中藥地黃的藥理研究

中藥地黃的藥理研究

中藥黃鼠尾是玄參科植物黃鼠尾的根，具有滋陰清熱、出血止血等功效。由于藥效的差異,藥材分為鮮地黃、干地黃及熟地黃;由于炮制方法的不同,分為加酒、不加酒蒸或燉制熟地黃、酒炒及炒炭等炮制品。地黃在臨床上應(yīng)用極為廣泛,除與其它中藥配伍并用外,以地黃為主的中成藥也有幾十種之多。國內(nèi)外學(xué)者對地黃進(jìn)行了較多的研究,尤其是80年代以來化學(xué)成分、藥理作用研究,取得了較大的進(jìn)展?，F(xiàn)將近幾年來地黃化學(xué)成分、藥理作用的研究概述如下。1地黃的化學(xué)成分研究1.1不同種類糖苷的檢測地黃的化學(xué)成分以苷類為主,其中又以環(huán)烯醚萜苷類為主。從鮮地黃及干地黃中,已分離鑒定出20多種苷類:梓醇[4～7、30],二氫梓醇,乙酰梓醇,益母草苷,桃葉珊瑚苷[6～8],單蜜力特苷,蜜力特苷,RehmaglutinA、B、C、D[6、7],Acteoside,地黃苷A、B、C、D,Cerebrosid及含氯的Glutinoside,RehmaionosideA、B、C,Rehmapicroside,PurpureasideC,海膽苷,CistanosideA、F,JionosideA、B,JioglutosideA,B,去羥梔子苷,筋骨草苷,8-表番木鱉酸,乙酰梓醇苷等[8、9],熟地中含量較少。1.2-二羥基-o-a-d-李吡喃糖的合成從地黃愈傷組織的甲醇提取物中分離鑒定了4種酚性苷類:Acteoside、Forsythiaside、3,4-二羥基-O-a-D-吡喃葡糖-(13)-4-O-咖啡酰-a-D-吡喃葡糖苷、3,4-二羥基-O-a-D-吡喃葡糖-(13)-O-α-L-鼠李吡喃糖-(16)-4-O-咖啡酰-a-D-吡喃葡糖苷及3,4-二羥基-a-苯乙基-O-α-L-鼠李吡喃糖-(13)-O-a-D-半乳吡喃糖-(16)-4-O-咖啡酰-a-D-吡喃葡糖苷,以及胡蘿卜苷、1-乙基-a-D-半乳糖苷。其次為糖類,已分離鑒定出8種糖:水蘇糖、棉子糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、甘露三糖、毛蕊花糖及半乳糖[4、5、11～13]。鮮地黃中水蘇糖含量高于干地黃,而六碳糖、蔗糖及三糖含量低于干地黃,干地黃中僅含少量還原糖,而熟地中含有大量還原糖,其苷類的構(gòu)成及含量有明顯變化。1.3不同酸,不同樹地黃中含有20余種氨基酸,鮮地黃中精氨酸含量最高,我們對地黃及其炮制品中水溶性游離氨基酸進(jìn)行比較,干地黃中含有15種氨基酸,按含量多少依次為丙氨酸、谷氨酸、纈氨酸、精氨酸、天冬氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸、絲氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、胱氨酸及賴氨酸。加酒及不加酒燉制熟地黃中氨基酸含量顯著減少,含量減少90%以上者有賴氨酸及精氨酸,含量減少80%以上者有谷氨酸、絲氨酸。與文獻(xiàn)報道基本相同,只是不存在脯氨酸與胱氨酸,而存在甲硫氨酸及組氨酸,熟地黃中鹽基性氨基酸顯著減少。1.4水u與酸含量測定地黃中的無機離子及微量元素,鮮葉及鮮根中:K>Mg、Ca、P>Na、Fe>Cu、Al、Si、B、Sr、Zn>Ba、Cr、Ti、Ni、Co,干葉中Fe、Cu含量較干根中高,干地黃中:K>Mg>Ca>Fe>Na>Mn>Zn>Cu,我們對地黃及其炮制品的比較結(jié)果,干地黃中:K>Mg>Ca>Na>Fe>Cu>Zn>Mn>Sr>Cr>Co>Pb,前4種大于500ppm,后4種小于5ppm,加酒與不加酒制熟地黃基本一致。水煎劑中的溶出率:Ca、Mg干地黃與熟地黃基本一致,Sr、Mn熟地黃略低,而Cu稍高,Zn、Al、Fe水燉較酒燉制熟地黃高,干地黃水煎劑中Cl、K、Na較熟地黃水煎劑中高。從干地黃中分離得到系列脂肪酸、a-谷甾醇、棕櫚酸、丁二酸、十二烷酸、十五烷酸、十七烷酸等;從熟地黃中分離鑒定了acteoside及5-羥甲基糠醛。環(huán)烯醚萜類在鮮地黃、干地黃及熟地黃中的含量有顯著差異,結(jié)合的糖越多環(huán)烯醚萜苷類分解速度越慢,三糖苷地黃苷D幾乎不分解,雙糖地黃苷A、B及蜜力特苷僅剩下1/3的量,而單糖苷如益母草苷、桃葉珊瑚苷、梓醇僅剩下1/10的量。近年來,對中國、韓國、日本產(chǎn)的地黃中的化學(xué)成分及其含量變動進(jìn)行了比較研究。從鮮葉中分離鑒定出金圣草黃素、木犀草素及梓醇。2地震成分含量的測定2.1硫酸-香醛顯色法薄層掃描法:(1)樣品甲醇加熱回流提取后點于硅膠板上,用氯仿-甲醇-水(7∶4∶0.5)展開,10%硫酸-乙醇顯色,于413nm處掃描測定;(2)樣品水加熱回流提取后點于硅膠板上,用氯仿-甲醇-水(7∶4∶0.5)展開,硫酸-茴香醛顯色,于?sR340nm,?400nm掃描測定。高效液相色譜法樣品用甲醇提取,色譜柱:UltrasphereODSC18(4.6mm×25cm),流動相:水-乙腈(98∶2),流速:1mL/min,檢測波長為210nm。2.2硫酸-乙醇法薄層掃描法:樣品甲醇加熱回流提取后點于硅膠板上,用氯仿-甲醇-水(7∶4∶0.5)展開,10%硫酸-乙醇顯色,于407nm掃描測定。2.3流動相及檢測波長高效液相色譜法:HypersilCl8分析柱(250mm×4.6mm,5/1m),流動相為乙腈-水(4∶96),流速為1mL/min,柱溫為室溫,檢測波長為205nm。2.4檢測波長的測定氣相色譜法:樣品用甲醇抽提,濃縮后加水,過濾,濾液用活性炭柱層析,先用水后用甲醇洗脫,洗脫液濃縮后硅膠柱分離,氯仿-甲醇-水(6∶4∶1)洗脫,洗脫液加吡啶,NO-雙-(三甲基硅烷基)-乙酰胺或三甲基氯化硅烷硅醚化后進(jìn)樣,色譜柱為玻璃柱,填裝0.5%OV-1/GasChromQ100～120目,N2:(70mL/min),氣化室溫270℃,程序升溫,火焰離子化檢測器,可測出益母草苷、桃葉珊苷、單蜜力特苷、梓醇、雙氫梓醇、地黃苷C、地黃苷A、蜜力特苷、地黃苷B、地黃苷D。2.5苯酚-濃硫酸顯色法比色法:(1)生藥提取液與0.02M硫代巴比妥酸及鹽酸混合,加熱6min,冷卻后生成黃色,在432.5nm比色測定。(2)苯酚-濃硫酸顯色,在488nm比色測定。薄層掃描法:樣品用氯仿提取,棄去氯仿,再用80%甲醇提取,提取液加飽和醋酸鉛溶液,離心,上清液點于薄板(浸0.1MNaH2O4并85℃干燥)上,以異戊醇-吡啶-水(4∶4∶1)二次展開后浸入每200mL含有2g二苯胺、2mL苯胺、2mL85%磷酸丙酮的混合液中,揮干后100℃烘干,透射掃描測定。2.6其它理化因素高效液相色譜法:樣品用甲醇提取,色譜柱:NucleosilODSC18(4.6mm×25cm),流動相:甲醇-2%醋酸(35∶65),流速:0.8mL/min,檢測波長為334nm。此外,關(guān)于地黃加熱、炮制等顏色變黑的原因,有人認(rèn)為系梓醇苷分解產(chǎn)生去-對羥基梓醇次苷及對-羥基苯甲酸所致;有人認(rèn)為是以梓醇為基本骨架的單糖或雙糖苷分解成苷元,這些苷元聚合可能導(dǎo)致顏色變黑;也有人認(rèn)為系由于糖類所產(chǎn)生的果糖或5-羥甲基糖醛與氨基酸反應(yīng)產(chǎn)生類黑精(melanoidin)所致;或者由于采用反相高效液相色譜法測定地黃中梓醇的含量,采用HPLC法測定地黃中地黃苷D含量并對地黃及其炮制品中梓醇、游離氨基酸進(jìn)行分析,對石油醚提取物中酸性成分進(jìn)行分離鑒定等[28～30],采用液相層析法分離制備地黃降血糖成分梓醇等[31、32],由此,為中藥地黃的應(yīng)用及藥材標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化研究提供了依據(jù)。3鮮麻黃、鮮氣在藥材上地黃分為鮮地黃、干地黃和熟地黃3種,均具有滋陰生津功效,但各有側(cè)重。鮮地黃性寒,味甘苦,清熱生津,涼血止血。生地黃性寒,味甘,清熱涼血,養(yǎng)陰生津。熟地黃性微溫,味甘,滋陰補血,益精填髓。近年來,地黃的藥理作用已被越來越多的醫(yī)家所關(guān)注,并在臨床治療中廣泛應(yīng)用。3.1對造血系統(tǒng)的作用地黃寡糖可促進(jìn)快速老化模型小鼠骨髓粒系巨噬系母細(xì)胞以及早期和晚期紅系母細(xì)胞的增殖,其脾細(xì)胞條件液也可使造血母細(xì)胞克隆集落數(shù)明顯增加,地黃寡糖還可使其基質(zhì)細(xì)胞層上粒系巨噬系母細(xì)胞集落的產(chǎn)率明顯增多。提示地黃寡糖可能通過多種途徑激活機體組織,特別是造血微環(huán)境中的某些細(xì)胞,促進(jìn)其分泌多種造血生長因子而增強造血母細(xì)胞的增殖。地黃多糖可明顯促進(jìn)正常小鼠骨髓造血干細(xì)胞的增殖,對粒單系母細(xì)胞和早、晚期紅系母細(xì)胞的增殖和分化亦有明顯促進(jìn)作用。由此可見地黃寡糖和多糖對造血系統(tǒng)均具有刺激作用。另外,用鮮地黃汁或鮮地黃煎液及干地黃煎液給小鼠灌胃,均在一定程度上拮抗阿司匹林誘導(dǎo)的小鼠凝血時間延長,且鮮地黃汁的作用明顯強于干地黃,提示其具有止血作用。近有研究表明,地黃中單體活性成分地黃苷D可明顯增加血虛模型小鼠白細(xì)胞、血小板、網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)和骨髓DNA含量及體重。3.2免疫抑制作用用鮮地黃汁和鮮地黃水煎液給醋酸強的松龍誘導(dǎo)的免疫低下小鼠灌胃,能使類陰虛小鼠的脾臟淋巴細(xì)胞堿性磷酸酶的表達(dá)能力明顯增強,對于甲狀腺素造成的小鼠陰虛模型,鮮地黃汁還能增強ConA誘導(dǎo)的脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能。地黃低聚糖可明顯增強正常小鼠的空斑形成細(xì)胞(PFC)反應(yīng),提高環(huán)磷酰胺抑制小鼠和荷瘤小鼠的PFC數(shù)及增強荷瘤小鼠的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng),提示地黃低聚糖可明顯增強免疫抑制小鼠的體液免疫和細(xì)胞免疫功能。另有研究表明,皮質(zhì)酮肌肉注射誘導(dǎo)的小鼠糖皮質(zhì)激素過?！瓣幪摗蹦Ｐ托∈蟾骨痪奘杉?xì)胞明顯增強γ-干擾素誘導(dǎo)Iá抗原表達(dá),生地黃能明顯抑制模型小鼠巨噬細(xì)胞Iá抗原的高水平表達(dá),提示地黃具有一定的免疫抑制作用,而抑制巨噬細(xì)胞表面Iá抗原表達(dá)水平,降低其提呈抗原能力,可能是生地黃作用機理之一。現(xiàn)有研究表明,地黃中單體活性成分地黃苷D、地黃苷A可以使陰虛模型小鼠體重明顯增加、血漿cAMP含量明顯降低;地黃苷A能明顯提高小鼠血清溶血素水平,增強小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng),而對腹腔巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)和吞噬系數(shù)無明顯影響[35、39]。3.3異丙腎上腺素誘導(dǎo)的大鼠腦缺血地黃可明顯對抗L-甲狀腺素灌胃誘導(dǎo)的大鼠心肌肥厚,抑制心、腦線粒體Ca2+、Mg2+-ATP酶活性,從而保護(hù)心腦組織避免ATP耗竭和缺血損傷,同時地黃煎劑可對抗異丙腎上腺素誘導(dǎo)的大鼠腦缺血,亦可明顯抑制Ca2+、Mg2+-ATP酶活性升高,提示地黃中可能含有鈣拮抗活性物質(zhì)[41、42]。對大鼠腹腔注射懷地黃水提取液,對急性實驗性高血壓有明顯降壓作用,對寒冷(室溫23℃)情況下的血壓則有穩(wěn)定作用,提示地黃對血壓具有雙向調(diào)節(jié)作用。研究認(rèn)為懷地黃水提取物有顯著降壓、鎮(zhèn)靜和抗炎作用,而乙醚、乙醇提取物無上述作用,水提取物的酸性部分有降壓、鎮(zhèn)靜作用,而中性、堿性部分作用不顯著,水提取物酸性部分主要含苷類、生物堿類及磷酸等成分。3.4細(xì)胞毒性t細(xì)胞對腫瘤的殺傷能力地黃多糖b可抑制S180荷瘤小鼠細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞活力下降,促進(jìn)IL-2分泌,提示地黃多糖b可明顯增強Iyt-2+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞對腫瘤的殺傷能力。通過定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法檢測,低分子量地黃多糖能使Lewis肺癌組織內(nèi)p53基因的表達(dá)水平明顯增加,利用競爭性逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)觀察,低分子量地黃多糖亦使Lewis肺癌細(xì)胞內(nèi)p53基因表達(dá)水平明顯增加,提示低分子量地黃多糖可能通過調(diào)控p53基因的表達(dá)而影響腫瘤細(xì)胞的增殖、分化和凋亡[45、46]。3.5糖代謝和諧作用地黃低聚糖可明顯降低四氧嘧啶糖尿病大鼠高血糖水平,增加肝糖原含量,減低肝葡萄糖-6-磷酸酶活性。地黃低聚糖對正常大鼠血糖無明顯影響,但可部分預(yù)防葡萄糖及腎上腺素引起的高血糖癥。切斷腎上腺后,地黃低聚糖對葡萄糖性高血糖的預(yù)防作用消失,提示地黃低聚糖不僅可以調(diào)節(jié)實驗性糖尿病的糖代謝紊亂,亦可調(diào)節(jié)生理性高血糖狀態(tài)。生地黃煎劑、浸劑或醇提取物能明顯降低家兔正常血糖和由腎上腺素、氯化銨引起的高血糖,懷地黃根莖的熱水提取物中乙醇沉淀組分,主要由果膠多糖組成,對正常和鏈佐星誘導(dǎo)小鼠的高血糖均有降低作用。地黃中的地黃苷D亦具有降低糖尿病模型小鼠血糖的趨勢。3.6不同給藥劑量對小鼠腦氧化的影響采用Fe2+-半胱氨酸系統(tǒng)誘發(fā)肝微粒體脂質(zhì)過氧化反應(yīng),TBA-熒光法測定丙二醛(MDA)含量,生地水提取物和醇提取物可不同程度地對抗肝微粒體脂質(zhì)過氧化,醇提取物的作用強于水提取物。檢測小鼠腦組織中一氧化氮合酶(NOS)、NO、SOD、LPO,結(jié)果,熟地的氯仿及乙醇提取液均能明顯提高D-半乳糖誘導(dǎo)的衰老模型小鼠腦組織中NOS和SOD活性,使NO含量增加,LPO含量明顯降低,從而發(fā)揮延緩衰老的作用。另有研究表明,懷地黃多糖可明顯拮抗D-半乳糖所致衰老模型小鼠胸腺及脾臟的萎縮,甚至使相關(guān)免疫指標(biāo)如胸腺皮質(zhì)厚度和細(xì)胞數(shù)、脾小結(jié)及淋巴細(xì)胞數(shù)明顯升高,以至超過正常水平,提示懷地黃多糖可能是懷地黃補益抗衰的主要活性成分,其拮抗衰老模型小鼠免疫器官的萎縮、增強免疫的作用可能是其補益抗衰的機制之一。3.7干麻黃提取物a對有水乙醇性胃粘膜損傷大鼠胃粘膜損傷的抑制率有利用幽門結(jié)扎致使大鼠胃酸分泌增多及胃潰瘍形成,干地黃和熟地黃水煎液分別注入胃潰瘍大鼠十二指腸內(nèi),二者均可明顯減少胃液量、總酸度及總酸排出量,且呈一定量效關(guān)系,并能減少胃潰瘍的發(fā)生率和潰瘍數(shù),潰瘍抑制率干地黃為69.6%,熟地黃為89.2%,熟地黃的抑酸作用強于干地黃,采用無水乙醇性胃粘膜損傷模型,觀察干地黃提