微生物實驗報告

《食品微生物學(xué)實驗》

開放性實驗項目報告書“校園湖水中細(xì)菌學(xué)檢查”一、實驗流程圖參考文獻(xiàn)：1.中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn).食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗，GB/T4789.32003:13182.論大腸菌群檢測方法（華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文）3.《水環(huán)境中大腸菌群的檢測方法的研究》4.中國環(huán)境檢測《水中大腸菌群的快速檢測方法》5.環(huán)境保護(hù)與循環(huán)經(jīng)濟(jì)《水環(huán)境中大腸菌群的檢測方法的研究》6.環(huán)境工程微生物學(xué)第二版，周群英、高延耀篇著高等教育出版社出版7.環(huán)境工程微生物學(xué),王國惠主編化學(xué)工業(yè)出版社出版2005.78．污染控制微生物試驗，馬放、任南琪、楊基先主編哈爾濱工業(yè)大學(xué)出版社出版2006.19.環(huán)境微生物學(xué)，樂毅全、王士男化學(xué)工業(yè)出版社2005.310．水質(zhì)的細(xì)菌學(xué)檢驗撖云軒二、實驗?zāi)康?/p>

1.學(xué)習(xí)水樣的采取方法和水樣細(xì)菌總數(shù)測定的方法；2.掌握水樣中大腸菌群測定的原理、意義和檢測方法。三、實驗原理

1.細(xì)菌總數(shù)檢測原理：水中的細(xì)菌總數(shù)越多，說明水中有機(jī)物的含量就越高，水體被污染的程度越重。水中細(xì)菌的種屬繁多，它們對營養(yǎng)和其他生長條件的要求差別很大，不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件下，使水中所有的細(xì)菌均能生長繁殖，以一定的培養(yǎng)基平板上生長出來的菌落，計算出來的水中的細(xì)菌的總數(shù)實際上是一種近似值。腸道中的絕大多數(shù)腐生性和致病性的細(xì)菌，可在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上進(jìn)行生長。因此應(yīng)用平板菌落計數(shù)技術(shù)來測定水樣中的細(xì)菌總數(shù)基本上能代表水樣中細(xì)菌的數(shù)量。2.大腸菌群檢測的原理：大腸菌群是一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，該菌主要來源于人畜糞便，故以此作為糞便污染指標(biāo)來評價食品的衛(wèi)生質(zhì)量，推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。食品中的大腸菌群數(shù)系以100ml(g)檢樣內(nèi)大腸菌群最可能數(shù)(MPN)表示。MPN法是一種將樣品多次管稀釋至無菌的計數(shù)方法，將三個稀釋梯度的待檢驗樣品稀釋液接種于九只或15只試管培養(yǎng)基中，每個稀釋梯度樣液接種3或5支，經(jīng)過培養(yǎng)后查閱MPN檢測表，就可以得到原來樣品液中微生物的估計數(shù)量。

3.水和飲料的微生物指標(biāo)評價標(biāo)準(zhǔn)：按中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB17324—1998.純凈水的微生物衛(wèi)生指標(biāo)為菌落總數(shù)≤20cfu/1ml。大腸菌群≤3mpn/100ml。致病菌不得檢出。霉菌.酵母菌不得檢出。其中一項不合格者為不合格產(chǎn)品。

四、實驗步驟（一）材料的采集：校園湖水——星月湖

取距湖水面10-15cm深層水樣，先將滅菌的帶玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻轉(zhuǎn)過來，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛滿后，將瓶塞蓋好，再從水中取出，最好立即檢查，否則需放入冰箱4°C中保存，但不能超過24h。（二）材料的預(yù)處理：1．乳糖蛋白胨培養(yǎng)基(供多管發(fā)酵法的復(fù)發(fā)酵用)(1)成份：蛋白胨2.5g，牛肉膏0.75g，乳糖1.25g，Nacl1.25g，1.6%溴甲酚紫乙醇0.25ml，蒸餾水250ml.(2)PH=7.2-7.4(3)制備：按配方分別稱取上述成份加熱溶于250ml蒸餾水，調(diào)整pH=7.2-7.4加入1.6%的溴甲酚乙醇溶液0.25ml。充分混勻后分裝于試管內(nèi)，每管10ml，另取一小倒管裝滿培養(yǎng)基倒放入試管內(nèi)，塞好棉塞，包扎。置于高壓滅菌鍋內(nèi)以0.7kg/cm2（115℃）滅菌20min,取出置于陰冷處備用。2．三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液（供多管法發(fā)酵用）（1）成份：蛋白胨7.5g,牛肉膏2.25g,乳糖3.75g,Nacl3.75g,1.6%溴甲酚紫乙醇溶液0.75ml,蒸餾水250ml。（2）pH=7.2-7.4(3)制備：按配方分別稱取上述成份加熱溶于250ml蒸餾水，調(diào)整pH=7.2-7.4加入1.6%的溴甲酚乙醇溶液0.75ml，充分混勻后分裝于試管內(nèi)，每管5ml。在每管中倒放入裝滿培養(yǎng)基的小導(dǎo)管。塞好棉塞，包扎，置于高壓滅菌鍋內(nèi)以115℃滅菌20min，取出置于陰冷處備用。3．伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基（1）成份：蛋白胨2.5g，乳糖2.5g,磷酸氫二鉀0.5g,瓊脂5g,蒸餾水250ml.,2%伊紅5ml,美藍(lán)水溶液3.25ml。（2）制備：先將瓊脂加至200ml蒸餾水，加熱溶解，后加入磷酸氫二鉀及蛋白胨乳糖使之溶解,再調(diào)pH=7.2-7.4,再加入伊紅,美藍(lán)水溶液,置于高壓滅菌鍋內(nèi)以（115℃）滅菌20min,儲存于冷暗處備用。4．牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制備(1)蛋白胨1.5g，牛肉膏0.75g，Nacl0.75g，瓊脂3g,蒸餾水250ml.（2）pH=7.6（3）制備：將上述成份依次倒入裝有250ml蒸餾水的燒杯中溶解，待全部溶解后，加水補足因加熱蒸發(fā)的水量，用10%NaOH調(diào)整pH為7.6。塞上棉塞，包扎好待滅菌。5.乳糖膽鹽發(fā)酵管（單料）（1）成分蛋白胨20g、豬膽鹽(或牛、羊膽鹽)5g、乳糖10g、0.04%溴甲酚紫水溶液25mL、蒸餾水1000mL、pH7.4（2）制法將蛋白胨、膽鹽及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示劑,分裝每管10mL,并放入一個小倒管,115℃高壓滅菌15min。注:雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外,其他成分加倍。6、乳糖膽鹽發(fā)酵管（單料，雙料一起配制，按樣品份數(shù)成比例配制，雙料：單料=1：2）蛋白胨40g、豬膽鹽(或牛、羊膽鹽)10g、乳糖20g、0.04%溴甲酚紫水溶液12mL（酌情增減）、蒸餾水1000mL、pH7.4（3）按樣品份數(shù)*45=所需配制量，按上述比例換算配料稱取量。（4）將試管排好，放入小倒管（管口朝下），1份樣品需9支試管，其中3支配雙料，6支配單料。（5）鍋中放入比所需配制量略多的蒸餾水（考慮加溫煮沸時蒸發(fā)）按1換算值稱取配料、乳糖，放入鍋中，靜置10-15分鐘，小火煮沸5-10分鐘，