噬菌體展示技術(shù)系統(tǒng)研究進(jìn)展

噬菌體展示技術(shù)系統(tǒng)研究進(jìn)展

祭祀單胞菌（pdt）是一種用于手術(shù)的個(gè)體遺傳改良技術(shù)。它已經(jīng)發(fā)展成一個(gè)用于多基因（基因簇和基因）多腔外克產(chǎn)生的脾臟和內(nèi)克產(chǎn)生的強(qiáng)化和重組的統(tǒng)計(jì)信息系統(tǒng)（pds），該系統(tǒng)由通過(guò)分子遺傳改良后的髓細(xì)胞、輔助髓細(xì)胞和主細(xì)胞組成。M13和T7噬菌體展示系統(tǒng)已經(jīng)開(kāi)發(fā)出商品試劑盒。應(yīng)用該技術(shù)將外源多肽(蛋白質(zhì))編碼序列整合到噬菌體基因組中并以融合蛋白的形式展示在噬菌體表面,通過(guò)親和篩選開(kāi)展綜合性功能鑒定顯著特點(diǎn)是形成“基因型與表現(xiàn)型偶聯(lián)”,將重組蛋白質(zhì)篩選與基因篩選合二為一。與酵母雙雜交技術(shù)相比,它提高了鑒別未知肽結(jié)合位點(diǎn)的能力、效率和敏感度,在廣泛領(lǐng)域得到應(yīng)用并取得顯著進(jìn)展。各種應(yīng)用環(huán)境的新要求和新挑戰(zhàn)也不斷促進(jìn)其改良和更新,先后出現(xiàn)了基于噬菌體M13、λ、T4和T7的展示技術(shù)系統(tǒng)。改良發(fā)展的重點(diǎn)脈絡(luò)在于采用什么噬菌體、采用什么展示位點(diǎn)和錨定蛋白、要求定位展示在噬菌體表面上的錨定蛋白之N端或C端。本綜述旨在深刻理解典型噬菌體展示技術(shù)系統(tǒng)的核心發(fā)展歷程和技術(shù)特征,做到知其然知其所以然,明確適用范圍和選擇依據(jù),增強(qiáng)選擇能力和應(yīng)用效果,避免盲目性和提高有效性,啟發(fā)新思路和發(fā)展改良新系統(tǒng)。1菌株感染e.coliM13噬菌體是E.coli專一性絲狀噬菌體,通過(guò)接觸菌毛而感染E.coli。由蛋白質(zhì)外殼及其包被的環(huán)狀單鏈DNA組成。全基因組包含11個(gè)基因,其中5個(gè)編碼衣殼蛋白即p3、p6、p7、p8和p9蛋白。1.1pu蛋白誘導(dǎo)噬菌體感染途徑p3蛋白位于噬菌體的一端,5個(gè)拷貝,球形或線形,406個(gè)氨基酸殘基,分為3個(gè)結(jié)構(gòu)域N1、N2和CT,p3蛋白介導(dǎo)噬菌體感染過(guò)程起始于p3蛋白之N2結(jié)構(gòu)域先結(jié)合到菌毛頂端,隨后N1結(jié)構(gòu)域與宿主細(xì)菌細(xì)胞周質(zhì)空間的TolA蛋白相結(jié)合。在p3蛋白的兩個(gè)位點(diǎn)(N1結(jié)構(gòu)域和CT結(jié)構(gòu)域)上均可實(shí)現(xiàn)外源蛋白的融合展示。1.1.1與p2p蛋白的融合以噬菌體(phage)為載體,由M13噬菌體全部基因組組成,編碼噬菌體復(fù)制和組裝所需要的全部蛋白質(zhì)。將外源基因直接與p3蛋白的編碼基因之5′端融合,在噬菌體裝配過(guò)程中展示在噬菌體表面,產(chǎn)生與p3蛋白融合后的外源蛋白質(zhì)。p3蛋白介導(dǎo)的噬菌體展示有3~5個(gè)拷貝,是多價(jià)展示,由于存在多個(gè)結(jié)合位點(diǎn),不容易篩選到高親合力的展示噬菌體,還極大影響噬菌體的感染力,為此又建立了單價(jià)噬菌體展示系統(tǒng),即噬菌粒(phagemid)展示系統(tǒng)。1.1.2噬菌體表面ssna的構(gòu)建以噬菌粒(phagemid)為載體(人工載體),含有噬菌體的包裝序列、復(fù)制子及質(zhì)粒復(fù)制子、克隆位點(diǎn)、標(biāo)記基因等,包括78個(gè)堿基的特別信號(hào),能使噬菌?；蚪M以ssDNA形式被包裝形成噬菌體顆粒。同時(shí)需要輔助噬菌體提供包裝完整噬菌體所需要的其他蛋白質(zhì)(因?yàn)槭删；蚪M中缺失)。1.1.3子代噬菌體的檢測(cè)“噬菌體營(yíng)救(phagerescue)”是指由輔助噬菌體提供復(fù)制及包裝過(guò)程所需要的酶及結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì),形成有活性的完整噬菌體顆粒。結(jié)果產(chǎn)生兩種不同的子代噬菌體:包含噬菌粒基因組的子代和包含輔助噬菌體基因組的子代。后者不含目的外源基因,可通過(guò)采用帶有復(fù)制缺陷和包裝信號(hào)基因的輔助噬菌體來(lái)排除,從而將子代中包裝了輔助噬菌體基因組的概率降低到千分之一。目前使用的輔助噬菌體主要是M13KO7、M13Δ3.2、R408d3、KM13、Hyper-phage、Ex-phage、Phaberge、VCSM13、CT-Phage。1.1.4噬菌體基因表達(dá)目前是由p3蛋白之N端介導(dǎo)的展示。該系統(tǒng)的主要構(gòu)成是pCANTAB5E載體、M13KO7輔助噬菌體、E.coliTG1菌株、E.coliHB2151菌株。遺傳學(xué)特征包括:(1)pCANTAB5E載體:含有乳糖啟動(dòng)子、M13噬菌體的p3蛋白信號(hào)肽、融合蛋白質(zhì)標(biāo)簽E-tag、琥珀終止密碼子(AUG)、M13噬菌體的p3蛋白基因、克隆酶切位點(diǎn)(5′端SfiI,3′端NotI)、M13噬菌體DNA復(fù)制原點(diǎn)(產(chǎn)生單鏈DNA)、細(xì)菌DNA復(fù)制原點(diǎn)(產(chǎn)生雙鏈DNA)、Amp抗性;(2)E.coliTG1菌株:宿主細(xì)菌?？梢圆糠忠种歧杲K止密碼子,抑制效率為20%,產(chǎn)生展示在噬菌體表面的蛋白質(zhì),無(wú)Amp抗性;(3)E.coliHB2151菌株:宿主細(xì)菌。無(wú)抑制琥珀終止密碼子的功能,琥珀終止密碼子正常作用,產(chǎn)生可溶性蛋白質(zhì)。篩選標(biāo)記為萘啶酮酸(nalidixicacid)抗性;(4)輔助噬菌體M13KO7:復(fù)制原點(diǎn)經(jīng)過(guò)了改造,當(dāng)它與噬菌粒共感染時(shí),自身基因組的復(fù)制受抑制,為重組噬菌體的組裝提供相關(guān)的產(chǎn)物支持。篩選標(biāo)記為Kan抗性。1.1.5“土壤蛋白”融合對(duì)外源蛋白質(zhì)的整合根據(jù)p3蛋白之C端埋進(jìn)噬菌體顆粒內(nèi)部來(lái)推測(cè)C端融合的外源蛋白質(zhì)也會(huì)隱藏在噬菌體衣殼內(nèi)部。C端融合的噬菌體展示技術(shù)則需要借助采用有高親和力相互作用的Jun和Fos亮氨酸拉鏈蛋白。將Jun亮氨酸拉鏈蛋白質(zhì)融合到p3蛋白之N端,而將cDNA產(chǎn)物與Fos亮氨酸拉鏈蛋白質(zhì)之C端融合,構(gòu)建文庫(kù)。p3蛋白融合了Jun蛋白,與周圍胞漿中的可溶性Fos融合蛋白質(zhì)親和結(jié)合,從而使外源cDNA片段編碼的蛋白質(zhì)展示在噬菌體衣殼蛋白上。還可以通過(guò)在p3蛋白之C端加接頭來(lái)實(shí)現(xiàn)在C端展示外源蛋白質(zhì)。起連接作用的氨基酸鏈接頭對(duì)氨基酸的序列無(wú)嚴(yán)格要求,但是對(duì)其長(zhǎng)度要求則很苛刻,當(dāng)氨基酸鏈為8~10個(gè)殘基時(shí),C端展示可達(dá)到與N端展示相近的數(shù)量水平,而且所表達(dá)的蛋白質(zhì)能夠更好的與配體結(jié)合。1.2基于p8蛋白的多肽融合p8蛋白是M13噬菌體的主要衣殼蛋白,約2700個(gè)拷貝,50個(gè)氨基酸殘基。X射線結(jié)構(gòu)研究表明,p8蛋白之N端暴露在顆粒表面而C端則埋藏在核心。p8蛋白介導(dǎo)的N端展示是將外源蛋白質(zhì)融合展示在p8蛋白之N端,拷貝數(shù)可達(dá)到2700個(gè),但是p8蛋白不能與多于6~8個(gè)氨基酸的多肽融合,因?yàn)檩^長(zhǎng)的多肽融合會(huì)影響噬菌體本身的包裝及感染性。采用蛋白質(zhì)工程手段突變p8蛋白之后,可使得p8蛋白在高拷貝下表達(dá)更長(zhǎng)多肽(如22kDa人生長(zhǎng)激素和50kDa鏈霉親和素)。在p8蛋白與外源蛋白質(zhì)之間加一個(gè)較短的氨基酸鏈接頭,可實(shí)現(xiàn)在p8蛋白之C端展示。這個(gè)接頭對(duì)氨基酸殘基數(shù)目有嚴(yán)格要求,實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證當(dāng)殘基數(shù)為8時(shí),可篩選到最多的重組噬菌體。在C端展示具有優(yōu)勢(shì):(1)在噬菌體包裝之前,p8蛋白跨越大腸桿菌內(nèi)膜,N端處在細(xì)胞周質(zhì)空間,C端則處在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。N端展示的外源蛋白必須通過(guò)宿主分泌機(jī)制并且在細(xì)胞周質(zhì)空間中完成折疊,而C端展示的外源蛋白則繞開(kāi)了分泌途徑可在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)完成折疊;(2)蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間的相互作用一般需要有游離的C末端,只有采用p8蛋白之C端展示的外源蛋白質(zhì)才能夠?qū)崿F(xiàn)相互作用;(3)在構(gòu)建cDNA展示文庫(kù)時(shí),終止密碼子將終止開(kāi)放閱讀框從而終止在N端展示,但是不影響在C端展示。1.3共同定位p7蛋白和p9蛋白定位在M13噬菌體的相同末端,而p3蛋白和p6蛋白則共同定位在另一末端,4種都是次要衣殼蛋白,都有5個(gè)拷貝。p7、p9和p6蛋白都可用來(lái)展示外源蛋白質(zhì),可在p7、p9蛋白之N端融合或在p6蛋白之C端融合,但是展示水平比p3蛋白之N端展示的情形要低100倍。2噬菌體的結(jié)構(gòu)λ噬菌體有20面體頭部及尾部結(jié)構(gòu),基因組(48.5kb)是線狀雙鏈DNA,有46個(gè)基因。噬菌體頭部是由E蛋白(415拷貝,E基因編碼)六聚體(頂點(diǎn)處為五聚體)及D蛋白(135~140拷貝,D基因編碼)三聚體組成的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)。λ噬菌體展示技術(shù)系統(tǒng)采用D蛋白和V蛋白(V基因編碼)介導(dǎo)展示。2.1d蛋白引導(dǎo)的顯示D蛋白在頭部空間結(jié)構(gòu)中比較突出,容易與配體結(jié)合,可將外源蛋白質(zhì)融合在D蛋白上。2.1.1噬菌體表面蛋白的表達(dá)早期用于構(gòu)建cDNA文庫(kù)的λ噬菌體體外包裝試劑盒,可以發(fā)展成為λ噬菌體展示文庫(kù)試劑盒。首先,在λ噬菌體基因組中D基因之5′端或3′端引入多個(gè)酶切位點(diǎn)。然后,將外源目的基因整合到λ噬菌體基因組中,使之與D蛋白之N端或C端融合,可以展示在λ噬菌體表面。已成功展示的例子有D-β-半乳糖苷酶四聚體和β-內(nèi)酰胺酶-D。2.1.2e.coli-d融合蛋白將外源蛋白質(zhì)(如血管緊張素AII)編碼基因與D基因融合,構(gòu)建重組質(zhì)粒pRH800(AII-D),再轉(zhuǎn)化宿主細(xì)菌E.coli細(xì)胞,D融合蛋白在宿主細(xì)菌中高效表達(dá)后被分離出來(lái),再加入到λD-噬菌體顆粒(缺失D蛋白)中,經(jīng)過(guò)體外組裝過(guò)程展示在λD-噬菌體表面。2.1.3md蛋白的誘導(dǎo)誘導(dǎo)首先,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化含有噬菌體λD-的E.coli溶源性菌株(NS3762);然后,通過(guò)熱誘導(dǎo)產(chǎn)生重組噬菌體,使得與D蛋白之N端融合后的外源蛋白質(zhì)展示在噬菌體表面。不過(guò),由于D融合基因未能整合到噬菌體基因組中,在噬菌體進(jìn)一步繁殖過(guò)程中,重組表達(dá)的融合蛋白可能會(huì)消失。2.1.4md-pcr共感染基因的構(gòu)建利用噬菌體P1的Cre-LoxP位點(diǎn)特異性重組系統(tǒng),將外源基因插入整合到λ噬菌體基因組中。例如,在D蛋白之N端展示文庫(kù),將含有與D基因融合后的外源目的基因重組質(zhì)粒(帶有l(wèi)oxP序列)轉(zhuǎn)化宿主E.coli細(xì)菌(提供重組酶Cre),同時(shí),將帶有l(wèi)oxP位點(diǎn)的λD-噬菌體共感染該宿主細(xì)菌,在宿主細(xì)菌體內(nèi)發(fā)生插入整合重組,產(chǎn)生新的重組噬菌體,可用Amp抗性作為篩選標(biāo)記。經(jīng)過(guò)熱誘導(dǎo)后釋放出自由的重組噬菌體粒子,與D蛋白融合后的目的蛋白質(zhì)就被展示在重組噬菌體的表面。2.1.5基因共感染病毒d融合采用改進(jìn)的loxP位點(diǎn),將外源目的基因插入在質(zhì)粒中D基因之3′端。在含有D融合基因和Amp標(biāo)記質(zhì)粒(供體質(zhì)粒)中引入loxPwt和loxP511位點(diǎn),轉(zhuǎn)化到能表達(dá)位點(diǎn)特異性重組酶(Cre)的宿主細(xì)菌中。再用λ噬菌體(D基因帶有琥珀突變)感染該宿主細(xì)菌,噬菌體攜帶側(cè)翼中含有l(wèi)oxPwt和loxP511位點(diǎn)的填充DNA片段。在位點(diǎn)特異性重組酶Cre作用下發(fā)生體內(nèi)插入整合(在loxP位點(diǎn)處),形成帶有Amp的分子間單交聯(lián)和分子內(nèi)雙交聯(lián)的崁合體,進(jìn)一步形成新的重組噬菌體,將D融合蛋白展示在噬菌體表面。這里采用了兩個(gè)互不兼容的lox重組序列l(wèi)oxPwt和loxP511,它們分別以相反方向存在于質(zhì)粒和噬菌體基因組中,所形成的崁合體中含有兩個(gè)loxPwt位點(diǎn),方便切除整合質(zhì)粒。因?yàn)橹亟M發(fā)生在宿主細(xì)菌細(xì)胞內(nèi),所以不必要分離λ基因組、插入酶切位點(diǎn)、克隆外源片段及在體外包裝λ噬菌體重組子。在質(zhì)粒水平和噬菌體水平(崁合體)上重組子頻率大于90%,而直接在λ展示載體里克隆的頻率僅約3%~5%。2.2外源蛋白質(zhì)的測(cè)定V蛋白空間位阻較小,C端不是必需的,可在V蛋白的C端展示外源蛋白質(zhì)。例如在λfoo載體中,將外源β-半乳糖苷酶基因放置在V蛋白之C端,可融合展示在噬菌體表面,展示的β-半乳糖苷酶有酶活性,且以四聚體形式存在。3第二、t4噬菌體的材料組合T4噬菌體是烈性噬菌體,基因組是線狀雙鏈DNA,衣殼是扁長(zhǎng)的二十面體。在衣殼表面還有兩種附屬的外殼蛋白HOC(40kDa,155拷貝)和SOC(9kDa,870拷貝),它們?cè)赥4噬菌體衣殼組裝后結(jié)合到衣殼外表面。因?yàn)镠OC和SOC是噬菌體結(jié)構(gòu)和生活史中非必需的附屬蛋白,它的存在與否都不影響T4的生存和繁殖,所以HOC和SOC成為了T4噬菌體展示技術(shù)系統(tǒng)中可以進(jìn)行遺傳操作的關(guān)鍵組份?？蓪⒁环N或兩種外源多肽(蛋白質(zhì))分別與SOC的C端融合和/或與HOC的N端融合后展示在T4噬菌體表面,但不影響T4噬菌體正常活性。3.1噬菌體同源重組質(zhì)粒的構(gòu)建體外組裝途徑(invitroassemble):首先,將外源基因x與soc基因融合,轉(zhuǎn)化宿主細(xì)菌E.coli細(xì)胞,SOC融合蛋白在宿主細(xì)菌中高效表達(dá);然后,分離該融合蛋白,再加入到soc-噬菌體顆粒(缺失SOC蛋白)中,組裝過(guò)程可展示在表面。體內(nèi)同源重組途徑(invivohomologousrecombination):首先,構(gòu)建T4噬菌體SOC位點(diǎn)的重組質(zhì)粒。將外源基因x插入含有soc基因的載體pE-SII上,使之與soc基因的3′端融合,形成soc-x融合表達(dá)載體pSX,經(jīng)過(guò)酶切得到soc-x基因。連接到T4整合載體pRH中得到整合載體pRHsx。pRH是T4噬菌體SOC位點(diǎn)的重組質(zhì)粒,在外源基因插入位點(diǎn)之處的左右兩側(cè)是T4噬菌體同源基因e’和denv’。其次,將重組質(zhì)粒通過(guò)體內(nèi)重組整合到噬菌體基因組中。先轉(zhuǎn)化E.coli,再采用T4-Zh-感染,完成體內(nèi)同源重組過(guò)程。其原理是因T4-Zh-噬菌體中缺失了溶菌酶的部分基因,表現(xiàn)為溶菌酶依賴型噬菌體,必須在有溶菌酶存在的情況下才能夠生長(zhǎng);而整合載體pRH上含有溶菌酶基因,在E.coli細(xì)胞內(nèi)能夠與T4-Zh-發(fā)生體內(nèi)同源重組,使其恢復(fù)溶菌酶活性,在噬菌體T7啟動(dòng)子調(diào)控下表達(dá)soc-x融合基因。第三,挑選經(jīng)過(guò)重組之后恢復(fù)了溶菌酶的表現(xiàn)型,即為生長(zhǎng)不依賴性的噬菌體,從而將目的蛋白質(zhì)展示在T4噬菌體表面的SOC位點(diǎn)上。3.2hoc融合蛋白通過(guò)體外組裝方法實(shí)現(xiàn)在HOC位點(diǎn)上N端融合展示外源蛋白質(zhì)。首先,將外源基因(保護(hù)抗原)與hoc基因之5′端連接構(gòu)建x-hoc表達(dá)載體,隨后轉(zhuǎn)化宿主細(xì)菌E.coli細(xì)胞。然后,在IPTG誘導(dǎo)下表達(dá)HOC融合蛋白(如PA-HOC,130kDa和p24-HOC,66kDa)。最后,將分離得到的HOC融合蛋白加入到純化的hoc-soc-T4噬菌體突變株(缺失HOC蛋白和SOC蛋白)中,在體外孵育,即可將HOC融合蛋白組裝到衣殼表面的HOC位點(diǎn)上,從而在HOC位點(diǎn)上展示外源蛋白質(zhì)。3.3soc點(diǎn)和hc點(diǎn)的雙顯示T4噬菌體雙展示,是指同時(shí)在衣殼表面的SOC和HOC位點(diǎn)上展示外源蛋白質(zhì)。3.3.1重組質(zhì)粒的篩選例如,先體內(nèi)同源重組單展示SOC-mE2,再體內(nèi)包裝雙展示SOC-mE2/E2-HOC。首先,將mE2(26kDa)和E2(53kDa)的編碼基因分別連接到T4整合載體pRH中。然后,采用重組質(zhì)粒pSoc-mE2轉(zhuǎn)化E.coliCR63,再用T4Zh-感染,以溶菌酶活性為標(biāo)記篩選重組噬菌體T4-Soc-mE2。第三,采用重組質(zhì)粒pHocE2轉(zhuǎn)化E.coliBL21(DE3),經(jīng)過(guò)IPTG誘導(dǎo)產(chǎn)生融合蛋白E2-HOC,再將重組噬菌體T4-Soc-mE2共感染E.coliBL21(DE3),得到T4-Soc-mE2/E2-Hoc雙展示。3.3.2基于hsoc’-’hoc的誘導(dǎo)物理法制備重組噬菌體以隨機(jī)多肽為代表性事例。首先,構(gòu)建重組質(zhì)粒pRHsoc’(soc’-NNK)。其次,構(gòu)建重組質(zhì)粒pRHsoc’-’hoc(soc’-NNK/NNK-’hoc)。第三,采用體內(nèi)同源重組過(guò)程,獲得重組噬菌體T4-Zsoc’-’hoc(soc’-NNK/NNK-’hoc)。最后,挑選經(jīng)過(guò)重組之后恢復(fù)了溶菌酶的表現(xiàn)型,即為生長(zhǎng)不依賴性的噬菌體,從而將目的蛋白質(zhì)展示在T4噬菌體表面的SOC位點(diǎn)之C端和HOC位點(diǎn)之N端。4t7噬菌體的分子T7噬菌體是烈性噬菌體,基因組是線狀雙鏈DNA。頭部為二十面體,主要由基因10編碼的10蛋白(415個(gè)拷貝)單體聚合構(gòu)成的六聚體和五聚體組成。同一個(gè)基因10可編碼10A及10B蛋白,在10A第341個(gè)氨基酸處發(fā)生翻譯移碼后產(chǎn)生10B蛋白。正常T7噬菌體的頭部中10A與10B蛋白的比例是9:1。在特殊情況下,這兩種蛋白的比例可以不同,即使全部都是同一種蛋白,也能保持T7噬菌體顆粒的活性。4.11t7選擇型10b蛋白載體T7噬菌體展示系統(tǒng)多采用10B蛋白的C端融合展示外源蛋白質(zhì)。有兩個(gè)好處:(1)C端空間位阻不大;(2)C端蛋白較晚被翻譯,即使是外源蛋白質(zhì)的編碼基因中含有終止密碼,也不影響與其N端融合的10B蛋白的完整表達(dá)?？筛呖截悢?shù)(每個(gè)噬菌體有415個(gè))展示50個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的多肽(稱為T7選擇型415-1載體);可低拷貝數(shù)(每個(gè)噬菌體有0.1~1個(gè))展示900~1200個(gè)氨基酸的多肽(蛋白質(zhì))(稱為T7選擇型1-1和1-2載體);可中拷貝數(shù)(每個(gè)噬菌體有5~15個(gè))展示900~1200個(gè)氨基酸的多肽(蛋白質(zhì))(稱為T7選擇型10-3載體)。所有載體中都刪除了衣殼蛋白基因中的天然翻譯移碼位點(diǎn),并且在10B蛋白第348個(gè)殘基之后還插入了系列多克隆位點(diǎn)。4.2t7選擇型載體的應(yīng)用有利于提高高親水篩選T7噬菌體展示技術(shù)系統(tǒng)目前已有T7Select?System系列試劑盒,改造了10蛋白基因中啟動(dòng)子及起始序列,在10蛋白基因的下游可鏈接上外源目的基因,可表達(dá)與10B蛋白融合的外源目的蛋白質(zhì)。該系列試劑盒提供了系列載體質(zhì)粒、宿主細(xì)菌、標(biāo)記物和淘選試劑等,解決了兩個(gè)方面的問(wèn)題:(1)解決拷貝數(shù)控制及高、低親和力篩選問(wèn)題。首先,T7選擇型415-1載體由強(qiáng)的噬菌體啟動(dòng)子(Φ10)控制衣殼蛋白表達(dá),與野生型的翻譯起點(diǎn)(S10)相同,在感染宿主細(xì)菌過(guò)程中,產(chǎn)生大量外源多肽(蛋白質(zhì))與衣殼蛋白的融合蛋白質(zhì),在噬菌體表面展示415個(gè)拷貝的外源多肽(蛋白質(zhì)),是高拷貝數(shù)表達(dá),有利于那些低親和力篩選。其次,試劑盒還提供低拷貝數(shù)展示的載體系列。例如,T7選擇型載體1-1不攜帶衣殼基