NDM-1分子生物學檢測方法課件

產(chǎn)NDM-1泛耐藥腸桿菌科

細菌感染診療指南

實驗室檢測方法解讀徐英春北京協(xié)和醫(yī)院

產(chǎn)NDM-1泛耐藥腸桿菌科

細菌感染診療指南

產(chǎn)KPC酶的腸桿菌科細菌特征

阿米卡星 R氨芐西林 R氨芐西林-舒巴坦 R氨曲南 R頭孢唑林 R頭孢匹肟 R頭孢西丁 R頭孢他啶 R頭孢曲松 R氯霉素 R

環(huán)丙沙星 R厄他培南 R或I慶大霉素 R亞胺培南 R或I左氧氟沙星 R美羅培南R或I哌拉西林-他唑巴坦R四環(huán)素 R妥布霉素 R復方磺胺RMIC(μg/ml)MIC(μg/ml)39產(chǎn)KPC酶的腸桿菌科細菌特征

阿米卡星 R環(huán)丙沙星KPC

產(chǎn)KPC酶的腸桿菌科細菌耐藥特點所有的b-內(nèi)酰胺類耐藥青霉素類廣譜頭孢菌素單環(huán)B內(nèi)酰胺類碳青霉烯類質(zhì)粒介導的耐藥基因有的菌株同時ESBL（+）,氟喹諾酮類耐藥、氨基糖苷類耐藥35KPC

產(chǎn)KPC酶的腸桿菌科細菌耐藥特點所有的b-內(nèi)酰胺

產(chǎn)KPC酶的腸桿菌科細菌耐藥特點黏菌素/多粘菌素敏感MIC≤2μg/mlS替加環(huán)素可能敏感（MIC≤2μg/mlS;4μg/mlI;≥8μg/mlR）52

產(chǎn)KPC酶的腸桿菌科細菌耐藥特點黏菌素/多粘菌素敏感NDM-1的檢測方法NDM-1，即新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶-1型，是由細菌質(zhì)粒上攜帶的blaNDM-1基因編碼的。目前，國際上已有十余篇關(guān)于NDM-1的研究性文章或相關(guān)部門報告發(fā)表。

由blaNDM-1編碼產(chǎn)生的碳青霉烯酶及因此產(chǎn)生的對碳青霉烯類耐藥性可以通過現(xiàn)有推薦使用的表型鑒定方法準確、可靠的鑒定出來[1][1]USCDC.MMWRMorbMortalWklyRep.2010Jun25;59(24):750.[2]YongDetal.AntimicrobAgentsChemother.2009Dec;53(12):5046-54.NDM-1的檢測方法NDM-1，即新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶-CLSIM100-S20及CLSIM100-S20-U中碳青霉烯類的折點抗菌藥物紙片擴散法(mm)

稀釋法(mg/L)M100-S20M100-S20-UM100-S20M100-S20-USRSR

SRSR多利培南-≥23≤19-≤1≥4厄他培南≥19≤15≥23≤19≤2≥8≤0.25≥1亞胺培南≥16≤13≥23≤19≤4≥16≤1≥4美羅培南≥16≤13≥23≤19≤4≥16≤1≥4CLSIM100-S20及CLSIM100-S20-U中（一）表型篩查試驗紙片擴散法：美羅培南（10ug）或亞胺培南（10ug）：抑菌圈直徑≤22mm肉湯稀釋法或Etest法美羅培南或亞胺培南:MIC≥2ug/ml亞胺培南適合于大腸埃希菌，克雷伯菌屬，沙門菌屬，腸桿菌屬變形桿菌屬、普羅威登斯菌屬和摩根菌屬對亞胺培南敏感性下降是由產(chǎn)碳青霉烯酶外的其他機制引起，因此對這些菌株尚未建立用亞胺培南MIC法進行篩選和確認碳青霉烯酶，并且亞胺培南紙片法對所有腸桿菌科碳青霉烯酶的篩查效果都不好[1]YongDetal.AntimicrobAgentsChemother.2009Dec;53(12):5046-54.[2]KumarasamyKKetal.LancetInfectDis.2010Sep;10(9):597-602.（一）表型篩查試驗紙片擴散法：[1]YongDet（二）表型確證試驗紙片擴散法：Etest法：雙紙片協(xié)同法：改良霍奇試驗(modifiedHodgetest)自動化鑒定與藥敏儀器[1]YongDetal.AntimicrobAgentsChemother.2009Dec;53(12):5046-54.[2]KumarasamyKKetal.LancetInfectDis.2010Sep;10(9):597-602.（二）表型確證試驗紙片擴散法：[1]YongDet（二）表型確證試驗紙片擴散法：亞胺培南(10ug)/亞胺培南(10ug)+EDTA(500mM10ul)復合紙片結(jié)果判讀：復合紙片比單藥紙片抑菌環(huán)直徑增大≥5mm圖：復合紙片法判定金屬β-內(nèi)酰胺酶示意圖

(左紙片：亞胺培南/EDTA,右紙片：亞胺培南)

[1]YongDetal.JClinMicrobiol.2002Oct;40(10):3798-801.（二）表型確證試驗紙片擴散法：亞胺培南(10ug)/亞胺培南（二）表型確證試驗Etest法：Etest?MBL(IP/IPI、MP/MPI)結(jié)果判讀：單藥與復合制劑的MIC比值≥8圖：EtestMBL(IP/IPI)

[1]/servlet/srt/bio/clinical-diagnostics/dynPage?doc=CNL_CLN_PRD_G_PRD_CLN_60（二）表型確證試驗Etest法：Etest?MBL(IP圖：EtestMBL試驗示意圖

(亞胺培南/亞胺培南+抑制劑[EDTA])

[1]LeeKetal.JClinMicrobiol.2005Feb;43(2):942-4.圖：EtestMBL試驗示意圖[1]LeeKet（二）表型確證試驗雙紙片協(xié)同法：

亞胺培南(10ug)、EDTA(0.5Mx10μl約0.5mg/片)，間距10mm(0.5McF）圖：亞胺培南-EDTA雙紙片協(xié)同試驗示意圖(圖中菌種為銅綠假單胞菌)[1]LeeKetal.JClinMicrobiol.JClinMicrobiol.2003Oct;41(10):4623-9.（二）表型確證試驗雙紙片協(xié)同法：亞胺培南(10ug)、EDE.coli

ATCC25922厄他培南抑制E.coli

ATCC25922有豐富菌的E.coliATCC25922生長

#1pos制備0.5McF的E.coliATCC25922菌懸液.1:10稀釋用棉簽均勻涂布MHA平皿、約5分鐘，中心貼厄他培南或美羅培南紙片用1ul接種環(huán)挑取2-3個菌落，從紙片邊緣向外劃線過夜培養(yǎng)（16-20h）.出現(xiàn)向內(nèi)生長的菌株薇碳青霉烯酶陽性（如圖1，2）.（二）表型確證試驗

#2

pos

#3negCLSIM1