毛果蕓香堿微乳滴眼劑與毛果蕓香堿滴眼液在兔房水中的藥代動(dòng)力學(xué)對(duì)比研究

毛果蕓香堿微乳滴眼劑與毛果蕓香堿滴眼液在兔房水中的藥代動(dòng)力學(xué)對(duì)比研究

毛果玉科滴眼液具有降壓、降眼壓、治療各種明光疾病的功效，是臨床上不可或缺的藥物之一。但該劑型有很多缺點(diǎn),藥物滴眼后立即被結(jié)膜囊中的淚液稀釋,并很快從淚道排出,因此生物利用度低,作用時(shí)間短暫,需反復(fù)頻繁滴眼,易發(fā)生局部毒性反應(yīng)及病人依從性差等一系列問(wèn)題。為了延長(zhǎng)毛果蕓香堿滴眼液的藥物作用時(shí)間,增強(qiáng)毛果蕓香堿的眼內(nèi)通透性及生物利用度,減少用藥次數(shù),降低毒性,提高療效,近年來(lái)對(duì)毛果蕓香堿的長(zhǎng)效劑型進(jìn)行了許多研究,目前國(guó)外正在研究的劑型有脂質(zhì)體、膠束溶液(micellarsolution)、微乳及微粒體等。微乳近年來(lái)作為藥物載體受到醫(yī)藥界的重視。國(guó)內(nèi)對(duì)這方面的研究剛起步,在眼科制劑方面尚未見(jiàn)有關(guān)報(bào)道。我們于1997年起開(kāi)始研制毛果蕓香堿微乳滴眼劑,并對(duì)毛果蕓香堿微乳滴眼劑與毛果蕓香堿滴眼液在兔眼房水中的藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了對(duì)比研究。材料和方法一、甲醇、磷酸氫二鉀、二氯甲烷硝酸毛果蕓香堿為進(jìn)口原料分裝,符合英國(guó)藥典;甲醇、磷酸氫二鉀、二氯甲烷為國(guó)產(chǎn)分析純。將硝酸毛果蕓香堿制備成2%的毛果蕓香堿微乳滴眼劑,另制備2%毛果蕓香堿滴眼液作對(duì)照。二、方法1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康白兔60只,雌雄兼用,體重2~3kg,隨機(jī)分成20組,10個(gè)實(shí)驗(yàn)組,10個(gè)對(duì)照組,每組3只兔(6只眼)。2.房水標(biāo)本采集用微量取樣器分別對(duì)各實(shí)驗(yàn)組家兔雙眼結(jié)膜囊內(nèi)滴2%毛果蕓香堿微乳滴眼劑50μl,對(duì)各對(duì)照組家兔雙眼結(jié)膜囊內(nèi)滴2%毛果蕓香堿滴眼液50μl。房水標(biāo)本采集時(shí)間為給藥后5、10、30、40、60、90、120、180、240及360min。所有樣品均儲(chǔ)存于-20℃下,以備測(cè)定。3.離心1.10min取房水200μl,加二氯甲烷4ml,振蕩2min。以3000r/min離心10min。取有機(jī)層,50℃氮?dú)饬飨麓蹈?加入流動(dòng)相100μl振蕩4min溶解,取50μl注入液相色譜儀中,將峰面積代入回歸曲線,求得所測(cè)試樣品濃度。4.方法的回收率、精密度和重現(xiàn)性采用的高壓液相色譜儀為日本島津LC-10A型。色譜條件:色譜柱為SpherisorbC18,200.0mm×4.6mm,粒度5μm;流動(dòng)相為0.073mol/L磷酸氫二鉀-甲醇(80:20);流速1.5ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為215nm,柱溫為55℃,進(jìn)樣量為50μl。峰面積與濃度做線性回歸,標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度系列為0.2、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0mg/L,最低檢測(cè)限為0.01mg/L,以外標(biāo)法進(jìn)行定量。用0.5、1.0和2.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行方法精密度和重現(xiàn)性考察;用0.5、1.0和2.0mg/L3種濃度進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)。5.統(tǒng)計(jì)處理采用t檢驗(yàn),以P<0.05作為差異有顯著性標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果一、一般情況下2%毛果蕓香堿微乳滴眼劑及2%毛果蕓香堿滴眼液滴眼后,各時(shí)間點(diǎn)均未出現(xiàn)眼瞼痙攣、結(jié)膜充血、結(jié)膜水腫及流淚等刺激癥狀。二、不干擾測(cè)定毛果蕓香堿的保留時(shí)間為5.6min,空白不干擾測(cè)定。以峰面積對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸,房水中毛果蕓香堿的濃度在0.2~8.0mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,r=0.9999。三、hplc標(biāo)準(zhǔn)溶液的準(zhǔn)確度和重復(fù)性表1四、毛果貴族的回收率由表2可見(jiàn)兔眼房水中不同濃度毛果蕓香堿的回收量及回收率,平均回收率為89.3%。五、時(shí)房水中是否檢測(cè)不出藥物1.2%毛果蕓香堿滴眼液組:用2%毛果蕓香堿滴眼液50μl滴眼1次后,30min時(shí)房水中的藥物濃度達(dá)到最高值(2.25mg/L),60min時(shí)房水中的濃度僅為30min時(shí)的7%,120min時(shí)房水中的濃度是30min時(shí)的4%,180min時(shí)房水中已檢測(cè)不出藥物(表3)。2.2%毛果蕓香堿微乳滴眼劑組:用2%毛果蕓香堿微乳滴眼劑50μl滴眼1次后,30min時(shí)房水中藥物濃度達(dá)最高值(5.37mg/L)。60min時(shí)房水中的濃度是30min時(shí)的20%,120min時(shí)房水中的濃度是30min時(shí)的6%,360min時(shí)房水中的濃度是30min時(shí)的1%(表3)。3.2%毛果蕓香堿微乳滴眼劑與2%毛果蕓香堿滴眼液的比較:2%毛果蕓香堿微乳滴眼劑或滴眼液50μl滴眼后,除5min時(shí)間點(diǎn)外,其余各時(shí)間點(diǎn)毛果蕓香堿微乳滴眼劑治療組的房水藥物濃度較毛果蕓香堿滴眼液組明顯增高(P=0.0003~0.042)。微乳滴眼劑的藥-時(shí)曲線下面積是滴眼液的3倍,微乳滴眼劑的生物利用度比滴眼液高2倍。用微乳后6h,房水中仍可以測(cè)出毛果蕓香堿的濃度,而用滴眼液后3h,房水中已測(cè)不出毛果蕓香堿。討論一、公正透明,適合大規(guī)模應(yīng)用微乳是一種特殊的液-液分散體系,微乳除具有乳劑的一般特性外,還具有粒徑小、透明、穩(wěn)定、吸收迅速完全及易于過(guò)濾等特殊優(yōu)點(diǎn),實(shí)用價(jià)值較大,在藥物制劑方面應(yīng)用廣泛。我們將毛果蕓香堿制備成微乳滴眼劑,經(jīng)本實(shí)驗(yàn)證明該劑型可明顯增加毛果蕓香堿的角膜滲透性,提高毛果蕓香堿的生物利用度。二、毛果蕓香堿微乳生物利用度微乳劑型增加毛果蕓香堿角膜滲透性的機(jī)制主要與微乳的結(jié)構(gòu)有關(guān)。在微乳制劑中,毛果蕓香堿不僅可分布在水相,還可分布在極小的油滴內(nèi)及油水交界處,這樣將使毛果蕓香堿穿透角膜的能力大大增加。微乳還具有一定的緩釋作用。Naveh等推測(cè)毛果蕓香堿微乳可能是通過(guò)角膜上皮粘蛋白層的吸收,與角膜形成較強(qiáng)的親和力,從而明顯增加角膜內(nèi)的毛果蕓香堿濃度。而角膜上皮層中毛果蕓香堿的含量占角膜內(nèi)總含量的80%,其可作為一個(gè)儲(chǔ)庫(kù)持續(xù)向房水內(nèi)釋放毛果蕓香堿。此外,微乳進(jìn)入角膜上皮后,經(jīng)過(guò)藥物從微乳內(nèi)部向介質(zhì)中重新分配的過(guò)程,使藥物的釋放延長(zhǎng),提高了藥物的生物利用度。本實(shí)驗(yàn)中毛果蕓香堿微乳滴眼劑的藥物峰值濃度較滴眼液明顯增高,微乳滴眼劑的藥物消除時(shí)間較滴眼液明顯延長(zhǎng),微乳滴眼劑的藥-時(shí)曲線下面積是滴眼液的3倍,微乳滴眼劑的生物利用度比滴眼液高2倍。這些均提示微乳有增加毛果蕓香堿的角膜滲透性和角膜內(nèi)儲(chǔ)存及一定的緩釋作用。三、毛果蕓香堿亞微乳制劑Naveh等的兔眼實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示用毛果蕓香堿微乳滴眼劑50μl滴眼1次,降眼壓作用可持續(xù)29h,而滴眼液的作用僅持續(xù)5h。Beilin等制備了毛果蕓香堿亞微乳制劑,實(shí)驗(yàn)表明與毛果蕓香堿水溶液組相比,亞微乳制劑組的縮瞳時(shí)間持久。Mahato等的一項(xiàng)關(guān)于毛果蕓香堿微乳滴眼劑Ⅱ期臨床實(shí)驗(yàn)表明:2%毛果蕓香堿亞微乳制劑,每天給藥2次與2%的水溶液每天給藥4次相比,降眼壓作用差異無(wú)顯著性,且未見(jiàn)與藥物相關(guān)的眼及全身毒副作用。該項(xiàng)研究認(rèn)為毛果蕓香堿亞微乳制劑每天給藥2次,可以用于青光眼的治療。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中房水藥物濃度的改變支持上述作者的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。