丹參多酚酸鹽對(duì)慢性腎功能衰竭大鼠腎功能和腎內(nèi)氧耗的影響

丹參多酚酸鹽對(duì)慢性腎功能衰竭大鼠腎功能和腎內(nèi)氧耗的影響

慢性腎衰竭的共同病變是腎臟纖維。慢性低氧理論是目前腎衰竭學(xué)術(shù)界的研究熱點(diǎn)。Eckardt等研究表明,腎內(nèi)缺氧可以直接參與腎間質(zhì)纖維化。腎間質(zhì)纖維化幾乎是所有慢性腎臟疾病進(jìn)展到后期的最終結(jié)果。在眾多的抗肝腎纖維化方劑中都含有活血化瘀的丹參。丹參的主要組分之一——丹參多酚酸鹽可以延緩心、肝和神經(jīng)系統(tǒng)的組織纖維化,改善腎功能和腎間質(zhì)纖維化,而對(duì)其機(jī)制缺乏深入系統(tǒng)研究?；诖?本研究通過(guò)建立5/6(ablation/infarction,A/I)腎切除慢性腎功能衰竭大鼠模型(改良paltt模型),從降低腎內(nèi)氧耗的角度探討丹參多酚酸鹽對(duì)慢性腎臟疾病進(jìn)展的作用和影響。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物g:scxk社會(huì)健康清潔級(jí)成年雄性SD大鼠,共75只,8周齡,體質(zhì)量(200±10)g,由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供,合格證號(hào):SCXK(滬)2008-0016,飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,12h光照,溫度22℃,相對(duì)濕度55%左右,自由飲水、飲食。1.2儀器、試劑和儀器血?dú)夥治鰞x(i-STAT),美國(guó)AbbottPointofCareInc;血?dú)馍囗?xiàng)測(cè)試卡片,i-STATEG7+芯片;超聲波血流檢測(cè)儀,美國(guó)TransonicSystemInc,型號(hào):T206U。丹參多酚酸鹽,由上海綠谷制藥有限公司提供(批號(hào):091106);氯沙坦鉀(科素亞),由杭州默沙東制藥有限公司提供(批號(hào):H20030654);福辛普利鈉(蒙諾),由中美上海施貴寶制藥有公司生產(chǎn)(批號(hào):H19980197)。1.3腎包膜的分離和重建采用5/6腎切除(A/I)方法制備大鼠慢性腎功能衰竭腎纖維化模型。60只大鼠用2%戊巴比妥鈉(2ml/kg)腹腔注射麻醉,使大鼠右側(cè)臥位固定于恒溫手術(shù)臺(tái)上,用剃毛刀備皮后局部酒精棉球擦拭消毒,在左側(cè)肋弓下約0.5cm處,脊柱向左旁開1cm處切開一垂直于脊柱長(zhǎng)約2.5cm切口,經(jīng)后腹膜取腎,暴露左側(cè)腎臟,分離腎包膜后,將左腎動(dòng)脈的2/3分支結(jié)扎(后支及前降支單個(gè)結(jié)扎),縫合,復(fù)位剩余左腎,1周后摘除右腎。4周后測(cè)定大鼠生化指標(biāo)。另15只SD大鼠僅作背部切口,分2次剝離左右腎包膜,保留腎上腺,作為假手術(shù)組。造模動(dòng)物術(shù)后4周斷尾法采血,測(cè)定腎功能,剔除造模失敗和死亡動(dòng)物后,根據(jù)血清肌酐水平分組,分為模型組(n=15)、丹參多酚酸鹽組(n=13)、科素亞加蒙諾組(n=15)。1.4g注射科素亞加蒙諾丹參多酚酸鹽組給予丹參多酚酸鹽藥液(66.7mg/kg)腹腔注射,科素亞加蒙諾對(duì)照組予科素亞加蒙諾藥液2ml(5.5mg/ml)灌胃,假手術(shù)組和模型組予純凈水2ml灌胃。各組每日治療1次,連續(xù)60d。1.5腎功能及血紅蛋白治療60d后測(cè)定生化指標(biāo),用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定腎功能(BUN、Scr)及血紅蛋白(Hb);用Ccr代替GFR:Ccr(ml/min)=尿肌酐×24h尿量(ml)/血清肌酐×1440。1.6腎動(dòng)靜脈分離治療60d后測(cè)定各組大鼠腎血流量,并計(jì)算殘余腎內(nèi)氧耗。測(cè)定方法:大鼠用2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后,固定四肢仰臥于恒溫手術(shù)臺(tái)上,局部剪毛,常規(guī)消毒后沿腹白線從胸骨下縱行切開長(zhǎng)約7cm切口,無(wú)菌條件下暴露左腎,仔細(xì)剝離腎動(dòng)靜脈包膜,將腎動(dòng)靜脈分離。利用超聲波血流檢測(cè)儀檢測(cè)探頭,輕輕鉤住腎靜脈(不能鉤住腎動(dòng)脈),待血流穩(wěn)定后(約10min后),讀取血流指數(shù)并記錄。1.7血壓腎靜脈和腹主動(dòng)脈血清o2hb/po2的檢測(cè)血?dú)鉁y(cè)量方法:測(cè)量腎血流量讀數(shù)之后,撤掉血流探頭,用1ml血?dú)忉槒哪I靜脈抽取約0.2ml靜脈血,拔出針頭后壓迫血管止血。接著分離腹主動(dòng)脈外血管包膜,充分暴露腹主動(dòng)脈,用1ml血?dú)忉樒叫杏诟怪鲃?dòng)脈進(jìn)針,抽取0.2ml動(dòng)脈血,拔出針頭后局部壓迫血管止血。采用i-STAT血?dú)夥治鰞x的血?dú)馍囗?xiàng)測(cè)試卡片iSTATEG7+芯片分別檢測(cè)腎靜脈和腹主動(dòng)脈血?dú)獾腛2Hb%、PO2。腹主動(dòng)脈、腎靜脈氧含量計(jì)算公式:QO2(A-V)=AQO2-VQO2,AQO2=(1.39×tHb×O2Hb%+PO2×0.003)÷100,VQO2=(1.39×tHb×O2Hb%+PO2×0.003)÷100,TNa=(FNa-UNaV),FNa=GFR×PNa。腎內(nèi)氧耗應(yīng)用鈉吸收的氧耗(QO2/TNa)=QO2/TNa(ml/mmol)來(lái)計(jì)算。1.8統(tǒng)計(jì)方法應(yīng)用SPSS15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用x±s表示,組間比較用單因素方差分析。2結(jié)果2.1各組大鼠血清bun、scr水平的比較與假手術(shù)組比較,治療前各組血清BUN、Scr明顯升高(P<0.01),組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。假手術(shù)組和模型組治療前后血清BUN、Scr水平無(wú)明顯變化(P>0.05)。丹參多酚酸鹽組和科素亞加蒙諾組治療后BUN、Scr水平下降(P<0.05),且較模型組降低(P<0.05);內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)較模型組上升(P<0.05),兩組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。2.2腎內(nèi)氧耗量及血紅蛋白與假手術(shù)組比較,各組腎血流量(RBF)明顯降低(P<0.01),左腎靜脈氧壓(RVPO2)降低(P<0.05),腎內(nèi)氧耗量(QO2/TNa)明顯升高(P<0.01),血紅蛋白(Hb)下降(P<0.01);與模型組比較,兩藥物組RBF明顯升高(P<0.01),RVPO2升高(P<0.05),QO2/TNa明顯降低(P<0.01),Hb升高(P<0.05),且兩組間比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。提示治療后慢性腎功能衰竭大鼠腎內(nèi)血流明顯改善,腎內(nèi)氧耗降低。見表2。3治療慢性腎功能損害的作用機(jī)制傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為,慢性腎功能衰竭的病機(jī)特點(diǎn)為“正虛邪實(shí),虛實(shí)夾雜”。臨床證候調(diào)查顯示,瘀血是其最主要的兼證并貫穿始終,采用活血化瘀法治療慢性腎臟疾病可延緩腎病進(jìn)展,是臨床常用的治療方法。丹參作為最常用的活血化瘀中藥,在心臟和肝臟病變的研究中取得了很多成果;在腎臟領(lǐng)域,眾多的治療腎病的復(fù)方都含有丹參。丹參多酚酸鹽是采用現(xiàn)代工藝將丹參的有效成分濃縮而成的制劑,作為主要成分之一其純度和療效均高于丹參,且具有抗脂質(zhì)過(guò)氧化、改善內(nèi)皮功能、抗凝血、抗血小板、細(xì)胞保護(hù)、擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)等多種作用。已有實(shí)驗(yàn)研究表明,丹參多酚酸鹽改善腎功能可能是通過(guò)影響內(nèi)皮素釋放和腎組織MMP-2表達(dá)以減少腎間質(zhì)纖維化。而深入系統(tǒng)的機(jī)制研究還比較缺乏,值得我們進(jìn)一步研究其在慢性腎病進(jìn)展中的治療作用機(jī)制。本研究通過(guò)建立經(jīng)典的5/6(ablation/infarction,A/I)腎切除大鼠慢性腎功能衰竭模型,觀察丹參多酚酸鹽對(duì)模型大鼠腎功能的影響,并從腎內(nèi)氧耗變化的角度研究其作用機(jī)制。結(jié)果顯示,丹參多酚酸鹽可以降低血清尿素氮、肌酐水平,提高內(nèi)生肌酐清除率和血紅蛋白水平,升高殘余腎組織血流量(RBF)和左腎靜脈氧壓(RVPO2),從而降低腎內(nèi)氧耗,其作用強(qiáng)度與科素亞加蒙諾相當(dāng)。說(shuō)明丹