檢測方法驗證和確認程序范文

檢測辦法驗證和確認程序目的PURPOSE

本規(guī)程規(guī)定了XXXXXXX藥業(yè)有限公司檢測辦法驗證和確認程序、格式和規(guī)定。范疇SCOPE本規(guī)程合用于XXXXXXXX藥業(yè)有限公司QC實驗室的檢測辦法確實認。本規(guī)程合用于美國藥典/國家處方集、歐洲藥典或其它藥典中記載的檢測辦法，和來自于公司內(nèi)部或外部的已經(jīng)驗證的檢測辦法。本規(guī)程重視在鑒別、純度和含量的檢測辦法。本規(guī)程將作為2.3提及的檢測辦法驗證的常規(guī)指導，也合用于最常見的檢測辦法的驗證，如：鑒別測試有關(guān)物質(zhì)和降解產(chǎn)物的含量的定量測試?？刂朴嘘P(guān)物質(zhì)和降解產(chǎn)物的程度測試。原料藥、起始物料、中間體及其它物料的含量測定。微生物和生物檢測辦法不在本規(guī)程范疇內(nèi)。參考REFERENCEICHQ2(R1)分析辦法驗證的文本及辦法學現(xiàn)行美國藥典<1225>藥典辦法的驗證現(xiàn)行美國藥典<1226>藥典辦法確實認ICHQ7原料藥的良好質(zhì)量管理規(guī)范（11月）FDA行業(yè)指南“分析辦法和辦法驗證”（8月）職責RESPONSIBILITIESQC負責人或指定人員負責參加本規(guī)程的起草、審視、修訂和更新。QA負責人或指定人員負責本規(guī)程的審核和確保其被對的地、精確地執(zhí)行。QC負責市售產(chǎn)品的檢測辦法驗證，確認這些辦法在實際條件下合用于本實驗室的測試。QC負責人或指定人員負責審核確認方案和確認報告QC負責對的地統(tǒng)計實驗數(shù)據(jù)。QC負責歸納數(shù)據(jù)、撰寫報告并遞交給QC負責人或指定人員審視。QC、QA負責人或其指定人員負責審核并審計全部實驗室有關(guān)文獻及規(guī)程以確保其精確和有效。質(zhì)量部負責同意本規(guī)程及驗證、確認方案和驗證、確認報告。定義DEFINITION檢測辦法使用者

使用檢測辦法的部門、實驗室或人員。系統(tǒng)合用性

它是用來驗證系統(tǒng)能滿足預期分析的測試。當合用時，系統(tǒng)合用性應在辦法用于檢測或分析樣品之前執(zhí)行。指定的數(shù)據(jù)，例如響應值和保存時間的相對原則偏差（RSD）、拖尾因子、分離度和理論塔板等，將從重復進樣得到。檢測辦法

指進行檢測的方式，應具體描述進行每個檢測實驗所必須的環(huán)節(jié)。它能夠涉及：試劑、對照品及樣品溶液的配制，儀器的參數(shù)、原則曲線的繪制、計算公式的運用、可接受原則等。檢測辦法驗證

為了證明所使用的檢測辦法（新的或改善過的）與其預期目的相適應而進行的一系列實驗。對照品和樣品溶液穩(wěn)定性

用來評價對照品和供試品的穩(wěn)定性而進行的檢測。原料藥

任何用于藥品生產(chǎn)的物質(zhì)或混合物，并在藥品生產(chǎn)的過程中成為藥品的活性成分。這類物質(zhì)提供藥品活性或其它的直接效應應用于診療、治療、緩和、解決或防止疾病、或影響身體的機構(gòu)造或功效。鑒別測試

鑒別實驗旨在確認樣品中的一種被測物的特性。普通將樣品的性質(zhì)（如光譜、色譜行為、化學反映等）與參比對照品的性質(zhì)進行比對。雜質(zhì)檢查

指樣品中雜貨的定量檢測或程度檢測，兩種檢測均是為了精確反映樣品的純度。定量實驗所需驗證的項目與程度實驗相比是不同的。含量測定

指測定樣品中被分析物的含量。專屬性

指在可能存在某些干擾組分（如雜質(zhì)、降解物、基質(zhì)等）時，對被分析物精確可靠測定的能力。精密度

指在規(guī)定條件下對均質(zhì)樣品多次取樣進行一系列檢測，檢測成果的靠近程度（離散程度）。重復性

指在同樣的操作條件下，較短時間間隔內(nèi)的精密度。中間精密度

指實驗室內(nèi)部條件變化，如：不同日期、不同分析者、不同儀器等狀況下的精密度。重現(xiàn)性

指不同實驗室之間的精密度（合作研究，普通見于辦法學的原則化）。檢測限（LOD）

指樣品中的被分析物能夠被檢測到的最低量，但不必要精擬定量。定量限（LOQ）

指在適宜的精確性和精密度下，能夠定量測定的樣品中被分析物的最低量。線性

指在給定的范疇內(nèi)檢測成果與樣品中被分析物的濃度（量）成比例關(guān)系的能力。精確度

指真實值或承認的參考值與測量值之間的相近程度。精確度有時也稱真實度。范疇

指樣品中被分析物的濃度（量）上限和濃度（量）下限之間的一種區(qū)間，并已證明在此區(qū)間內(nèi)，該檢測辦法含有適宜的精密度、精確性和線性。耐用性

指在實驗參數(shù)被故意地發(fā)生細小變化時，檢測不受影響的能力，用以闡明所驗證的辦法在正常使用時的可靠性。加標

向原則品、樣品或空白劑中加入已知量的已知物質(zhì)，用于擬定檢測辦法的性能或進行儀器的校驗。響應因子

分析物產(chǎn)生的信號與產(chǎn)生該信號的分析物的量的比值?？山邮茉瓌t

測試成果可接受的數(shù)值程度、范疇或其它適宜的度量原則。有關(guān)系數(shù)（R）

研究變量之間HYPERLINK\o"線性有關(guān)"線性有關(guān)程度的量。信噪比（S/N）糾正與防止方法（CAPA）程序RROCEDURE檢測辦法使用者應當通過培訓，含有對應的經(jīng)驗和知識，以理解檢測辦法并能夠執(zhí)行它。確認應當由使用者執(zhí)行，其成果將為檢測辦法能像預期的那樣地執(zhí)行增加信心。檢測辦法確認和驗證的目的是闡明該辦法合用于其擬定用途，它涉及實驗過程中計劃的、系統(tǒng)的和統(tǒng)計的數(shù)據(jù)，以證明辦法能滿足其擬定分析用途的規(guī)定。于藥典檢測辦法，如果確認不成功，并且經(jīng)藥典人員的協(xié)助也未能解決問題，則可斷定此辦法不適合在該實驗室用于該樣品。然后，可能有必要按照藥典或有關(guān)法規(guī)開發(fā)和驗證一種替代的辦法。確認的規(guī)定應當基于辦法的復雜性和應用此法的物質(zhì)的復雜性兩方面來進行的評定。只有那些適合特定辦法確實認特性才需要做評定。確認程序的程度與層次取決于使用者的培訓經(jīng)歷及經(jīng)驗水平、辦法種類和與其有關(guān)的設備/儀器、具體的辦法環(huán)節(jié)、和/或被測的物質(zhì)。除非有跡象表明基本藥典辦法不適合檢測該樣品，日常執(zhí)行的基本藥典檢測辦法無需確認?；舅幍錂z測辦法的例子涉及但不限于，干燥失重、熾灼殘渣、多個濕化學辦法例如酸度、簡樸儀器辦法例如pH值測定等。檢測辦法驗證的進行程度應能反映檢測的目的和生產(chǎn)工藝所處的階段。非藥典檢測辦法的建立和現(xiàn)行辦法的變化必須進行驗證。SOP-QC-025/A01顯示了檢測辦法驗證的流程。在檢測臨床實驗批次的樣品時，即使檢測辦法可能尚未驗證，但檢測辦法須含有科學性。并應顯示檢測辦法的合用性。應提供驗證成果的表格概要（例如：專屬性、線性、范疇、精確度、精密度、LOD和LOQ的成果或數(shù)值）。此時不需要提供完整的驗證報告，可在放行檢測同時進行分析辦法驗證。檢測辦法確認和驗證方案在確認或驗證工作開展前需有已經(jīng)同意確實認或驗證方案。方案內(nèi)容應涉及但不限于下列項目：目的PURPOSE

應涉及：背景介紹和辦法描述。范疇SCOPE參考REFERENE職責RESPONSIBILITIES定義DEFINITION辦法學METHODOLOGY

程序部分應列出確認特性。偏差DEVIATION附件ATTACHMENTS修訂歷史DOCUMENTREVISEHISTORY確認和驗證中全部的原始統(tǒng)計和得到的成果必須統(tǒng)計在執(zhí)行方案或已編號的檢測統(tǒng)計本上，以方便與其它文獻的互相查詢。確認和驗證過程中若有偏差，需按偏差解決有關(guān)規(guī)程和調(diào)查辦法有關(guān)規(guī)程執(zhí)行。檢測辦法根據(jù)變化需決定與否要進行再次驗證，再次驗證也需根據(jù)本SOP執(zhí)行，涉及方案和報告的同意。下列變化狀況需進行再次驗證：有關(guān)指南變化，例如：ICH或藥典原料藥的合成工藝變化檢測辦法和/或設備變化檢測辦法確認和驗證報告TestMethodValidationandverificationReport確認和驗證方案完畢后必須準備對應的辦法確認和驗證報告，并由質(zhì)量部同意生效。推薦的辦法驗證報告中能夠涉及下列內(nèi)容：總結(jié)SUMMARYOFRESULTS目的PURPOSE范疇SCOPE物料和設備MATERIALANDEQUIPMENT辦法METHOD成果和討論RESULTSANDDISCUSSIONS

成果部分應涉及驗證項目、可接受原則和成果等。偏差DEVIATION

任何偏差均應進行調(diào)查和報告。結(jié)論CONCLUSTION建議RECOMMENDATIONS參考REFERENCE附件ATTACHMENTS

能夠涉及全部參加人員的資格或培訓統(tǒng)計、儀器校驗證書、試劑檢查報告單、實驗統(tǒng)計，原始數(shù)據(jù)、圖譜和成果的一覽表等。修訂歷史DOCUMENTREVISEHISTORY檢查辦法確認需確認的特性

普通所規(guī)定確實認特性涉及但不限于下表中提及的。表1：進行檢測辦法確認規(guī)定確認的特性特性

Characteristics分析辦法的類型

Typeofanalyticalprocedures鑒別

Identification雜質(zhì)檢測

Testingforimpurities含量分析

Assay定量檢測

Quantitativetest程度檢測

Limittest含量/效價

Content/Potency精確度

Accuracy--②--②專屬性

Specificity①+-②-②-②重復性

Repeatability--②-+中間精密度

Intermediateprecision-+-+檢測限

LOD+-②+-定量限

LOQ--②--系統(tǒng)合用性

Systemsuitability--②-②-②注：-表明普通不需評定的特性+表明普通需評定的特性缺少該項目的分析辦法，應由其它分析辦法來補充表明有些狀況下需要檢測辦法驗證需驗證的特性驗證的程度取決于對應的驗證方案中規(guī)定的檢測的性質(zhì)及其用途。檢測辦法驗證常見的驗證特性涉及但不限于表2內(nèi)容。表2：檢測辦法驗證所需的驗證特性特性Characteristics檢測辦法類型

Typeoftestmethods鑒別Identification有關(guān)物質(zhì)和降解物測試Testingforrelatedcompoundsanddegradants含量（僅限測試）·Assay(measurementonly)定量測試Quantitativetest程度測試Limittests專屬性①

Specificity++++線性

Linearity-+-+范疇Range-+-+精確度Accuracy-+-+精密度Precision重復性Repeatability-+-+中間精密度Intermediateprecision-+②-+②重現(xiàn)性Reproducibility--③--③檢測限

LOD--③+-定量限

LOQ-+--耐用性

Robustness-③+④-+④系統(tǒng)合用性（如有）

SystemsSuitability(ifany)++++注：-表達該特性普通不需評定+表達該特性普通需評定①當一種檢測辦法不能滿足專屬性的規(guī)定時，可由其它輔助檢測辦法作補充。②如果已經(jīng)評價了重現(xiàn)性，就不需要再評價中間精密度。③基于檢測的性質(zhì)可能需要。④根據(jù)所研究辦法的類型，在開發(fā)階段考慮評定耐用性。下述6.8~6.17對具體驗證特性進行逐個描述，以對每一種檢測辦法的多個驗證特性提供指導和/或建議。專屬性

用于證明專屬性的方式取決與檢測辦法的預期目的。普通一種檢測辦法不太可能對某一特定的被分析物含有專屬性（完全分辨）。在這種狀況下，推薦使用兩種或多個檢測辦法的組合以達成所需的分辨程度。鑒別的專屬性實驗適宜的鑒別測試應能區(qū)別出可能存在的構(gòu)造相似的化合物。通過對從含有被分析物的樣品中得到的正成果（能夠通過與已知參比物比較），和對不含被分析物的樣品中得到的負成果來證明辦法的分辨能力。對與分析物構(gòu)造相似或相近的物質(zhì)進行鑒別實驗，證明沒有得到正響應。含量和雜質(zhì)檢查的專屬性實驗可獲得的有關(guān)物質(zhì)和降解物對含量測定來說，專屬性應能分辨被分析物與有關(guān)物質(zhì)和降解產(chǎn)物。實際操作中能夠在純物質(zhì)中加入適宜量的有關(guān)物質(zhì)和降解物，與未加有關(guān)物質(zhì)和降解物的樣品測定成果相比較，以證明其含量測定成果不受這些物質(zhì)的影響。對有關(guān)物質(zhì)測試，能夠向原料藥中加入含有適宜量的有關(guān)物質(zhì)，通過證明這些有關(guān)物質(zhì)之間能互相分離，并也能與樣品基質(zhì)中其它組分分離，以此來證明測試辦法的分辨能力。無法獲得的有關(guān)物質(zhì)和降解物如果有關(guān)物質(zhì)或降解物的對照品不能得到，專屬性能夠通過將含一定量的有關(guān)物質(zhì)或降解產(chǎn)物的樣品測定成果與另一種成熟的辦法測定成果比較，例如與藥典辦法或已經(jīng)驗證的其它辦法（獨立的辦法）進行比較。必要時，應涉及對強力破壞實驗條件下（即光、熱、濕度、酸/堿破壞及氧化條件下）獲得的樣品的測定。對于含量，需要比較兩種辦法的成果；對于雜質(zhì)檢查，需要比較雜質(zhì)的概況。峰的純度實驗對顯示被測物色譜峰是單個還是多個成分是很有用的（如二極管陣列）。對色譜辦法，應用典型的色譜圖來證明專屬性，并在圖上恰本地標出每一種成分。其它分離技術(shù)也應有類似的考慮。在色譜辦法中，應在一定程度上考察臨界分離。對臨界分離，可用兩個洗脫程度最靠近的化合物的分離度來證明其專屬性。線性Linearity

測試線性的目的是為了證明整個分析系統(tǒng)（涉及檢測器和數(shù)據(jù)采集）有線性的響應和/或在對應的分析物濃度范疇內(nèi)直接成正比。線性關(guān)系是在檢測辦法的范疇內(nèi)（見第6.10節(jié)）對辦法進行評價?？捎盟ㄗh的檢測辦法，直接對原料藥（用原則儲藏溶液稀釋）進行測定，以證明其線性。

對于低濃度的溶液，可通過稀釋儲藏液配制。線性應通過目測一組信號與被分析物的濃度或含量做圖的關(guān)系來評價。如果有線性關(guān)系，可用適宜的統(tǒng)計辦法對測試成果進行評定，如用最小二乘法計算回歸線。由線性回歸估算所測得的數(shù)據(jù)本身有助于數(shù)學評價線性的程度。某些檢測辦法無論通過何種轉(zhuǎn)換都不顯示線性。在這種狀況下，分析的響應值應用樣品中被分析物的濃度（含量）的適宜函數(shù)來表達。應提交回歸線的有關(guān)系數(shù)、y軸上的截距、回歸線的斜率。還應提交數(shù)據(jù)圖表。也可涉及其它的統(tǒng)計參數(shù)。另外，分析真值與回歸線的偏差也有助于對線性作評價。為建立線性，建議最少用5個濃度。若用其它辦法則應證明其合理性。范疇特定的范疇普通是從線性研究中得到的，并由檢測辦法盼望的應用目的決定。范疇是通過檢測辦法在指定的范疇內(nèi)或在范疇的極限時都達成可接受程度的精確性、精密度來建立的。應考慮以下的最小規(guī)定范疇：對原料藥的含量測定：普通最少應涵蓋測試濃度的80%~120%內(nèi)；對于有關(guān)物質(zhì)測定：應最少涵蓋有關(guān)物質(zhì)的報告限至原則的120%。對已知有異常功效的、有毒的或故意外藥理作用的有關(guān)物質(zhì)，其檢測限和定量限應與該有關(guān)物質(zhì)必須被控制的水平相對應。

在研制階段進行雜質(zhì)檢查辦法驗證時，有必要根據(jù)建議（可能）的程度來考慮范疇。如果用一種實驗同時進行含量測定和純度檢查，且僅使用100%的原則，線性范疇應最少涵蓋從雜質(zhì)的報告水平至含量原則的120%。精確度

應在檢測辦法規(guī)定的范疇內(nèi)建立精確度。原料藥含量DrugSubstanceAssay

有多個辦法可用于測定精確度：用該檢測辦法去測定已知純度的被分析物（例如：原則物質(zhì)）；將建議采用的檢測辦法的成果與另一種成熟的、精確度已經(jīng)擬定和/或定義了的檢測辦法（獨立的辦法）的成果相比較；精確度能夠在精密度、線性和專屬性建立后，推論而得。有關(guān)物質(zhì)（定量）精確度應通過分析加入了已知量有關(guān)物質(zhì)的樣品的方式來評價。在不能獲得某種有關(guān)物質(zhì)和（或）降解產(chǎn)物的樣品狀況下，能夠考慮與另一種獨立的辦法測得的成果相比較。應明確單個或總的有關(guān)物質(zhì)是如何測定，例如：在任何狀況下，可用與重要被分析物所占的重量比例或面積比例。建議的數(shù)據(jù)精確度的評價應最少涵蓋所規(guī)定的線性范疇的3種濃度水平的、不少于9次的測定（例如：按完整檢測環(huán)節(jié)對3種濃度分別測定3次）。加入已知量的原料藥或有關(guān)物質(zhì)：回收率應報告百分回收率（與已知加入量的成果進行比較）。用檢測辦法分析已知純度的樣品（原則物質(zhì)）：回收率應報告測得的平均值與可接受的真實值之間的差別及其置信區(qū)間。將檢測辦法與另一種已良好定性的辦法（參考辦法）進行比較：回收率應報告測得的平均值與用參考辦法測得的成果之間的差別及其置信區(qū)間。精密度Precision

精密度涉及重復性、中間精密度、重現(xiàn)性。重復性Repeatability最少測試6份100%濃度的樣品溶液或9份覆蓋辦法規(guī)定范疇的樣品溶液。推薦使用真實樣品，并對每個重復分析進行完全的測試。可用有代表性的樣品進行含量的重復性測試。如果是有關(guān)物質(zhì)測試，僅在無法得到含某種有關(guān)物質(zhì)的樣品時可向樣品中加入有關(guān)物質(zhì)。或者，可使用強制降解樣品或未加樣的原料藥樣品。中間精密度應擬定隨機事件對檢測辦法精密度的影響。影響因素普通指不同的日期、不同的分析員、不同的設備等，這些因素不需要進行單獨的評定。中間精密度可在影響因素變化時重復測試得到。不需要單獨考慮這些影響。（例如：可通過2名分析員在不同的日期或用不同的設備重復重復性或線性或精確度實驗，以得到精密度）。重現(xiàn)性

重現(xiàn)性通過在不同實驗室間進行測試的平均值進行評定。建議的數(shù)據(jù)

在研究每一種精密度時，都應報告原則偏差、相對原則偏差（變異系數(shù)）和置信區(qū)間。檢測限和定量限檢測限的測定是通過對一系列已知濃度分析物的樣品進行分析，并以能可靠地測得被分析物的最小量來建立。定量限的測定普通通過對一系列含有已知濃度被分析物的樣品分析，在精確度和精密度都符合規(guī)定的狀況下，來擬定被分析物能被定量測得的最小量。根據(jù)信噪比（S/N）測定該辦法僅合用于出現(xiàn)基線噪音的檢測辦法，例如色譜法。信噪比的測定是通過比較含有已知低濃度被分析物的樣品與空白樣品的測定信號，來建立檢測限和定量限。對于預計LOD，信噪比在3：1或2：1之間普通是可接受的；對于預計LOQ，典型的信噪比為10：1。根據(jù)響應值的原則差和斜率該辦法合用于滴定、紫外和原子吸取光譜法等。檢測限和定量限鑒定辦法以下：LOD=3.3σ/S

LOQ=10σ/S以上公式中，σ是響應值的原則差，S是校正曲線的斜率。

斜率S可從被分析物的校正曲線來估算，σ的值可用下面的辦法估算：基于空白的原則差，通過分析適宜數(shù)量的空白樣品，然后計算其響應值的原則差，測出分析背景響應值的大小?；谛Ｕ€，研究含有檢測限或定量限范疇內(nèi)的被分析物的樣品以得到特定的原則曲線，回歸線的剩余原則差或回歸線的y軸截距原則偏差都可作為原則偏差。建議的數(shù)據(jù)必須提供檢測限/定量限和測定檢測限/定量限的辦法。如果檢測限是根據(jù)信噪比得來的，應提供有關(guān)的色譜圖作為證明。如果是通過計算或外推法得到檢測限的估算值，可對一系列靠近或等于檢測程度樣品的逐個檢測來論證這一估算值?？赏ㄟ^分析適宜數(shù)量，已知濃度的靠近或等于定量限的樣品來證明定量限。耐用性

需測試此參數(shù)的辦法涉及含量和純度。根據(jù)所研究的檢測辦法的類型，應在開發(fā)檢測辦法階段評定耐用性。與所描述的辦法比較，以一系列變動的條件來分析對應的溶液進行評定。通過分析一系列被解決過的試液來評定。耐用性評定的成果應是建立一系列的系統(tǒng)合用性參數(shù)（如分離度實驗），以確保在任何時候使用該檢測辦法都是有效的。應展示典型的圖譜。對于液相色譜，典型的變量是流動相的pH、溫度和流速、流動相的構(gòu)成、不同批號或不同供應商的色譜柱等。對于氣相色譜，典型的變量是不同批號或不同供應商的色譜柱、溫度和流速。如果樣品制備時需過濾，應證明過濾前后樣品的一致性。如果樣品需要超聲和/或混合時，應評定樣品制備時的超聲和/或混合時間。當溶液放置時間超出24小時或指定時間時，應評定檢測辦法的分析物的溶液穩(wěn)定性。穩(wěn)定性批示性質(zhì)在對穩(wěn)定性批示辦法進行驗證時應評定穩(wěn)定性批示辦法（強制降解），應涉及表3中列出的空白劑、活性成分和配方顆粒的強迫降解條件。表3：穩(wěn)定性批示分析的強降解條件解決

Treatment極端強降解條件

Extremestressedcondition酸

Acid樣品/2NHCl，回流4小時

Sample/2NHCl,reflux4hours堿

Base樣品/2NNaOH，回流4小時

Sample/2NNaOH,reflux4hours氧化劑

Oxidative樣品/3%H2O2/室溫，24小時

Sample/3%H2O2/roomtemperature,24hours熱

Thermal樣品/干燥/烘箱內(nèi)105℃加熱，5天

Sample/dry/heatinovenat105熱/濕度

Thermal/Humidity樣品/頂空濕度飽和（MSH）/烘箱內(nèi)90℃，48小時

Sample/MoistureSaturatedHeadspace/ovenat90濕度

Humidity樣品/干燥器內(nèi)加水/室溫，5天

Sample/desiccatorswithwater/roomtemperature,5days陽光測試

Suntest樣品/UV/5天

Sample/UV/5days光穩(wěn)定性

Photostability樣品/干燥/UV下5天

Sample/dry/underUV,5days樣品溶液/UV下，5天，無色燒瓶

Samplesolution/underUV,5days,clearflask樣品溶液/UV下，5天，棕色燒瓶

Samplesolution/underUV,5days,amberflask按照降