成分的分離效果不好，經(jīng)過調(diào)整后流動相為甲醇∶水∶磷酸，分離度、保留時間、峰形均好于藥典方法，故最后采用流動相為甲醇∶水∶磷酸。

當歸六黃湯分煎樣品中黃芩苷的含量明顯的高于合煎樣品中黃芩苷的含量，可能是由于合煎過程中藥物之間發(fā)生相互反應，生產(chǎn)沉淀或生成其他物質(zhì)，從而導致合煎樣品中黃芩苷含量偏低。

【參考文獻】

［1］李懷珠.當歸六黃湯加味治療陰虛火旺型盜汗130例［J］.中國社區(qū)醫(yī)師，2005，7：35.

［2］周嘉林，王永山.中藥濃