抗腫瘤藥物藥效學(xué)指導(dǎo)建議原則

抗腫瘤藥品藥效學(xué)指導(dǎo)原則我的研究-5-首頁(yè)#B-b:l:q7u\u001Dk\u001AL一、基本原則1.抗腫瘤藥品分類(1)細(xì)胞毒類藥品(cytotoxicagent)：涉及干擾核酸和蛋白質(zhì)合成、克制拓?fù)洚悩?gòu)酶及作用于微管系統(tǒng)的藥品等；(2)生物反映調(diào)節(jié)劑(biologicalresponsemodifier)；(3)腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑(resistancereversalagent)；(4)腫瘤治療增敏劑(oncotherapysensitizer)；(5)腫瘤血管生成克制劑(tumorangiogenesisinhibitor)；(6)分化誘導(dǎo)劑(differentiationinducingagent)；(7)生長(zhǎng)因子克制劑(growthfactorinhibitor)；(8)反義寡核苷酸(antisenseoligonucleotide)。2.抗腫瘤藥品藥效學(xué)需研究?jī)?nèi)容2.1

涉及體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)，體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)。2.2

評(píng)價(jià)藥品的抗癌活性時(shí)，以體內(nèi)實(shí)驗(yàn)成果為主，同時(shí)參考體外實(shí)驗(yàn)成果以做出對(duì)的的結(jié)論。2.3

I類抗腫瘤新藥應(yīng)進(jìn)行藥品作用機(jī)制初步研究。二、體外抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.1對(duì)候選化合物進(jìn)行初步篩選；1.2理解候選化合物的抗瘤譜；1.3為隨即進(jìn)行的體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)提供參考，如劑量范疇、腫瘤類別等。2.實(shí)驗(yàn)辦法選用10-15株人癌細(xì)胞株，根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇對(duì)應(yīng)細(xì)胞系及適量的細(xì)胞接種濃度，按常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)法進(jìn)行培養(yǎng)；推薦使用四氮唑鹽MTT還原法、XTT還原法、磺酰羅丹明B染色法、或51Cr釋放實(shí)驗(yàn)、集落形成法等測(cè)定藥品的抗癌作用。藥品與細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)間普通為48-72小時(shí)，貼壁細(xì)胞需先貼壁24小時(shí)后再給藥。實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)陽(yáng)性及陰性對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照用一定濃度的原則抗腫瘤藥，陰性對(duì)照為溶媒對(duì)照。3.評(píng)價(jià)原則以同同樣品不同濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞克制率作圖可得到劑量效應(yīng)曲線，然后采用Logit法計(jì)算半數(shù)有效濃度(IC50值或EC50值)。體外實(shí)驗(yàn)最少重復(fù)一次。附注：評(píng)價(jià)藥品抗癌活性的辦法：1.

MTT還原法1.1

基本原理：四氮唑[MTT,3-(4,5-dimethylibiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide]是一種能接受氫原子的染料?；罴?xì)胞線粒體中與NADP有關(guān)的脫氫酶在細(xì)胞內(nèi)可將黃色的MTT轉(zhuǎn)化成不溶性的藍(lán)紫色的甲[月替](formazan)，而死的細(xì)胞則無(wú)此功效。用二甲基亞諷(DMSO)溶解甲[月替]后，在一定波長(zhǎng)下用酶標(biāo)儀測(cè)定光密度值，即可定量測(cè)出細(xì)胞的存活率。1.2操作環(huán)節(jié):1.2.1選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)久的貼壁腫瘤細(xì)胞，用胰酶消化后，用含10％小牛血清的RPMIl640培養(yǎng)基配成5000個(gè)／ml的細(xì)胞懸液，接種在96孔培養(yǎng)板中，每孔接種200μl，37℃1.2.2實(shí)驗(yàn)組換新的含不同濃度被測(cè)樣品的培養(yǎng)基，對(duì)照組則換含等體積溶劑的培養(yǎng)基，每組設(shè)3～5平行孔，37℃1.2.3棄去上清液，每孔加入200μl新鮮配制的含0.2mg／mlMTT的無(wú)血清培養(yǎng)基．37℃繼續(xù)培養(yǎng)4h。小心棄上清，并加入200μlDMSO，用微型超聲振蕩器混勻后，在酶標(biāo)儀上以實(shí)驗(yàn)波長(zhǎng)為570nm，參比波長(zhǎng)為450nm測(cè)定光密度值。1.3成果評(píng)定:按下式計(jì)算藥品對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的克制率：腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)克制率％＝(1-OD實(shí)驗(yàn)/OD對(duì)照)×100％以同同樣品的不同濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)克制率作圖可得到劑量反映曲線，從中求出樣品的半數(shù)殺傷濃度IC50。合成化合物或植物提取純品的IC50＜10μg／m1或植物粗提物的IC50＜20μg／m1時(shí)，則判斷樣品在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷作用。2.生長(zhǎng)曲線法的基本原理：在最適條件下，腫瘤細(xì)胞在培養(yǎng)液中呈指數(shù)生長(zhǎng)，如取細(xì)胞數(shù)的對(duì)數(shù)與培養(yǎng)時(shí)間作圖可得一條直線，故稱此時(shí)為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)久。隨著細(xì)胞密度不停增高，由于代謝產(chǎn)物的積聚及營(yíng)養(yǎng)物的消耗，細(xì)胞生長(zhǎng)逐步減慢以致停止，此時(shí)稱高坪期或穩(wěn)定時(shí)。因此藥品對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響可通過(guò)生長(zhǎng)曲線反映出來(lái)。3.染料排斥實(shí)驗(yàn)的基本原理：活細(xì)胞有排斥某些染料如伊紅、臺(tái)盼藍(lán)、苯胺黑等的能力，而死細(xì)胞由于膜完整性的破壞，可被著色。因此培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞中加入這些染料，一定時(shí)間后，對(duì)著色和未著色的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，即可算出被殺死的細(xì)胞比例。4.集落形成法的基本原理：克隆原細(xì)胞含有持續(xù)增殖能力，當(dāng)單個(gè)細(xì)胞分裂6代或6代以上時(shí)，其后裔所構(gòu)成的群體(集落)便含50個(gè)以上細(xì)胞。通過(guò)集落計(jì)數(shù)可對(duì)克隆原細(xì)胞作定量分析。它反映了單個(gè)細(xì)胞的增殖潛力，故能較敏捷地測(cè)定抗癌藥的活性，日前被認(rèn)為是一種較抱負(fù)的檢測(cè)辦法。慣用的集落形成法可分為貼壁法及半固體培養(yǎng)法兩種。5.SRB法的基本原理：SRB(sulforhodamine是一種蛋白質(zhì)結(jié)合染料，粉紅色，可溶于水。SRB可與生物大分子中的堿性氨基酸結(jié)合。其在515nm波長(zhǎng)的OD讀數(shù)與細(xì)胞數(shù)呈良好的線性關(guān)系。故可用作細(xì)胞數(shù)的定量。MTT法的一種缺點(diǎn)是OD值可隨放置時(shí)間而變，而SRB法無(wú)此現(xiàn)象。因此更合用于進(jìn)行大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)。三、體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)必須選用三種以上腫瘤模型，其中最少一種為人癌裸小鼠移植模型或其它人癌小鼠模型。實(shí)驗(yàn)成果三種模型均為有效，再重復(fù)一次也為有效，評(píng)定該化合物對(duì)這些實(shí)驗(yàn)性腫瘤含有治療作用。激勵(lì)使用人類腫瘤裸鼠移植瘤模型和多個(gè)類的移植瘤模型、原位接種模型和中空纖維測(cè)定(hollow-fiberassay)等辦法。1.動(dòng)物動(dòng)物規(guī)定健康，符合等級(jí)動(dòng)物規(guī)定，有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證。雌雄均可，但同一批實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物性別必須相似。小鼠鼠齡為5-6周，體重為18-22克。評(píng)價(jià)同一物質(zhì)的活性時(shí)，不同批次的實(shí)驗(yàn)必須采用同一品系的小鼠。2.腫瘤模型2.1

小鼠腫瘤模型淋巴細(xì)胞白血病腹水瘤L1210和P388、白血病L-615、宮頸癌U14、肝癌H22、Lewis肺癌、黑色素瘤B16、網(wǎng)織細(xì)胞瘤M5076、腸癌26、腸腺癌38、乳腺癌CD8F1、艾氏腹水瘤（EAC）、肉瘤-180等，以及多個(gè)小鼠腫瘤的亞型和耐藥株等。2.2人癌裸小鼠移植瘤模型應(yīng)選用體外實(shí)驗(yàn)敏感細(xì)胞株進(jìn)行體內(nèi)抗人癌裸小鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)。模型建立和使用應(yīng)注意：(1)

移植瘤普通由對(duì)應(yīng)的細(xì)胞株移植而建立，對(duì)細(xì)胞株和移植瘤的化療敏感性應(yīng)予理解。(2)

移植瘤復(fù)蘇后普通應(yīng)傳2-3代后再用于體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)。(3)

對(duì)模型生長(zhǎng)狀況應(yīng)全方面理解，特別是生長(zhǎng)快的模型(4)

為了保持移植瘤的生物學(xué)特性和遺傳特性，復(fù)蘇后移植瘤體內(nèi)傳代應(yīng)少于15-20代3.實(shí)驗(yàn)過(guò)程3.1接種：腫瘤接種辦法重要有皮下接種、腹腔接種和原位接種。3.1.1皮下腫瘤模型選擇腫瘤生長(zhǎng)旺盛且無(wú)潰破的荷瘤小鼠，頸椎脫臼處死，在無(wú)菌條件下（超凈臺(tái)或接種罩），用碘酒、酒精或新潔爾滅消毒動(dòng)物皮膚，切開(kāi)皮膚，剝離腫瘤。將瘤組織剪成1.5mm3左右，用套管針接種于動(dòng)物一側(cè)或雙側(cè)腋窩皮下；或制成細(xì)胞懸液，然后按一定比例加入無(wú)菌生理鹽水，普通每只小鼠接種腫瘤細(xì)胞數(shù)量為（1-5）×106。3.1.2腹水瘤模型無(wú)菌條件下，消毒動(dòng)物皮膚，吸取生長(zhǎng)良好的動(dòng)物腹水，以生理鹽水按一定比例稀釋后接種于動(dòng)物腹腔，接種細(xì)胞數(shù)量普通為（1-5）×106。3.1.3原位接種模型原位接種是指將來(lái)源于某臟器的腫瘤接種在動(dòng)物的某臟器，如將人肝癌接種在裸小鼠的肝臟。原位接種不是常規(guī)的辦法，但有其優(yōu)越性，是激勵(lì)使用的辦法。重要有肺、肝、胃、腸、乳腺、顱內(nèi)等原位接種辦法。3.2動(dòng)物分組3.2.1實(shí)驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、治療組。3.2.2治療組設(shè)高、中、低三個(gè)劑量組。小鼠腫瘤和腹水瘤接種后次日將動(dòng)物隨機(jī)分組。裸鼠移植瘤用游標(biāo)卡尺測(cè)量移植瘤直徑，待腫瘤生長(zhǎng)至100—300mm3后將動(dòng)物隨機(jī)分組。3.2.3

動(dòng)物數(shù)普通小鼠每組10只，裸鼠6只。陰性對(duì)照組動(dòng)物數(shù)為治療組動(dòng)物數(shù)×實(shí)驗(yàn)組數(shù)1/23.3劑量設(shè)立3.3.1治療組設(shè)高、中、低劑量治療組，普通按4:2:1設(shè)立，高劑量使用最大耐受量或LD10的劑量。3.3.2

陰性對(duì)照組予以對(duì)應(yīng)的溶劑；3.3.3

陽(yáng)性對(duì)照藥選用對(duì)該動(dòng)物敏感的、臨床應(yīng)用的抗腫瘤藥品，3.3.4

如受試物為一抗癌藥品的衍生物或類似物時(shí)，必須選用該抗癌藥品作為陽(yáng)性對(duì)照藥。3.4陽(yáng)性對(duì)照藥選擇原則療效確切；與被試物質(zhì)化學(xué)構(gòu)造類似；與被試物質(zhì)有類似的作用機(jī)理。3.5藥品配制溶于水的藥品，用生理鹽水或蒸餾水配制；如用酸、堿溶解者，可先用小量酸(0.1-0.5NHCl)或堿(NaHCO3、Na2CO3、NaOH)溶解，調(diào)節(jié)pH在4.5-9.0的范疇內(nèi)。用乙醇、丙二醇、吐溫80、DMSO助溶的藥品，或用吐溫60、吐溫80、2-3%淀粉、0.5%羧甲基纖維素制成混懸液的藥品，可腹腔注射或口服，但必須設(shè)相似濃度的溶劑對(duì)照組。用注射用花生油配制的溶液或乳劑可口服、皮下或肌肉注射。3.6給藥方案和給藥途徑分組當(dāng)天開(kāi)始給藥，根據(jù)不同藥品的代謝動(dòng)力學(xué)和毒性反映等擬定給藥方案。給藥途徑應(yīng)與推薦臨床用藥的途徑相似。給藥次數(shù)較多，或被試物質(zhì)溶解性較差，靜脈給藥有困難時(shí)，可考慮使用腹腔給藥，但在評(píng)價(jià)藥效時(shí)要注意這兩種給藥途徑是有差別的?？刹捎昧鲋?、瘤內(nèi)、肌肉、皮下給藥途徑。腹水瘤實(shí)驗(yàn)時(shí)普通不能應(yīng)用腹腔給藥途徑。4評(píng)價(jià)原則4.1腹水瘤模型接種給藥后，觀察和統(tǒng)計(jì)動(dòng)物死亡時(shí)間，計(jì)算生存天數(shù)。如陰性對(duì)照組20%動(dòng)物存活時(shí)間超出4周，表明腹水瘤生長(zhǎng)不良，實(shí)驗(yàn)作廢。采用中位生存時(shí)間（即mediansurvivaltime,MST）來(lái)評(píng)價(jià)每組的生存時(shí)間，其計(jì)算公式為：每組鼠數(shù)的中間數(shù)-中間生存天數(shù)前死亡的鼠數(shù)MST=（中間生存天數(shù)-0.5）+中間生存天數(shù)死亡的鼠數(shù)治療組與對(duì)照組的比較，采用T/C（%）來(lái)表達(dá)，計(jì)算公式為：

TMSTT/C%=────×100%

CMSTTMST：治療組MST；CMST：陰性對(duì)照組MST。評(píng)價(jià)原則以125%為界，當(dāng)T/C%≥125%時(shí)。視為有效，反之則無(wú)效。4.2裸鼠移植瘤模型推薦使用測(cè)量瘤徑的辦法，動(dòng)態(tài)觀察受試物抗腫瘤的效應(yīng)。腫瘤直徑的測(cè)量次數(shù)根據(jù)移植瘤的生長(zhǎng)狀況而定，普通為每七天2-3次,每次測(cè)量同時(shí)還需稱鼠重。腫瘤體積(tumorvolume,TV)的計(jì)算公式為：V=1/2×a×b2或π/6×a×b×c其中a、b、c分別表達(dá)長(zhǎng)寬高。兩公式的有關(guān)性極好，可采用任一公式。根據(jù)測(cè)量成果計(jì)算出相對(duì)腫瘤體積（relativetumorvolume，RTV），RTV=Vt/V0。其中V0為分籠給藥時(shí)(即d0)測(cè)量所得腫瘤體積，Vt為每一次測(cè)量時(shí)的腫瘤體積。抗腫瘤活性評(píng)價(jià)指標(biāo)為相對(duì)腫瘤增殖率T/C（%）

TRTVT/C%=────×100%

CRTVTRTV：治療組RTV；CRTV：陰性對(duì)照組RTV。療效評(píng)價(jià)原則：T/C%>40%為無(wú)效；T/C%≤40%，并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)解決P<0.05為有效。4.3小鼠腫瘤模型生長(zhǎng)較慢小鼠腫瘤采用與裸鼠移植瘤同樣的測(cè)量瘤徑的評(píng)價(jià)辦法。生長(zhǎng)較快小鼠腫瘤可采用稱瘤重的辦法評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物，稱體重，解剖剝離瘤塊，稱瘤重。陰性對(duì)照組腫瘤平均瘤重不大于1克，或20%腫瘤重量不大于400毫克，表達(dá)腫瘤生長(zhǎng)不良，實(shí)驗(yàn)作廢。療效評(píng)價(jià)公式：

給藥組平均瘤重-陰性對(duì)照組平均瘤重腫瘤生長(zhǎng)克制率=────────────────────×100%

陰性對(duì)照組平均瘤重評(píng)價(jià)原則：腫瘤生長(zhǎng)克制率<40%為無(wú)效；腫瘤生長(zhǎng)克制率≥40%，并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)解決P<0.05為有效。4.4原位接種模型不同原位接種模型可采用不同評(píng)價(jià)辦法，重要有瘤重和生存時(shí)間評(píng)價(jià)法。如肝原位接種可用瘤重評(píng)價(jià)，顱內(nèi)接種可用生存時(shí)間評(píng)價(jià)。評(píng)價(jià)辦法、原則和注意事項(xiàng)同腹水瘤模型和小鼠腫瘤模型。四、抗腫瘤藥品的特殊規(guī)定I類抗腫瘤新藥應(yīng)進(jìn)行藥品作用機(jī)制的初步研究。非細(xì)胞毒類藥品除完畢體內(nèi)外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)，還應(yīng)進(jìn)行特定抗腫瘤作用研究。1.生物反映調(diào)節(jié)劑藥效學(xué)涉及：體內(nèi)抗癌實(shí)驗(yàn)和免疫功效研究。1.1

體內(nèi)抗癌實(shí)驗(yàn)注意點(diǎn)：模型：裸鼠是免疫缺點(diǎn)動(dòng)物，普通應(yīng)用正常免疫鼠腫瘤模型。給藥時(shí)間：可按常規(guī)給藥，也可在接種前預(yù)先給藥，接種后繼續(xù)給藥或停藥。腫瘤細(xì)胞接種量：可比細(xì)胞毒類藥品低一種數(shù)量級(jí)，普通為(1-5)?105個(gè)瘤細(xì)胞/小鼠。給藥辦法：可單獨(dú)給藥，也可與其它抗腫瘤藥品合并使用，觀察增效或減毒作用。1.2

免疫功效實(shí)驗(yàn)辦法含有抑瘤作用的生物反映調(diào)節(jié)劑，還需作免疫功效測(cè)定,以明確其抑瘤作用與否與免疫功效調(diào)控有關(guān)。免疫功效測(cè)定涉及細(xì)胞免疫和體液免疫兩方面。免疫功效測(cè)定有：（1）

巨噬細(xì)胞功效測(cè)定（2）

天然殺傷細(xì)胞(naturalkillcell)測(cè)定（3）

淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)（4）

淋巴因子活化的殺傷細(xì)胞測(cè)定(lymphocyte-activatedkillercell)（5）

多個(gè)細(xì)胞因子測(cè)定，如IL-2、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α等。（6）

遲發(fā)型超敏反映檢測(cè)2.腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑2.1

體外抗耐藥活性實(shí)驗(yàn)選擇2-3對(duì)腫瘤耐藥/敏感細(xì)胞株，采用MTT法或SRB法測(cè)定細(xì)胞毒性。普通在無(wú)毒劑量或相稱于IC10的劑量下設(shè)三個(gè)劑量，并設(shè)立對(duì)應(yīng)的陽(yáng)性和陰性對(duì)照組。評(píng)價(jià)逆轉(zhuǎn)效果用逆轉(zhuǎn)倍數(shù)(foldreversal,FR)表達(dá)：FR=IC50(不加逆轉(zhuǎn)劑)/IC50(加逆轉(zhuǎn)劑)。注意的方面：耐藥株的耐藥性：耐藥株因傳代，特別是撤藥后耐藥性可變化或消失；實(shí)驗(yàn)前必須對(duì)實(shí)驗(yàn)?zāi)退幹赀M(jìn)行耐藥倍數(shù)(FR)測(cè)定，確保實(shí)驗(yàn)的可*性。若非逆轉(zhuǎn)多藥耐藥(MDR)而是逆轉(zhuǎn)單藥耐藥，則實(shí)驗(yàn)的瘤株中需有針對(duì)該藥的耐藥細(xì)胞株。陽(yáng)性對(duì)照藥建議采用維拉帕米(verapamil)10μM環(huán)孢菌素A(cyclosporinA)3μM。2.2

體內(nèi)抗腫瘤耐藥活性實(shí)驗(yàn)小鼠敏感和對(duì)應(yīng)的耐藥腫瘤和人癌裸鼠敏感和對(duì)應(yīng)的耐藥移植瘤。2.3耐藥基因及其體現(xiàn)產(chǎn)物測(cè)定可測(cè)定腫瘤細(xì)胞內(nèi)的藥品濃度變化和耐藥基因及其體現(xiàn)產(chǎn)物，初步明確其逆轉(zhuǎn)耐藥機(jī)制。涉及多藥耐藥基因及其編碼蛋白(multidrugresistancegene/p-glycoprotein,Mdr1/Pgp)、多藥耐藥有關(guān)蛋白(multidrugresistance-relatedprotein,MRP)、肺耐藥有關(guān)蛋白(lungresistance-relatedprotein,LRP)、其它與耐藥有關(guān)的基因/蛋白及酶等。3.抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥品腫瘤與否轉(zhuǎn)移不僅依賴于腫瘤細(xì)胞本身含有的內(nèi)在轉(zhuǎn)移潛能，并且也取決于機(jī)體抗轉(zhuǎn)移因素的消長(zhǎng)。因此，抗轉(zhuǎn)移藥品只有在動(dòng)物體內(nèi)模型上才干得出符合實(shí)際的成果。3.1體外實(shí)驗(yàn)測(cè)定候選化合物作用下腫瘤細(xì)胞對(duì)基底膜的侵襲、粘附和腫瘤細(xì)胞趨化性運(yùn)動(dòng)的能力。3.2體內(nèi)實(shí)驗(yàn)3.2.1模型：小鼠B16黑色素瘤、小鼠Lewis肺癌等和人癌裸鼠移植高轉(zhuǎn)移瘤模型。3.2.2接種辦法：慣用靜脈注射辦法，也可用皮下接種等辦法。3.2.3評(píng)價(jià)指標(biāo)接種給藥后，觀察統(tǒng)計(jì)動(dòng)物死亡時(shí)間，計(jì)算生存天數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，稱動(dòng)物體重、肺重、移植瘤重，解剖顯微鏡下計(jì)數(shù)肺轉(zhuǎn)移瘤灶、測(cè)瘤徑(計(jì)算肺轉(zhuǎn)移瘤體積)和病理組織學(xué)切片觀察等；計(jì)算轉(zhuǎn)移率轉(zhuǎn)移克制率=1-(治療組轉(zhuǎn)移率/對(duì)照組轉(zhuǎn)移率)×100%。4.腫瘤血管生成克制劑4.1體外實(shí)驗(yàn)體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ陀?（1）人血管內(nèi)皮細(xì)胞模型：人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞和人微血管（肺、皮膚等）內(nèi)皮細(xì)胞。（2）血管形成增進(jìn)因子等刺激細(xì)胞DNA合成、增殖、遷移、血管形成(tubeformation)來(lái)觀察藥品的抗血管形成作用。如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)或堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)（3）腫瘤細(xì)胞模型：重要應(yīng)用國(guó)內(nèi)已建立的人實(shí)體癌細(xì)胞系，擬定VEGF、FGF等高分泌的細(xì)胞株。檢測(cè)細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移能力及血管形成因子的基因體現(xiàn)狀況來(lái)評(píng)價(jià)藥品。4.2體內(nèi)實(shí)驗(yàn)4.2.1血管克制實(shí)驗(yàn)典型的血管形成評(píng)價(jià)辦法有：雞絨毛膜尿囊和卵黃膜囊（CAM）、嚙齒動(dòng)物虹膜和角膜等。也可用如皮下移植塑料或多孔的polytetrafluoroethylene管、皮下移植無(wú)菌的海綿；某些自然的或化學(xué)修飾的物質(zhì)如Matrigel和纖維凝膠等用于體內(nèi)模型。4.2.2

抗腫瘤實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察新生血管生成克制劑的體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)檢測(cè)移植瘤的血管密度、血管生成因子和克制因子的分泌和體現(xiàn)，以及腫瘤的轉(zhuǎn)移狀況等綜合評(píng)價(jià)腫瘤血管生成克制劑的作用和作用機(jī)制。5.分化誘導(dǎo)劑分化誘導(dǎo)劑的藥效學(xué)研究涉及體外和體內(nèi)研究模型；現(xiàn)在的藥品重要能對(duì)急性白血病進(jìn)行有效的分化治療