中藥制劑的含量測定技術(shù)-紫外－可見分光光度法測定含量

中藥制劑的含量測定技術(shù)——標(biāo)準曲線法測定含量2目錄

基礎(chǔ)知識1必備知識2拓展知識33基礎(chǔ)知識

紫外-可見分光光度法的定量分析依據(jù)是朗伯-比爾定律。其物理意義是：當(dāng)一束平行的單色光通過均勻的非散射體系的低濃度溶液時，在單色光強度、溶液溫度等條件不改變的情況下，吸光度與液層的厚度(光程長度)和吸光物質(zhì)濃度的乘積成正比。其數(shù)學(xué)表達式為：A=KCL式中，A為吸光度；K為吸收系數(shù)；C為溶液濃度；L為液層厚度。吸收系數(shù)是指吸光物質(zhì)在單位濃度及單位厚度時的吸光度。吸收系數(shù)K：百分吸收系數(shù)、摩爾吸收系數(shù)?！吨袊幍洹凡捎冒俜治障禂?shù)。定量方法有吸收系數(shù)法、對照品法、標(biāo)準曲線法。

配制一系列不同濃度的對照品溶液，選擇合適的參比溶液，在相同條件下分別測定各對照品溶液的吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制A-C曲線，稱為標(biāo)準曲線或工作曲線。然后在完全相同的條件下測定樣品溶液的吸光度，從標(biāo)準曲線(或回歸直線)上查出樣品溶液的對應(yīng)濃度，或代入回歸方程，求出樣品溶液的濃度。標(biāo)準曲線法測定含量必備知識標(biāo)準曲線

在做精密測量時，用對照品溶液的濃度進行線性回歸，求出回歸直線方程（相關(guān)系數(shù)r≥0.999），繪出回歸直線代替標(biāo)準曲線，以盡量消除偶然誤差。

亦可利用計算器將一系列對照品溶液的濃度與相應(yīng)的吸光度進行一元線性回歸，求出回歸方程（相關(guān)系數(shù)≥0.9990），將供試品溶液的吸光度代入回歸方程，算出供試品溶液的濃度。標(biāo)準曲線法測定含量必備知識

回歸方程：A=a+bC

式中，A為被測溶液吸光度；C為被測溶液濃（g/ml）；a為截距；b為斜率。標(biāo)準曲線法測定含量必備知識

標(biāo)準曲線法多用于可見分光光度法，由于顯色時影響顏色深淺的因素較多，有的儀器單色光純度較差，故測定時應(yīng)用對照品同時操作。

本法適用于批量供試品的分析，當(dāng)儀器和測定條件固定時，標(biāo)準曲線可多次使用。拓展知識中藥制劑的含量測定技術(shù)——對照品法測定含量9目錄

基礎(chǔ)知識1必備知識2拓展知識310基礎(chǔ)知識

紫外-可見分光光度法的定量分析依據(jù)是朗伯-比爾定律。其物理意義是：當(dāng)一束平行的單色光通過均勻的非散射體系的低濃度溶液時，在單色光強度、溶液溫度等條件不改變的情況下，吸光度與液層的厚度(光程長度)和吸光物質(zhì)濃度的乘積成正比。其數(shù)學(xué)表達式為：A=KCL式中，A為吸光度；K為吸收系數(shù)；C為溶液濃度；L為液層厚度。吸收系數(shù)是指吸光物質(zhì)在單位濃度及單位厚度時的吸光度。吸收系數(shù)K：百分吸收系數(shù)、摩爾吸收系數(shù)?！吨袊幍洹凡捎冒俜治障禂?shù)。定量方法有吸收系數(shù)法、對照品法、標(biāo)準曲線法。按藥品標(biāo)準的規(guī)定，在相同條件下，在規(guī)定波長處分別測定供試品溶液和對照品溶液的吸光度，按下式計算供試品溶液中待測組分的濃度。CX＝×CR

式中：AR為對照品溶液的吸光度；AX為供試品溶液的吸光度；CR為對照品溶液的濃度；CX為供試品溶液的濃度。對照品法測定含量必備知識

試驗中所用的量瓶和移液管均應(yīng)經(jīng)檢定、校正、洗凈后使用

使用的吸收池必須潔凈

取吸收池時，手指只能拿毛玻璃面的兩側(cè)

稱量應(yīng)按《中國藥典》的規(guī)定進行除各藥品標(biāo)準已有注明者外，供試品溶液及對照品溶液的濃度的吸光度應(yīng)在0.3～0.7之間及所用儀器吸光度的線性范圍內(nèi)。

拓展知識注意事項中藥制劑的含量測定技術(shù)——吸收系數(shù)法測定含量14目錄

基礎(chǔ)知識1必備知識2拓展知識315基礎(chǔ)知識

紫外-可見分光光度法的定量分析依據(jù)是朗伯-比爾定律。其物理意義是：當(dāng)一束平行的單色光通過均勻的非散射體系的低濃度溶液時，在單色光強度、溶液溫度等條件不改變的情況下，吸光度與液層的厚度(光程長度)和吸光物質(zhì)濃度的乘積成正比。其數(shù)學(xué)表達式為：A=KCL式中，A為吸光度；K為吸收系數(shù)；C為溶液濃度；L為液層厚度。吸收系數(shù)是指吸光物質(zhì)在單位濃度及單位厚度時的吸光度。吸收系數(shù)K：百分吸收系數(shù)、摩爾吸收系數(shù)?！吨袊幍洹凡捎冒俜治障禂?shù)。定量方法有吸收系數(shù)法、對照品法、標(biāo)準曲線法。按藥品標(biāo)準規(guī)定的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長處測定其吸收度（A），根據(jù)A=KCL與藥品標(biāo)準規(guī)定的被測物質(zhì)的吸收系數(shù)E，計算供試品溶液的濃度C供（g/100ml）。當(dāng)L=1cm時，C供=A供E，再根據(jù)供試品溶液的稀釋倍數(shù)（D供）、供試品溶液容積（V樣）和供試品取樣量（W供），計算出被測物質(zhì)的含量。含量（W/W%）=(C供×D供×V樣)/(100×W供)

本法測定時無需對照品，方法簡便。吸收系數(shù)法測定含量必備知識含量計算公式有兩種：

1)含量（mg/丸）=[C供（mg/ml)×D供×V樣(ml)×平均丸重（g/丸））]/W樣（g）2)含量（標(biāo)示量%）=[C供（mg/ml)×D供×V樣(ml)×平均丸重（g/丸）]/[W樣（g)×標(biāo)示含量（mg/丸）]×100%計算過程中應(yīng)先將相關(guān)數(shù)據(jù)的單位寫出，計算時再將相同單位約去，若等號兩側(cè)單位相同，則說明公式建立正確。吸收系數(shù)法測定含量必備知識波長準確度的校正

拓展知識紫外-可見分光光度計的校正吸光度準確度的標(biāo)準范圍波長（nm）吸收強度百分吸收系數(shù)相對偏差范圍235257313350最小最大最小最大124.5144.048.62106.6123.0～126.0142.5～146.047.0～50.3105.5～108.5吸光度的校正

拓展知識紫外-可見分光光度計的校正鉻酸鉀溶液的吸光度λ/nm吸光度Aλ/nm吸光度Aλ/nm吸光度Aλ/nm吸光度A200.45593100.15183800.92814600.01732300.16753100.04583900.68414700.00832400.29333200.06204000.38724800.00352500.49623300.14574100.19724900.00092600.63453400.31434200.12615000.00002700.74473500.55284300.0841

2800.72353600.82974400.535

2900.42953700.99144500.0325

雜散光的檢查

拓展知識紫外-可見分光光度計的校正雜散光的檢查試劑名稱試劑濃（g/100ml）測定用波長（nm）透光率（%）碘化鈉亞硝酸鈉1.005.00220340<0.8<0.8吸收池的校正分別在兩個潔凈的統(tǒng)一規(guī)格、同一材料的吸收池中裝入同一溶劑（一般可用水），將比色皿按相同方向放入吸收池架上，用同一波長的光（電磁輻）測定透光率，如透光率之差在0.3%以下者可配對使用狹縫寬度的選擇

狹縫寬度應(yīng)小于供試品吸收峰半高寬的十分之一，否則測得的吸光度值會偏低，狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減小狹縫寬度時供試品的吸光度不再增大為準拓展知識紫外-可見分光光度計的校正最大吸收波長的選擇除另有規(guī)定外，吸收峰波長應(yīng)在該品種項下規(guī)定的波長士2nm以內(nèi)，并以吸光度最大的波長作為測定波長溶劑的要求

含有雜原子的有機溶劑，通常均具有很強的末端吸收。因此，當(dāng)作溶劑使用時，它們的使用范圍均不能小于截止使用波長拓展知識紫外-可見分光光度計的校正作者：八音魔琴紫外-可見分光光度法概述●中藥制劑檢查●中藥制劑鑒別●中藥制劑含量測定貳叁壹目錄基礎(chǔ)知識必備知識拓展知識精誠制藥

本草濟民基礎(chǔ)知識定義：紫外-可見分光光度法（UltravioletandVisibleSpectrophotometry）系指通過測定被測物質(zhì)在紫外-可見光區(qū)(200～760nm)對光的吸光度或發(fā)光強度，進行物質(zhì)定性定量分析的方法。特點：設(shè)備簡單、操作簡便、靈敏度和準確度較高等。適用范圍：中藥制劑定性鑒別、雜質(zhì)檢查及含量測定。必備知識一、儀器工作原理紫外-可見分光光度儀的構(gòu)造必備知識一、儀器工作原理紫外-可見分光光度儀的構(gòu)造光源（輻射源）可見光光源：常用的是鎢絲燈和鹵鎢燈紫外光源：常用氫、氘等放電光源必備知識一、儀器工作原理紫外-可見分光光度儀的構(gòu)造單色器棱鏡單色器：有玻璃和石英兩種材料。是依據(jù)光的折射率不同，而將其分成不同波長的單色光。光柵單色器：是利用光的衍射和干涉作用制成的?？捎糜谧贤?、可見和近紅外光譜區(qū)域，具有良好的、幾乎均勻一致的色散率，且具有適用波長范圍寬、分辨本領(lǐng)高、成本低、便于保存和易于制作等優(yōu)點，是目前常用的色散元件。缺點是各級光譜會重疊而產(chǎn)生干擾。必備知識一、儀器工作原理紫外-可見分光光度儀的構(gòu)造吸收池

又叫比色皿。用于盛放分析試液并提供一定吸光厚度的器皿。一臺分光光度計配有幾組厚度不同的吸收池，吸收池的大小規(guī)格從幾毫米到幾厘米不等，最常用的是1厘米的吸收池。石英池：適用于可見光區(qū)及紫外光區(qū)。玻璃吸收池：只能用于可見光區(qū)。必備知識一、儀器工作原理紫外-可見分光光度儀的構(gòu)造檢測器是通過光電轉(zhuǎn)換元件檢測透過光的光通量大小，并將光信號轉(zhuǎn)變成電信號的裝置。

檢測器應(yīng)在測量的光譜范圍內(nèi)具有高的靈敏度；線性關(guān)系好、線性范圍寬；對不同波長的輻射響應(yīng)性能相同且可靠；有好的穩(wěn)定性和低的噪音水平等特點。光電池：常用的光電池有硒電池和硅光電池。光電管：它以一彎成半圓柱且內(nèi)表面涂上一層光敏材料的鎳片作為陰極，而置于圓柱形中心的一金屬絲作為陽極，密封于高真空的玻璃或石英中構(gòu)成的，當(dāng)光照到陰極的光敏材料時，陰極發(fā)射出電子，被陽極收集而產(chǎn)生光電流。光電倍增管：光電倍增管是一種加上多級倍增電極的光電管，其外殼由玻璃或石英制成，陰極表面涂上光敏物質(zhì)，在陰極、陽極間裝有一系列次級電子發(fā)射極，D1、D2……等。必備知識一、儀器工作原理紫外-可見分光光度儀的構(gòu)造信號指示系統(tǒng)是把檢測到的信號以適當(dāng)?shù)姆绞斤@示或記錄下來。常用的信號指示裝置有直讀檢流計、電位調(diào)節(jié)指零裝置以及數(shù)字顯示或自動記錄裝置等。常用的顯示方式有數(shù)字顯示、熒光屏顯示、曲線掃描及結(jié)果打印等多種。高性能的儀器還帶有數(shù)據(jù)站，即可對分光光度計進行操作控制，又可進行數(shù)據(jù)處理必備知識二、儀器操作通法操作通法儀器接通電源，預(yù)熱根據(jù)測定波長，選擇相應(yīng)光源，繼續(xù)預(yù)熱（各型號儀器在操作順序上略有區(qū)別）靈敏度鈕置1檔將盛有供試品溶液及空白（參比）溶液的吸收池放入吸收池架，使空白（參比）溶液置光路位置，蓋好供試品室蓋量程選擇鈕置T位置必備知識二、儀器操作通法操作通法斷開光路調(diào)節(jié)儀器零點，使顯示為0。打開光路調(diào)節(jié)儀器透光率，使顯示為100%量程選擇鈕置A位置將供試品置于光路中，讀取供試品的吸光度值儀器使用完畢，取出吸收池，關(guān)機，登記不同型號的紫外分光光度計其操作方法和要求亦有所不同，使用前應(yīng)詳細閱讀使用說明書必備知識二、儀器操作通法注意事項量瓶、移液管及吸收池均應(yīng)經(jīng)洗凈、校正后使用在使用紫外-可見分光光度計前，應(yīng)對吸收池、最大吸收波長、雜散光、狹縫寬度、吸光度的準確度等進行校正和檢定制劑含量的測定紫外-可見分光光度計工作原理

根據(jù)光路數(shù)目和波長種類的不同，分為單光束分光亮度計和雙光束分光光度計及單波長分光光度計和雙波長分光光度計。單光束分光光度計的工作原理由光源發(fā)出的光，經(jīng)單色器獲得一定波長的單色光（平行光），單色光作為入射光輪流照射參比溶液和供試品溶液，分別測得參比溶液和供試品溶液的吸亮度并計算含量的方法拓展知識紫外-可見分光光度計工作原理單波長雙光束分光亮度計的工作原理從光源中發(fā)出的光經(jīng)單色器分光后經(jīng)反射鏡（M1）（或切光器）分解為強度相等的兩束光，一束通過參比溶液，另一束通過供試品溶液，檢測器在不同的瞬間接受和處理參比信號和供試品信號，并自動比較兩束光的強度，其信號差經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換系統(tǒng)處理后由顯示器顯示出透光率、吸亮度、濃度。也可對不同波長的入射光的測定結(jié)果進行掃描，繪制吸收光譜，進行定性、定量分析。拓展知識紫外-可見分光光度計工作原理雙波長分光光度計的工作原理該分光光度計是具有兩個并列單色器的儀器。由同一光源發(fā)出的光被分成兩束，分別經(jīng)過兩個單色器，得到兩束不同波長（λ1和λ2）的單色光；利用切光器使兩束光以一定的頻率交替照射同一吸收池后，經(jīng)過光電倍增管和電子控制系統(tǒng)，最后由顯示器顯示出兩個波長處的吸亮度差值△A(△A=Aλ1-Aλ2）拓展知識吸收系數(shù)法測定含量貳叁壹目錄基礎(chǔ)知識必備知識拓展知識精誠制藥

本草濟民基礎(chǔ)知識

紫外-可見分光光度法的定量分析依據(jù)是朗伯-比爾定律。其物理意義是：當(dāng)一束平行的單色光通過均勻的非散射體系的低濃度溶液時，在單色光強度、溶液溫度等條件不改變的情況下，吸光度與液層的厚度(光程長度)和吸光物質(zhì)濃度的乘積成正比。其數(shù)學(xué)表達式為：A=KCL

式中，A為吸光度；K為吸收系數(shù)；C為溶液濃度；L為液層厚度。

吸收系數(shù)是指吸光物質(zhì)在單位濃度及單位厚度時的吸光度。

吸收系數(shù)K：百分吸收系數(shù)、摩爾吸收系數(shù)。《中國藥典》采用百分吸收系數(shù)。

定量方法有吸收系數(shù)法、對照品法、標(biāo)準曲線法。必備知識吸收系數(shù)法測定含量按藥品標(biāo)準規(guī)定的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長處測定其吸收度（A），根據(jù)A=KCL與藥品標(biāo)準規(guī)定的被測物質(zhì)的吸收系數(shù)E，計算供試品溶液的濃度C供（g/100ml）當(dāng)L=1cm時，C供=A供E，在根據(jù)供試品溶液的稀釋倍數(shù)（D供）、供試品溶液容積（V樣）和供試品取樣量（W供），計算出被測物質(zhì)的含量。

含量（W/W%）=（C供×D供×V供）/（100×W供）本法測定時無需對照品，方法簡便。必備知識吸收系數(shù)法測定含量含量計算公式有兩種：1)含量（mg/丸）=[C供（mg/ml)×D供×V樣(ml)×平均丸重（g/丸））]/W樣（g）2)含量（標(biāo)示量%）=[C供（mg/ml)×D供×V樣(ml)×平均丸重（g/丸）]/[W樣（g)×標(biāo)示含量（mg/丸）]×100%計算過程中應(yīng)先將相關(guān)數(shù)據(jù)的單位寫出，計算時再將相同單位約去，若等號兩側(cè)單位相同，則說明公式建立正確。紫外-可見分光光度計的校正拓展知識波長準確度的校正吸光度準確度的標(biāo)準范圍波長（nm）吸收強度百分吸收系數(shù)相對偏差范圍235257313350最小最大最小最大124.5144.048.62106.6123.0～126.0142.5～146.047.0～50.3105.5～108.5紫外-可見分光光度計的校正拓展知識吸光度的校正鉻酸鉀溶液的吸光度λ/nm吸光度Aλ/nm吸光度Aλ/nm吸光度Aλ/nm吸光度A200.45593100.15183800.92814600.01732300.16753100.04583900.68414700.00832400.29333200.06204000.38724800.00352500.49623300.14574100.19724900.00092600.63453400.31434200.12615000.00002700.74473500.55284300.0841

2800.72353600.82974400.535

2900.42953700.99144500.0325

紫外-可見分光光度計的校正拓展知識雜散光的檢查雜散光的檢查試劑名稱試劑濃（g/100ml）測定用波長（nm）透光率（%）碘化鈉亞硝酸鈉1.005.00220340<0.8<0.8紫外-可見分光光度計的校正拓展知識吸收池的校正分別在兩個潔凈的統(tǒng)一規(guī)格、同一材料的吸收池中裝入同一溶劑（一般可用水），將比色皿按相同方向放入吸收池架上，用同一波長的光（電磁輻）測定透光率，如透光率之差在0.3%以下者可配對使用狹縫寬度的選擇狹縫寬度應(yīng)小于供試品吸收峰半高寬的十分之一，否則測得的吸光度值會偏低，狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減小狹縫寬度時供試品的吸光度不再增大為準紫外-可見分光光度計的校正拓展知識最大吸收波長的選擇除另有規(guī)定外，吸收峰波長應(yīng)在該品種項下規(guī)定的波長士2nm以內(nèi)，并以吸光度最大的波長作為測定波長溶劑的要求含有雜原子的有機溶劑，通常均具有很強的末端吸收。因此，當(dāng)作溶劑使用時，它們的使用范圍均不能小于截止使用波長對照品法測定含量貳叁壹目錄基礎(chǔ)知識必備知識拓展知識精誠制藥

本草濟民基礎(chǔ)知識

紫外-可見分光光度法的定量分析依據(jù)是朗伯-比爾定律。其物理意義是：當(dāng)一束平行的單色光通過均勻的非散射體系的低濃度溶液時，在單色光強度、溶液溫度等條件不改變的情況下，吸光度與液層的厚度(光程長度)和吸光物質(zhì)濃度的乘積成正比。其數(shù)學(xué)表達式為：A=KCL

式中，A為吸光度；K為吸收系數(shù)；C為溶液濃度；L為液層厚度。

吸收系數(shù)是指吸光物質(zhì)在單位濃度及單位厚度時的吸光度。

吸收系數(shù)K：百分吸收系數(shù)、摩爾吸收系數(shù)?！吨袊幍洹凡捎冒俜治障禂?shù)。

定量方法有吸收系數(shù)法、對照品法、標(biāo)準曲線法。必備知識對照品法測定含量按藥品標(biāo)準的規(guī)定，在相同條件下，在規(guī)定波長處分別測定供試品溶液和對照品溶液的吸光度，按下式計算供試品溶液中待測組分的濃度。式中：AR為對照品溶液的吸光度；AX為供試品溶液的吸光度；CR為對照品溶液的濃度；CX為供試品溶液的濃度。注意事項拓展知識

試驗中所用的量瓶和移液管均應(yīng)經(jīng)檢定、校正、洗凈后使用使用的吸收池必須潔凈取吸收池時，手指只能拿毛玻璃面的兩側(cè)稱量應(yīng)按《中國藥典》的規(guī)定進行除各藥品標(biāo)準已有注明者外，供試品溶液及對照品溶液的濃度的吸光度應(yīng)在

0.3～0.7之間及所用儀器吸光度的線性范圍內(nèi)。標(biāo)準曲線法測定含量貳叁壹