選3專題2 2-2-1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)

動(dòng)物細(xì)胞工程主講：柯碧動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體技術(shù)核移植技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞工程常用技術(shù)其它動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它分散成單細(xì)胞，然后,放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖。1、概念：2.2.1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)2、原理：細(xì)胞增殖如何進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)?請(qǐng)閱讀課本P44—46，思考下列問(wèn)題1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境（培養(yǎng)液和用具的無(wú)菌處理，添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清、微量元素等）3、溫度和PH

溫度36.5+0.5度，pH7.2～7.44、氣體環(huán)境

O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件離體培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)微生物和有毒物質(zhì)沒(méi)有防御能力不能用胃蛋白酶代替胰蛋白酶氧氣是細(xì)胞代謝必須的；CO2維持培養(yǎng)液的PH。問(wèn)題3：用什么方法將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？問(wèn)題1：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)選擇什么材料容易成功？為什么選用它做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織；因?yàn)槠浼?xì)胞生命力旺盛，分裂能力強(qiáng)，分化程度低。問(wèn)題2：為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？擴(kuò)大細(xì)胞與培養(yǎng)液的接觸面積，利與細(xì)胞吸收營(yíng)養(yǎng)和廢物的排出。

問(wèn)題4：為什么用胰蛋白酶處理？動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)；并且動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的最適PH值為7.2-7.4，適宜胰蛋白酶作用注意：控制好時(shí)間！長(zhǎng)時(shí)間處理當(dāng)然會(huì)損傷細(xì)胞。胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理3、過(guò)程：胚胎或幼齡動(dòng)物器官組織剪碎胰蛋白酶處理單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞懸液傳代培養(yǎng)原代培養(yǎng)胰蛋白酶處理貼壁細(xì)胞1.細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上（單層）。要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無(wú)毒、易于貼附。2.接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。腫瘤細(xì)胞失去接觸抑制。原代培養(yǎng)細(xì)胞特點(diǎn)：貼壁生長(zhǎng)、接觸抑制：原代培養(yǎng)：人們通常將動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞處于接觸抑制后,貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶處理,然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細(xì)胞繼續(xù)增殖。（分瓶培養(yǎng)的過(guò)程）傳代10代以內(nèi)，細(xì)胞正常生長(zhǎng)，保持正常二倍體核型。傳代10-50代左右，細(xì)胞增殖會(huì)逐漸緩慢，以至于完全停止，部分細(xì)胞核型可能發(fā)生變化。繼續(xù)傳代培養(yǎng)少部分細(xì)胞克服細(xì)胞壽命的自然極限，獲得不死性，細(xì)胞突變，遺傳物質(zhì)已經(jīng)改變，等同于癌細(xì)胞。

細(xì)胞株：從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出進(jìn)行傳代培養(yǎng)的細(xì)胞，傳代培養(yǎng)的細(xì)胞能傳到10-50代，其遺傳物質(zhì)沒(méi)有發(fā)生變化。

細(xì)胞系：一般傳代50代后有部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生了變化，帶有癌變的特點(diǎn)，可能在培養(yǎng)條件下無(wú)限制的傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞系。細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞部分細(xì)胞“癌變”，無(wú)限傳代動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成動(dòng)物體50代細(xì)胞原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁剝離、分瓶細(xì)胞株細(xì)胞細(xì)胞系2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：胰蛋白酶5、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用（1）生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。（3）用于檢測(cè)有毒物質(zhì)（2）為基因工程提供受體細(xì)胞（4）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)獲得細(xì)胞細(xì)胞的全能性細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)品新的個(gè)體或細(xì)胞產(chǎn)品培養(yǎng)結(jié)果或細(xì)胞產(chǎn)品快速繁殖、培育無(wú)病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動(dòng)物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目6、植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較1、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞是--------------------（）

A．細(xì)胞系B．細(xì)胞株C．原代細(xì)胞D．傳代細(xì)胞2、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是------（）

A.動(dòng)物細(xì)胞融合B.單克隆抗體

C.胚胎移植D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

練一練3.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在（

）A.培養(yǎng)基不同B.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無(wú)菌條件下進(jìn)行；C.動(dòng)物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能；D.動(dòng)物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株。4．一般來(lái)說(shuō)，動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)需要滿足以下條件①無(wú)毒的環(huán)境②無(wú)菌的環(huán)境③合成培養(yǎng)基需加血漿④溫度與動(dòng)物體溫相近⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能調(diào)節(jié)培養(yǎng)液pHA．①②③④⑤⑥B．①②③④C．①③④⑤⑥D(zhuǎn)．①②③④⑥5.下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述中，錯(cuò)誤的是A、用于培養(yǎng)的細(xì)胞大多取自胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織B、將所取的組織先用胰蛋白酶等進(jìn)行處理使其分散成單個(gè)細(xì)胞C、在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁上脫離，制成懸浮液D、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培養(yǎng)的細(xì)胞會(huì)衰老死亡

動(dòng)物細(xì)胞特點(diǎn)分化潛能變窄：隨著細(xì)胞分化程度的提高而逐漸受到限制，分化潛能變窄，這是指整體細(xì)胞而言。細(xì)胞核仍具有全能性：細(xì)胞核，它含有保持物種遺傳性所需的全套基因，而且并沒(méi)有因細(xì)胞分化而丟失基因，因此高度分化細(xì)胞的細(xì)胞核仍具有全能性想一想為什么一般不能直接利用動(dòng)物細(xì)胞培育動(dòng)物體？

根據(jù)動(dòng)物細(xì)胞核仍具有全能性的特點(diǎn),怎樣將動(dòng)物細(xì)胞的全能性表達(dá)?

再想一想利用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)

1.概念：將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。用核移植的方法得到的動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物核移植（難度高）受體細(xì)胞：MⅡ期的卵母細(xì)胞三、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易2、原理：

動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性3、種類：◆取供體細(xì)胞傳代培養(yǎng)10代以內(nèi)的細(xì)胞.為什么？◆激活方法：◆激活目的：◆促融方法：電刺激◆胚胎移植至代孕受體內(nèi)妊娠、分娩核移植流程供體：優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)奶牛受體：普通奶牛（卵母細(xì)胞的采集與培養(yǎng)）

體細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢卵母細(xì)胞（MⅡ中期）去核無(wú)核卵母細(xì)胞注入重組細(xì)胞重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體遺傳基本相同的個(gè)體總結(jié)：體細(xì)胞核移植過(guò)程（供核）（供質(zhì)）（受體）據(jù)上圖思考下列問(wèn)題：發(fā)育1.在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么