臨床免疫學(xué)實驗：3 間接免疫熒光法測抗核抗體_第1頁
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文檔簡介

間接免疫熒光法檢測血清中抗核抗體是利用熒光標(biāo)記第二抗體（羊抗人IgG）檢測未知抗體（一抗）的方法。以檢測人血清抗核抗體（ANA）為例。病人血清中ANA（Ab）能與各種系細(xì)胞核成分（Ag）特異性結(jié)合，此種結(jié)合的Ab（IgG型）能與熒光標(biāo)記的羊抗人IgG（二抗）結(jié)合，在熒光顯微鏡下，細(xì)胞核顯示熒光，提示血清中ANA的存在。間接免疫熒光技術(shù)原理間接法原理示意圖抗原抗體標(biāo)記抗體光原熒光免疫熒光技術(shù)的內(nèi)容

標(biāo)本制作熒光抗體染色熒光顯微鏡檢查組織切片：冷凍切片、石蠟切片（最常用）印片：肝、脾等細(xì)胞涂片：各種體液、穿刺液、細(xì)菌培養(yǎng)物和細(xì)胞懸液等標(biāo)本的類型標(biāo)本的制作間接法特異性抗體與相應(yīng)抗原反應(yīng)，熒光素標(biāo)記的抗抗體再與第一抗體結(jié)合。

間接熒光抗體染色法示意圖熒光抗體染色實驗步驟小鼠肝細(xì)胞印片待測血清（ANA?）熒光標(biāo)記的羊抗人IgG(二抗）37℃30′熒光顯微鏡檢測洗滌37℃30′洗滌小鼠斷頸處死取肝，PBS或NS漂洗，剪取肝橫斷面印片于玻片上，左右各一處，自然干燥；滴加無水乙醇固定，室溫涼干；

左右印片處分別蓋上一片小紙片，分別滴加陽性血清和陰性血清各1滴，37℃30′；去除紙片，PBS沖洗1min×3次，吸干水分；

左右印片處分別蓋上一片小紙片，并滴加熒光標(biāo)記羊抗人IgG（二抗）各1滴，37℃30′；

去除紙片，PBS漂洗1min×3次，吸干水分；熒光顯微鏡鏡檢。實驗步驟陽性：明亮、清晰、圓點狀熒光、大小不一。均在肝細(xì)胞上。陰性：模糊、黯淡、片狀或塊狀熒光，無細(xì)胞形，為非特異性干擾熒光。陽性結(jié)果可分為均質(zhì)型、斑點型(顆粒型）、核膜型（周邊型）、核仁型，其中以均質(zhì)型多見。結(jié)果判斷①自身抗體檢測抗核抗體(均質(zhì)型)抗核抗體(核膜型)抗核抗體(斑點型)熒光抗體技術(shù)的應(yīng)用制作核抗原片（印片）不宜太厚；

滴加的血清或熒光抗體要充分蓋滿抗原片；熒光抗體

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