班謙 2親子鑒定

親子

鑒定概述親權(quán)鑒定（identificationindisputedpaternity）：是指應(yīng)用醫(yī)學(xué)、遺傳學(xué)、人類學(xué)及其他自然科學(xué)的理論和技術(shù)，主要通過人類遺傳標(biāo)記的檢測與分析，對被檢者之間是否存在生物學(xué)親緣關(guān)系所作的科學(xué)判定。適用對象：親子鑒定同胞間隔代直系間旁系個體（叔侄、姨甥等）間第十二章親子鑒定歷史：滴骨法早在三國時期就有實(shí)例記載，是指將活人的血滴在死人的骨頭上，觀察是否滲入，如能滲入則表示有父母子女兄弟等血統(tǒng)關(guān)系。合血法大約出現(xiàn)在明代，是指雙方都是活人時，將兩人刺出的血滴在器皿內(nèi)，看是否凝為一體，如凝為一體就說明存在親子兄弟關(guān)系。影視劇中的“滴血認(rèn)親”《甄嬛傳》中，甄嬛被告發(fā)與太醫(yī)溫實(shí)初有奸情。滴血認(rèn)親的水碗里被摻了明礬，滴血后溫實(shí)初與皇子血液相融，甄嬛提出水有問題?！秾で赜洝分?，大殿滴血認(rèn)親一幕，穿越到古代的項(xiàng)少龍也是利用“加料”的小動作，證明了假嬴政與秦王的親子關(guān)系?！毒牌分ヂ楣佟方Y(jié)尾，惡霸常威不肯招供強(qiáng)奸戚秦氏的事實(shí)，包大人掉包讓其與自己兒子滴血認(rèn)親，兩滴血相融，騙得常威招供。ABO血型血清型、酶型、HLA等DNA指紋圖PCR技術(shù)VNTRSTRSNP現(xiàn)代醫(yī)學(xué)鑒定技術(shù)：一、親子鑒定的應(yīng)用1.涉及民事糾紛的親子鑒定（1）解決家庭糾紛：通常是丈夫懷疑孩子不是自己親生的；（2）確認(rèn)責(zé)任關(guān)系：非婚生子女撫育責(zé)任及財產(chǎn)繼承；（2）解決醫(yī)療糾紛：懷疑醫(yī)院換錯嬰兒或試管嬰兒配子錯配。2.涉及刑事訴訟的親子鑒定（1）強(qiáng)奸致孕案對兒童（或胎兒）親生父親的確定；（2）無名尸體、失蹤人員及身源不明者身源的認(rèn)定；（3）殺嬰、拐騙兒童等案件中孩子身源的認(rèn)定。3.涉及行政事務(wù)的親子鑒定（1）移民涉外公證；（2）失散親人親緣關(guān)系的認(rèn)定；（3）計(jì)劃外生育責(zé)任人的確認(rèn)及其無合法出生證明子女戶籍的注冊。第十二章親子鑒定以上各類親子鑒定例中，尤以母子關(guān)系確定，要求判斷爭議父親和子女間是否存在親子關(guān)系的最為常見，這類親子鑒定又稱為父權(quán)鑒定（paternitytesting）。二、親子鑒定的依據(jù)親子鑒定的依據(jù)非遺傳特征受單一基因座等位基因控制受多基因座共同控制，同時還受環(huán)境、營養(yǎng)狀態(tài)、疾病等非遺傳因素影響遺傳特征廣義的血型是指由遺傳決定的人類血液的個體差異，包括紅細(xì)胞血型、白細(xì)胞血型、血小板型、血清蛋白型和酶型等。個體間遺傳差異的本質(zhì)是編碼基因產(chǎn)物的DNA分子結(jié)構(gòu)在不同個體或等位基因之間存在差異，稱為DNA多態(tài)性。應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)鑒定的遺傳標(biāo)記大致可作如下分類：遺傳標(biāo)記基因產(chǎn)物水平遺傳標(biāo)記DNA水平遺傳標(biāo)記細(xì)胞表面的遺傳標(biāo)記平遺傳標(biāo)記（紅細(xì)胞血型、白細(xì)胞血型、血小板型等）蛋白質(zhì)的遺傳標(biāo)記（血清型、紅細(xì)胞酶型、血清酶型、唾液型等）DNA序列多態(tài)性DNA長度多態(tài)性三、親子鑒定的原理

親子鑒定主要是通過檢測個體的遺傳標(biāo)記，并根據(jù)遺傳規(guī)律分析個體間遺傳標(biāo)記檢驗(yàn)結(jié)果是否符合遺傳規(guī)律，從而判定被檢者之間是有具有生物學(xué)的親緣關(guān)系。（一）孟德爾遺傳規(guī)律位于常染色體上的決

定某種性狀的基因或DNA遺傳標(biāo)記，按照

孟德爾遺傳定律遺傳。在一個具體家庭中，決定某一性狀的基因在親代和子代之間傳遞的規(guī)律是：孩子的一對等位基因必定是一個來自父親，一個來自母親；孩子不可能帶有雙親均沒有的等位基因；除非父母雙方均有同一基因，否則子女不會是純合子；父母之一若是純合子，則子女必得其一。第十二章親子鑒定圖12-1孟德爾遺傳規(guī)律示意圖根據(jù)上述遺傳規(guī)律，在排除遺傳變異和分型錯誤的前提下，鑒定親子關(guān)系的基本原理可以歸納為以下兩點(diǎn)：1．在肯定某個基因必需來自生父，而假設(shè)父親并不具有這個基因的情況下，可以排除其親子關(guān)系；2．在肯定某個基因必需來自生父，而假設(shè)父具有這個基因的情況下，不能排除其親子關(guān)系。血型組合生父基因可以排除父權(quán)不能排除父權(quán)母親孩子aa×aaabbaa、abaa×abbaabb、abab×aaabbaa、abbb×bbbaabb、abbb×ababbaa、abab×bbbaabb、abab×aba、b—aa、bb、ab表12-1根據(jù)遺傳標(biāo)記判定父權(quán)（二）非孟德爾遺傳規(guī)律1.男性伴性遺傳Y染色體非重組部分以單倍型的方式由男性親代穩(wěn)定地直接傳給男性子代中，即男性伴性遺傳。在母親不能參加的父子間的單親鑒定、隔代、同胞間親緣關(guān)系的鑒定及性犯罪案件中的個人識別中都具有非常重要的作用。2.核外遺傳線粒體DNA（mitochondrial，mtDNA）是人類唯一的核外基因組DNA，它主要通過卵細(xì)胞將遺傳信息傳給子代，同一母系后代的mtDNA在排除變異的前提下是一致的。在父親不能參加鑒定的母子間的單親鑒定，以及母系同胞間或隔代或旁系個體間的親緣關(guān)系鑒定中具有重要意義。親子鑒定常用的遺傳標(biāo)記一、基因產(chǎn)物水平的遺傳標(biāo)記1.表現(xiàn)為簡單的遺傳性狀，其遺傳方式經(jīng)家系調(diào)查已明確；2.具有遺傳多態(tài)性，基因頻率分布較均勻，父權(quán)排除率高；3.在相應(yīng)地區(qū)、民族中的群體遺傳數(shù)據(jù)已建立；4.血型個體發(fā)生早，不易受年齡、疾病及其他因素影響；5.檢驗(yàn)方法操作簡單，重復(fù)性好，結(jié)果明確可靠。（一）紅細(xì)胞血型紅細(xì)胞血型是指由遺傳決定的紅細(xì)胞表面抗原的差異。1.ABO血型ABO血型是最早被發(fā)現(xiàn)的人類血型系統(tǒng)，在輸血、器官移植、人類遺傳學(xué)及法醫(yī)學(xué)研究中具有重要意義。用已知標(biāo)準(zhǔn)抗血清測定紅細(xì)胞上的抗原（正試驗(yàn)），或用已知標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞測定血清中的抗體（反試驗(yàn)），可以確定ABO血型的四種普通型：即A型、B型、AB型和O型。表12-2ABO血型抗原、抗體組成已知抗體標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞分型抗-A抗-BA型B型被檢紅細(xì)胞＋－被檢血清－＋A型－＋＋－B型＋＋－－AB型－－＋＋O型表12-3ABO血型的分型ABO基因座位于人類第9號染色體（9q34），主要有A、B和O三個等位基因，A和B為共顯性，A、B對O為顯性，O為隱性。ABO血型抗原決定簇是多糖，它們并不是基因的直接產(chǎn)物，而是由基因表達(dá)產(chǎn)生的不同糖基轉(zhuǎn)移酶，以H物質(zhì)作為基礎(chǔ)物質(zhì)催化生成的不同糖鏈。ABO血型抗原不僅以醇溶性糖脂類的形式存在于紅細(xì)胞及其他組織細(xì)胞上，也可以水溶性糖蛋白的形式存在于部分人的血清、精液、唾液等體液與分泌液中。因此，也可以通過對上述樣品的檢測判定ABO血型。2.MN血型M抗原與N抗原是Landsteiner等（1927年）用人紅細(xì)胞免疫家兔制備特異性抗血清時發(fā)現(xiàn)的，是第二個被發(fā)現(xiàn)的人類血型系統(tǒng)。以糖蛋白的形式存在于紅細(xì)胞膜表面上，用已知抗-M、抗-N抗體檢測未知的紅細(xì)胞抗原，根據(jù)凝集反應(yīng)分為M型、N型和MN型3種表型。MN基因座位于第4號染色體（4q28-31)上，M、N兩個等位基因符合常染色體共顯性遺傳。3.Rh血型Rh血型是最為復(fù)雜的人類血型之一，5種常見抗原D、C、c、E、e構(gòu)成18種表型。其中RhD抗原具有很強(qiáng)的免疫原性，在輸血、新生兒溶血和母兒妊娠不合中具有重要的意義，因此臨床上則根據(jù)RhD抗原的有無分為RhD（+）和RhD（-）兩種型。RhCE基因座的四種等位基因RhCE、RhCe、Rhce、Rhce屬常染色體共顯性遺傳。Rh血型抗原為膜內(nèi)鑲嵌蛋白，相應(yīng)的Rh抗體多為不完全抗體。因此，常用抗人球蛋白試驗(yàn)（Coombs’test）鑒定Rh血型。（二）血清蛋白型血清蛋白型（Thepolymorphismofserumprotein）又稱血清型（Serumtypes），是指由遺傳決定的人血清中存在的同一種蛋白質(zhì)的個體差異，表現(xiàn)為氨基酸排列順序的差別，進(jìn)而導(dǎo)致蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)和立體構(gòu)象的不同。親子鑒定常用的血清型系統(tǒng)有：結(jié)合珠蛋白（HP）型、維生素D結(jié)合蛋白（Gc）型、α1-抗胰蛋白酶（Pi）型、轉(zhuǎn)鐵蛋白（Tf）型、間-α-胰蛋白酶抑制劑（ITIH1）型和補(bǔ)體成分等。（三）紅細(xì)胞酶型紅細(xì)胞酶型亦即紅細(xì)胞的同工酶多態(tài)性，是指由遺傳基因決定的、具有相同催化活性的酶分子一級結(jié)構(gòu)在同一種屬不同個體間的遺傳差異。親子鑒定常用的紅細(xì)胞酶型有：紅細(xì)胞酸性磷酸酶（EAP）型、酯酶D（ESD）型、葡糖磷酸變位酶1（PGM1）型、乙二醛酶I（GLOI）型和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）型等。（四）白細(xì)胞血型人類白細(xì)胞膜上存在著三類不同的抗原：紅細(xì)胞血型抗原（ABH、Lea和Leb等）、白細(xì)胞本身特有抗原（CD4和CD8等）及代表個人特異性且與其他組織共有的同種抗原——人類白細(xì)胞抗原（humanleukocyteantigen，HLA）又稱為移植抗原（transplantationantigen）或組織相容性抗原（histocompatibilityantigen）。HLA系統(tǒng)是迄今發(fā)現(xiàn)的最復(fù)雜的人類遺傳標(biāo)記。HLA基因定位于第6號染色體短臂（6p21.31），形成一組緊密連鎖的基因群，稱為主要組織相容性復(fù)合體。HLA-Ⅰ類抗原是一種膜糖蛋白，主要包括HLA-A、B和C基因的產(chǎn)物，由一條重鏈和一條輕鏈構(gòu)成。該類抗原分布廣泛，存在于所有有核細(xì)胞，并以可溶性方式存在于自身血清或初乳中。HLA-Ⅱ類抗原主要包括DR、DQ、DP等基因座的產(chǎn)物，由α和β兩條糖蛋白鏈構(gòu)成。該類抗原的組織分布比HLA-Ⅰ類抗原少得多，主要表達(dá)在如B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和其它抗原遞呈細(xì)胞的表面。HLA的遺傳特征：①共顯性遺傳

②單倍型遺傳

③連鎖不平衡HLA抗原分型主要應(yīng)用微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)和混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)兩種方法。二、DNA水平的遺傳標(biāo)記（一）DNA的結(jié)構(gòu)與功能由4種脫氧核糖核酸（簡稱核苷酸）通過磷酸二酯鍵聚合而成的多核苷酸鏈。絕大部分（98%）DNA存在于細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)中。以堿基配對的原則（A與T，G與C）通過氫鍵彼此相連。極少部分DNA存在于核外線粒體中。生物體的遺傳信息表現(xiàn)為DNA分子中核苷酸的排列順序，并以密碼子的形式編碼在DNA分子上。（二）DNA多態(tài)性的分子學(xué)基礎(chǔ)DNA多態(tài)性是指DNA區(qū)域中等位基因（或片段）存在兩種或兩種以上形式，其本質(zhì)是生物體在進(jìn)化過程中DNA的核苷酸排列順序改變的結(jié)果。DNA多態(tài)性可分為長度多態(tài)性和序列多態(tài)性。1、長度多態(tài)性（lengthpolymorphism）DNA長度多態(tài)性是指在兩條同源染色體上，同源DNA片段的核苷酸排列數(shù)量存在的個體差異。DNA長度多態(tài)性是由于片段插入、缺失或重復(fù)序列數(shù)目變異所致。⑴散在重復(fù)序列：單拷貝DNA序列以其單體形式散在地分布于整個基因組中稱為散在重復(fù)序列。⑵串聯(lián)重復(fù)序列：具有特定的重復(fù)單位，各重復(fù)單位頭尾相連形成的重復(fù)序列稱為串聯(lián)重復(fù)序列，又稱為衛(wèi)星DNA。

⑶倒位重復(fù)序列

重復(fù)單位是互補(bǔ)序列，并在同一條DNA鏈上呈反向排列的重復(fù)序列稱為倒位重復(fù)序列。小衛(wèi)星DNA（MinisatelliteDNA）：是由許多長度為6～70bp的串聯(lián)重復(fù)單位組成的DNA序列，又稱為可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列（VariableNumberofTandemRepeats，VNTRs）。這類重復(fù)可能源于減數(shù)分裂期間的同源染色體或染色體內(nèi)部的不對等交換。同一小衛(wèi)星的各個重復(fù)單位內(nèi)含有一個約10～15bp長的保守序列，即核心序列；不同的小衛(wèi)星DNA之間其核心序列有極高的同源性。小衛(wèi)星DNA重復(fù)單位的重復(fù)數(shù)目遵循孟德爾遺傳規(guī)律遺傳。圖12-2DNA指紋圖的應(yīng)用微衛(wèi)星DNA（MicrosatelliteDNA）：是一類更簡單的寡核苷酸串聯(lián)重復(fù)序列，重復(fù)單位為2～7bp，重復(fù)次數(shù)在10～60次左右，又被稱為短串聯(lián)重復(fù)序列（ShortTandemRepeats,STR）。微衛(wèi)星DNA的產(chǎn)生主要是DNA復(fù)制過程中滑動，或DNA復(fù)制和修復(fù)時滑動鏈與互補(bǔ)鏈堿基錯配，導(dǎo)致一個或幾個重復(fù)單位的缺失或插入。STR實(shí)質(zhì)上屬于VNTR，同樣具有極高的多態(tài)性，亦按孟德爾定律遺傳。圖12-3短串聯(lián)重復(fù)序列結(jié)構(gòu)示意圖2.序列多態(tài)性（sequencepolymorphism）DNA序列多態(tài)性指在兩條同源染色體上，同源DNA序列長度相等，但個別核苷酸存在的個體差異。單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，稱為單核苷酸多態(tài)性（singlenucleotidepoly-morphism，SNP）。這種變異是由堿基的替代、插入或缺失所致。（三）DNA多態(tài)性的檢測技術(shù)1.DNA指紋技術(shù)DNA指紋（DNAfingerprint）是指將人類基因組DNA用特定的限制性內(nèi)切酶消化后，經(jīng)電泳分離、薩森印跡轉(zhuǎn)移，然后用已知序列小衛(wèi)星DNA探針根據(jù)堿基互補(bǔ)原則與未知基因組DNA雜交，所顯示出的由一系列不等距離、相互間隔的多條電泳譜帶組成的高度多態(tài)性圖譜。圖譜中的每一條譜帶代表一個特定長度的DNA片段，不同個體之間的差異在圖譜中主要表現(xiàn)為譜帶位置、數(shù)目和密度強(qiáng)弱的差異。DNA指紋的實(shí)質(zhì)是基因組DNA的限制性片段長度多態(tài)性，它的個體特異性取決于所用限制酶的識別序列特異性和探針的特異性。圖12-4DNA指紋圖基本實(shí)驗(yàn)流程（1）DNA指紋的基本操作過程限制性核酸內(nèi)切酶（restrictionendonucleaese,RE）：又簡稱限制酶或內(nèi)切酶，是一類能識別雙鏈DNA分子中特定核苷酸序列，并在特定部位以內(nèi)切方式水解DNA鏈的核酸水解酶。這種由于DNA限制酶識別的序列核苷酸結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，導(dǎo)致酶切位點(diǎn)的產(chǎn)生、消失或移位，酶切所產(chǎn)生的限制性片段數(shù)目和長度改變所呈現(xiàn)的DNA多態(tài)現(xiàn)象稱為限制性片段長度多態(tài)性（restrictionfragmentpolymorphisms,RFLP）。分子雜交是特異性探針與待測DNA

多態(tài)片段在復(fù)性條件下形成穩(wěn)定異

源DNA雙鏈的過程。DNA指紋的探針有兩類：多位點(diǎn)探針（multi-locusprobe，MLP）和單位點(diǎn)探針（single-locusprobe，SLP），前者指在低強(qiáng)度雜交條件下可同時檢測基因組DNA中多個VNTR位點(diǎn)的探針，多位點(diǎn)探針檢測得到的DNA圖譜稱為DNA指紋，后者指在高強(qiáng)度雜交條件下，只檢測出基因組DNA中單個VNTR多態(tài)片段的探針，單位點(diǎn)探針檢測得到的DNA圖譜稱為DNA紋印。（2）DNA指紋的基本特征1）體細(xì)胞穩(wěn)定性2）個體高度特異性3）按孟德爾遺傳規(guī)律遺傳2.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerasechainreactionPCR）技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一種快速的體外擴(kuò)增特異DNA片段的技術(shù)，是依賴于靶DNA序列側(cè)翼上所結(jié)合的兩個寡核苷酸引物在體外由DNA聚合酶催化合成特異性DNA片段的方法。具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡單、快速等優(yōu)點(diǎn)。在耐熱DNA聚合酶作用下，以一對特異性序列DNA短片段作為引物，利用加熱和冷卻交替的循環(huán)程序，有選擇性地放大基