實驗指導(dǎo)書(生理學(xué)部分)

實驗項目一：常用實驗動物的基本操作（一）實驗動物的抓握、固定和處死方法1、小鼠抓取固定方法小鼠溫順，一般不會咬人，抓取時先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠籠或?qū)嶒炁_向后拉，在其向前爬行時，用左手拇指和食指抓住小鼠的兩耳和頸部皮膚，將鼠體置于左手心中，把后肢拉直，以無名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。有經(jīng)驗者直接用左手小指鉤起鼠尾，迅速以拇指和食指、中指捏住其耳后頸背部皮膚亦可。這種在手中固定方式，能進行實驗動物的灌胃、皮下、肌肉和腹腔注射以及其他實驗操作。如進行解剖、手術(shù)、心臟采血和尾靜脈注射時，則需將小鼠作一定形式的固定，解剖手術(shù)和心臟采血等均可使動物先取背臥位（必要時先行麻醉），再用大頭針將鼠前后肢依次固定在臘板上。2、小鼠的處死方法可采用頸椎脫臼法。此法是將實驗動物的頸椎脫臼，斷離脊髓致死，為大、小鼠最常用的處死方法。操作時實驗人員用右手抓住鼠尾根部并將其提起，放在鼠籠蓋或其他粗糙面上，用左手拇指、食指用力向下按壓鼠頭及頸部，右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成頸椎脫臼，脊髓與腦干斷離，實驗動物立即死亡。（二）動物血細(xì)胞計數(shù)方法材料和用品（1）器材：細(xì)胞計數(shù)板、細(xì)口滴管、綢布。（2）試劑：0.4％臺盼藍。（3）材料：血細(xì)胞懸液。實驗原理細(xì)胞計數(shù)一般用血細(xì)胞計數(shù)板，按白細(xì)胞計數(shù)方法進行計數(shù)。細(xì)胞計數(shù)時，先將培養(yǎng)細(xì)胞或血細(xì)胞稀釋成細(xì)胞懸液，然后將細(xì)胞懸液滴入細(xì)胞計數(shù)板內(nèi)，計數(shù)計數(shù)板上計數(shù)室四大格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。根據(jù)計數(shù)室的容積及稀釋倍數(shù)，即可計算出細(xì)胞濃度。實驗步驟：圖5－1血細(xì)胞計數(shù)板1．采血及稀釋用1ml移液管吸取0.38ml白細(xì)胞稀釋液放入小試管內(nèi)備用，另用5ml移液管吸取3.98ml紅細(xì)胞稀釋液放入小試管內(nèi)備用。用酒精棉球消毒兔的耳緣靜脈采血部位，用刺血針刺破血管，讓血液自然流出，擦去第一滴血，待流出第二滴血時，用一次性毛細(xì)血管分2次準(zhǔn)確吸取20ul、和20ul，將血液分別吹入盛有白、紅細(xì)胞稀釋液的小試管內(nèi)，用滴管放在試管底部輕輕吹出血液，用上清液沖洗毛細(xì)取血管2～3次，輕輕搖動，使液體充分混勻。2.血細(xì)胞計數(shù)板的結(jié)構(gòu)計數(shù)板是一塊特制的長方形厚玻璃板，板面的中部有4條直槽，內(nèi)側(cè)兩槽中間有一條橫槽把中部隔成二長方形的平臺（圖5-1）。此平臺比整個玻璃板的平面低0.1mm，當(dāng)放上蓋玻片后，平臺與蓋玻片之間距離（即高度）為0.1mm。平臺中心部分各以3mm長，3mm寬精確劃分為9個大方格，稱為計數(shù)室（圖5-3），每個大方格面積為1mm3，體積為0.1mm3。四角的大方格，又各分為16個中方格，適用于白細(xì)胞計數(shù)。中央的大方格則由雙線劃分為25個中方格，每個中方格面積為0.04mm3，體積為0.004mm3。每個中方格又各分成16個小方格，適用于紅細(xì)胞計數(shù)。將蓋玻片放在計數(shù)板正中，用小吸管吸取搖勻的稀釋血液，或者用潔凈的玻璃棒，將一小滴血液滴在蓋玻片邊緣的玻片上，使稀釋血液借毛細(xì)管現(xiàn)象而自動流入計數(shù)室內(nèi)。如滴入過多，溢出并流入兩側(cè)深槽內(nèi)，使蓋玻片浮起，體積改變，會影響計數(shù)結(jié)果，需用濾紙片把多余的溶液吸出，以深槽內(nèi)沒有溶液為宜。如滴入溶液過少，經(jīng)多次充液，易造成氣泡，應(yīng)洗凈計數(shù)室，干燥后重做。紅細(xì)胞和白細(xì)胞的計數(shù)，各使用一計數(shù)室。3．計數(shù)血液稀釋液滴入計數(shù)室后，須靜置2-3min，然后在低倍顯微鏡下計數(shù)。計數(shù)白細(xì)胞時，數(shù)四角4個大方格的白細(xì)胞總數(shù)；計數(shù)紅細(xì)胞時，數(shù)中央大方格的四角的4個中方格和中央的一個中方格（共5個中方格）的紅細(xì)胞總數(shù)。計數(shù)時應(yīng)循一定的路徑，對橫跨刻度上的血細(xì)胞，依照“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右”的原則進行計數(shù)（圖5-2）。計數(shù)白細(xì)胞時，如發(fā)現(xiàn)各大格的白細(xì)胞數(shù)目相差8個以上；計數(shù)紅細(xì)胞時，如各中方格的紅細(xì)胞數(shù)目相差20個以上，表示血細(xì)胞分布不均勻，必須把稀釋液搖勻后重新計數(shù)。圖5-2血細(xì)胞計數(shù)循徑示意圖4．計算白細(xì)胞數(shù)：將4個大方格內(nèi)數(shù)得白細(xì)胞總數(shù)乘以50，即得每mm3血內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)，因為：(1)稀釋液0.38ml加入血20ul，使血液稀釋20倍，換算成未稀釋血時應(yīng)乘以20。(2)計數(shù)四角上4個大方格內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)，其容積為1×1×0.1×4=0.4mm3。換算成每mm3時應(yīng)乘以2.5。這樣把4個大方格內(nèi)數(shù)得的白細(xì)胞總數(shù)乘以50（即20×2.5=50）即為每mm3血內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)。紅細(xì)胞數(shù)：將中央大方格中的5個中方格內(nèi)數(shù)得的紅細(xì)胞總數(shù)乘以10，000，即得每mm3血內(nèi)紅細(xì)胞總數(shù)。因為：(1)稀釋液3.98ml加入血20ul，使血液稀釋200倍，換算成未稀釋血要乘以200。(2)在計數(shù)室內(nèi)只計數(shù)0.02mm3（即1個中方格的容積為0.2×0.2×0.1=0.004mm3，5個中方格的容積為0.004×5=0.02mm3），換算成每mm3時應(yīng)乘以50這樣把5個中方格內(nèi)數(shù)得的紅細(xì)胞總數(shù)乘以10，000（即200×50=10，000）即得每mm3血液內(nèi)的紅細(xì)胞總數(shù)。圖5-3血細(xì)胞計數(shù)板上計數(shù)室的分隔（三）血紅蛋白含量測定的方法實驗原理：實驗采用的氰化高鐵血紅蛋白（HICN）方法是世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦為血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化測定的方法。血紅蛋白是紅細(xì)胞內(nèi)帶氧的色素蛋白，血紅蛋白分子含有四個血紅素和一個珠蛋白，血紅素是一種鐵金屬復(fù)合物，在葉啉環(huán)結(jié)構(gòu)中央有一個鐵原子，血紅素在分子中總量約占4%，并有血紅蛋白紅色。將一定量的全血與氰化高鐵血紅蛋白稀釋液混合后，紅細(xì)胞被溶解，血紅蛋白釋放出高鐵氰化鉀反應(yīng)為高鐵血紅蛋白，再與氰化鉀反應(yīng)為氰化高鐵血紅蛋白，它是一種穩(wěn)定的色素，其濃度與吸光值成正比。通過比色法就可以測定血紅蛋白的含量。實驗操作步驟：1、打開血紅蛋白測定儀的電源進行預(yù)熱30分鐘。2、用移液管取5ml文齊氏液放入試管中備用。3、用酒精棉球消毒手指尖，用消過毒的一次性采血針刺破指尖，用一次性定量毛細(xì)管取血20ul。4、將毛細(xì)取血管中的血吹入試管的稀釋液中，反復(fù)2~3次，充分混勻后放置5~10分鐘后備用。5、儀器調(diào)零和校正：預(yù)熱后，按下測試開關(guān)，重復(fù)三次吸入稀釋液或者蒸餾水調(diào)整調(diào)零旋鈕，使讀數(shù)為“000”按下測試開關(guān)，吸入已知標(biāo)準(zhǔn)值為100g/L的校正液，調(diào)整校正旋鈕，使讀數(shù)顯示值與標(biāo)準(zhǔn)值相同，然后彈出測試開關(guān)。6、測試：將吸液管浸到待測試管中的液體中，按下測試開關(guān)，吸入待測液體，讀取數(shù)字，就為待測液中的血紅蛋白含量。注意：1、吸液過程中避免吸入空氣。2、稀釋液中不要出現(xiàn)沉淀，避免堵塞吸管。3、測試完成后，重復(fù)吸入多次蒸餾水沖洗儀器后再關(guān)閉電源。（四）影響血液凝固的因素【實驗?zāi)康摹勘緦嶒炓园l(fā)生血液凝固的時間為指標(biāo)，向血液中加入或去掉某些因素或改變某些條件(如溫度等)，以觀察對血液凝固的影響?！緦嶒炘怼垦毫鞒鲅芎蠛芸炀蜁?。血液凝固分為內(nèi)源性凝血系統(tǒng)與外源性凝血系統(tǒng)是指在組織因子的參與下血液凝固的過程。本實驗直接從動物動脈放血，由于血液幾乎沒有和組織因子接觸，其凝血過程主要由內(nèi)源性凝血系統(tǒng)所發(fā)動。血液凝固受許多因素的影響，凝血因子可直接影響血液凝固過程。溫度、接觸面的光滑程度等也可影響血液凝固過程?！静牧吓c方法】（一）實驗對象家兔（二）器材藥品小燒杯、帶橡皮刷的玻棒或竹簽(或小號試管刷)、清潔試管10支、秒表、水浴裝置一套、冰塊、棉花、石蠟油、肝素或草酸鉀、生理鹽水。（三）方法與步驟1．動物準(zhǔn)備家兔麻醉后，仰臥固定于兔手術(shù)臺上，行一側(cè)頸總動脈或股動脈插管，備取血用。2．試管的準(zhǔn)備取8支干凈的小試管，按表8-2準(zhǔn)備各種不同的實驗條件。表8-2影響血液凝固的因素實驗條件實驗結(jié)果(凝血時間)不加其它物質(zhì)放棉花少許用石蠟油潤滑試管內(nèi)表面保溫于37冰水中加肝素8單位加草酸鉀1-2mg3．觀察項目(1)取兔動脈血10ml，注入兩個小燒杯內(nèi)，一杯靜置，另一杯用帶有橡皮刷的玻棒或竹簽(也可用小號試管刷)輕輕攪拌，數(shù)分鐘后，玻棒或竹簽上結(jié)成紅色血團。用水沖洗，觀察纖維蛋白形狀。然后比較兩杯的凝血情況。(2)準(zhǔn)備好的每支試管中滴入兔血1ml，觀察血液是否發(fā)生凝固及發(fā)生凝固的時間?！緦嶒灲Y(jié)果】將結(jié)果填入表8-2【注意事項】1．加強分工合作，記時須準(zhǔn)確。最好由一位同學(xué)負(fù)責(zé)將血液加入試管，其它同學(xué)各掌握1-2支試管，每隔半分鐘觀察一次。2．試管、注射器及小燒杯必須清潔、干燥。3．每支試管加入的血液量要力求一致?！疽笈c思考】1．復(fù)習(xí)生理學(xué)教科書有關(guān)血液凝固的基本理論知識。2．弄清楚血液凝固對機體的利弊關(guān)系。3．試分析在本實驗中有哪些因素可能影響實驗結(jié)果？如何克服這些因素？【作業(yè)題】1．肝素和草酸鉀皆能抗凝，其機理一樣嗎？為什么？2．如何加速或延緩血液凝固？試闡明機理。3．分析上述各因素影響凝固時間的機制。4．正常人體內(nèi)血液為什么不發(fā)生凝固？5．如何認(rèn)識纖維蛋白原在凝血過程中的作用？實驗項目二：生理信號采集系統(tǒng)的使用（一）生物信號采集系統(tǒng)的初步使用生物信號采集、處理系統(tǒng)是應(yīng)用大規(guī)模集成電路、計算機硬件和軟件技術(shù)開發(fā)的一種集生物信號的放大、采集、顯示、處理、存儲和分析的電機一體化儀器。該系統(tǒng)可替代傳統(tǒng)的刺激器、放大器、示波器、記錄儀，一機多用，功能強大。廣泛地被應(yīng)用于生理學(xué)、病理學(xué)、藥理學(xué)實驗。

1、計算機生物信號采、集處理系統(tǒng)的基本組成和工作原理

生物信號采集處理系統(tǒng)由硬件和軟件兩大部分組成。硬件主要完成對各種生物電信號(如：心電、肌電、腦電)與非電生物信號(如：血壓、張力、呼吸)的采集。并對采集到的信號進行調(diào)理、放大，進而對信號進行模／數(shù)(A／D)轉(zhuǎn)換，使之進入計算機。軟件主要用來對已經(jīng)數(shù)字化了的生物信號進行顯示、記錄、存儲、處理及打印輸出，同時對系統(tǒng)各部分進行控制，與操作者進行人機對話(下圖)。（1）傳感器和放大器

生物所產(chǎn)生的信息，其形式多種多樣，除生物電信號可直接檢取外，其它形式的生物信號必須先轉(zhuǎn)換成電信號，對微弱的電信號還需經(jīng)過放大，才能作進一步的處理。生物信號采集處理系統(tǒng)中的刺激器和放大器都是由計算機程控的,其工作原理和一般的刺激器、放大器完全一樣。主要的區(qū)別在于一般儀器是機械觸點式切換，而生物信號采集系統(tǒng)是電子模擬開關(guān)，由電壓高低的變化控制，是程序化管理，提高了儀器的可靠性，延長了儀器的壽命。生物信號的采集：計算機在采集生物信號時，通常按照一定的時間間隔對生物信號取樣，并將其轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號后放入內(nèi)存。這個過程稱為采樣。與采樣有關(guān)的參數(shù)包括：通道選擇、采樣間隔、觸發(fā)方式和采樣長度等方面。

①通道選擇：一個實驗往往要記錄多路信號，如心電、心音、血壓等。計算機對多路信號進行同步采樣，是通過一個“多選一”的模擬開關(guān)完成的。在一個很短暫的時間內(nèi)，計算機通過模擬開關(guān)對各路信號分別選通、采樣。這樣，盡管對各路信號的采樣有先有后，但由于這個“時間差”極短暫，因此，仍可以認(rèn)為對各路信號的采樣是“同步”的。

②采樣間隔：原始信號是連續(xù)的，而采樣是間斷進行的。對某一路信號而言，兩個相鄰采樣之間的時間間隔稱為采樣間隔。間隔愈短，單位時間內(nèi)的采樣次數(shù)愈多。采樣間隔的選取與生理信號的頻率也有關(guān)，采樣速率過低，就會使信號的高頻成分丟失。但采樣速率過高會產(chǎn)生大量不必要的數(shù)據(jù)，給處理、存儲帶來麻煩。根據(jù)采樣定律，采樣頻率應(yīng)大于信號最高頻率的2倍。實際應(yīng)用時，常取信號最高頻率的3～5倍來作為采樣速率。

③采樣方式：

采樣通常有連續(xù)采樣和觸發(fā)采樣兩種方式。在記錄自發(fā)生理信號(如心電、血壓)時，采用連續(xù)采樣的方式。而在記錄誘發(fā)生理信號(如皮層誘發(fā)電位)時，常采用觸發(fā)采樣的方式。后者又可根據(jù)觸發(fā)信號的來源分為外觸發(fā)和內(nèi)觸發(fā)。

④采樣長度：在觸發(fā)采樣方式中．啟動采樣后，采樣持續(xù)的時間稱為采樣長度。它一般應(yīng)略長于一次生理反應(yīng)所持續(xù)的時間。這樣既記錄到了有用的波形，又不會采集太多無用的數(shù)據(jù)造成內(nèi)存的浪費。

生物信號的處理：

計算機生物信號采集處理系統(tǒng)因其強大的計算功能，可起到濾波器的功能，而且性能遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過模擬電路，恢復(fù)被噪音所淹沒的重復(fù)性生理信號。人們可以測量信號的大小、數(shù)量、變化程度和變化規(guī)律，如波形的寬度、幅度、斜率、零交點數(shù)等參數(shù)。做進一步的分類統(tǒng)計、分析給出各頻率分能量（如腦電、肌電及心率變異信號）在信號總能量中所占的比重、對信號源進行定位。對實驗結(jié)果可以用計數(shù)或圖形方式輸出。對來自攝像機或掃描儀的圖像信息經(jīng)轉(zhuǎn)換后，也可輸入計算機進行分析。所以計算機生物信號采集處理系統(tǒng)，不僅具備了刺激器、放大器、示波器、記錄儀和照相機等儀器的記錄功能外，而且還兼有微分儀、積分儀、觸發(fā)積分儀、頻譜分析儀等信號分析儀器的信息處理功能。為節(jié)省存儲空間，計算機可對其獲得的數(shù)據(jù)可按一定的算法進行壓縮。

動態(tài)模擬：

通過建立一定的數(shù)學(xué)模型。計算機可以仿真模擬一些生理過程。例如激素或藥物在體內(nèi)的分布過程、心臟的起搏過程、動作電位的產(chǎn)生過程等均可用計算機進行模擬。除過程模擬外，利用計算機動畫技術(shù)還可在熒光屏上模擬心臟泵血、胃腸蠕動、尿液生成、興奮的傳導(dǎo)等生理過程。

2、計算機生物信號采集、處理系統(tǒng)的基本操作

掌握實驗的一般流程、配置實驗和刺激參數(shù)設(shè)置方法是我們用好生物信號采集系統(tǒng)的關(guān)鍵。

(1)進入系統(tǒng)，選擇通道：確定信號輸入到哪個通道，以打“對勾”表示。(2)刺激方式的選擇:根據(jù)實驗的需要確定是否需要刺激。一般可有7種刺激方式可被選擇。

(3)選擇輸入方式：根據(jù)生物信號的性質(zhì)：是非電信號（如骨骼肌張力、血壓、呼吸道壓力、心肌收縮力、腸肌張力等）還是電的信號（如神經(jīng)干動作電位、心電、神經(jīng)放電、腦電等），確定是否需要換能器。

(4)交/直流的選擇根據(jù)生物信號是快信號（如神經(jīng)干動作電位、心室肌動作電位、神經(jīng)放電等）還是慢信號（如血壓、呼吸、心電、平滑肌張力等）確定以何種電流輸入。一般電信號選擇交流輸入，非電信號經(jīng)換能后選擇直流輸入。來自另外的前置放大器的輸入信號，采用直流輸入的方式（如經(jīng)微電極放大器后的心室肌動作電位信號）?？捎梅糯笃鞯臅r間常數(shù)進行選擇（或有專門的開關(guān)）。

(5)放大器放大倍數(shù)的選擇：采樣卡的有效采樣電壓一般位+/-5V。所以輸入信號的強度一般不能超過5V，根據(jù)信號的強弱選擇適當(dāng)?shù)姆糯蟊稊?shù),在不溢出的前提下,放大倍數(shù)選大一些為好。

(6)濾波選擇：根據(jù)是否需要濾波確定高頻濾波和時間常數(shù)，使采樣在最好的波段中進行。

(7)選擇顯示模式：用計算機生物信號采集、處理系統(tǒng)進行實驗時有兩種顯示模式的選擇：一類為快捷（或標(biāo)準(zhǔn)）方式，系統(tǒng)內(nèi)提供了許多常規(guī)的生理、病理、藥理專項實驗方法，所配置及標(biāo)定的參數(shù)都已提供在每一專項實驗選項中。因此只要進入系統(tǒng)，激活實驗菜單，選擇具體的實驗項目，即可按照標(biāo)準(zhǔn)實驗內(nèi)容做好各項配置、標(biāo)定而進行實驗。另一類是一般性（或通用）方式，適用于科研與特殊教學(xué)實驗，可根據(jù)需要不斷改變系統(tǒng)參數(shù)（進行顯示設(shè)置），使采集的波形更好，更適合于觀察及符合實驗結(jié)果。(8)采樣間隔選擇：注意采樣間隔與所采信號相匹配。采樣間隔調(diào)控的合適值應(yīng)多試幾次，以求最好。

(9)采樣

進入實驗項目（通道采樣內(nèi)容）從1～4通道輸入生理信號并選擇希望進行的實驗項目，點擊開始按鈕，系統(tǒng)開始采樣，采樣窗中即有掃描線出現(xiàn)，并隨外部信號變化，顯示起伏波形。

注意：如果在觸發(fā)方式中選定了刺激器觸發(fā)，則應(yīng)當(dāng)在主界面中點擊“刺激”按鈕啟動刺激器，即可開始同步采樣。

(10)實時調(diào)整采樣參數(shù)：為使采樣波形達到最好——即最有利于觀察的狀態(tài)，可以在采樣過程中,實時調(diào)節(jié)各部分。(11)結(jié)束采樣

點擊采樣結(jié)束按鈕結(jié)束采樣，全部結(jié)果數(shù)據(jù)以圖形方式顯示在各自的窗口，可移動X方向棍條從頭到尾觀察所有的圖形。并可拖選圖形進行觀測量、進入表格、打印等后處理。

(12)設(shè)置存盤

如果本次實驗成功，所選的設(shè)置參數(shù)合理，可將本設(shè)置以自定義文件名存盤。

3、刺激器的設(shè)置

(1)刺激的基本方式：

最基本的刺激方式有三種：

①單刺激，與普通刺激器一樣，輸出(數(shù)次)單個方波刺激，延時、波寬、幅度可調(diào)?？捎糜诠趋兰问湛s、心肌期前收縮等實驗。

②串刺激，相當(dāng)于普通刺激器的復(fù)刺激，但刺激持續(xù)時間由程序控制。啟動串刺激后，到達串長的時間，刺激器自動停止刺激輸出。串刺激的延時（即普通復(fù)刺激的串間隔）、串長、波寬、幅度、頻率可調(diào)。刺激降壓神經(jīng)、迷走神經(jīng)和強直收縮等實驗可采取此種刺激方式。

③主周期刺激，與普通刺激器相比，此種刺激方式是將幾個刺激脈沖組成一個刺激周期看待，于是有了主周期和周期數(shù)概念。主周期，每個周期所需要的時間。周期數(shù)：重復(fù)每一個周期的次數(shù)（即主周期數(shù)）。每個主周期下又有①延時、②波寬、③波幅、④波間隔、⑤脈沖數(shù)(詳見刺激器部分)，這些參數(shù)都是可調(diào)的。有了這些可調(diào)參數(shù)，可輸出多種刺激形式。如周期數(shù)為

1脈沖數(shù)也為1，表示重復(fù)1次主周期，主周期中只有一個脈沖，相當(dāng)于單刺激。周期數(shù)是連續(xù)、脈沖數(shù)是1，即不斷重復(fù)主周期，而且主周期內(nèi)只有1個脈沖刺激，這相當(dāng)于復(fù)刺激。周期數(shù)是連續(xù)、脈沖數(shù)是2，即不斷重復(fù)主周期，而且主周期內(nèi)有2個脈沖刺激，這相當(dāng)于雙脈沖刺激……。

(2)專用刺激方式：為了便于實驗，在上述刺激方式的基礎(chǔ)上還可以選擇下述4種刺激方式。

①自動間隔調(diào)節(jié)：在主周期刺激基礎(chǔ)上自動增、減脈沖間隔，默認(rèn)的脈沖數(shù)為2。主要用于不應(yīng)期的測量。主周期、延時、波寬、波幅、首間隔、增量可調(diào)。

②自動幅度調(diào)節(jié)：在主周期刺激基礎(chǔ)上自動增、減脈沖的幅度。主要用于閾強度的測定。主周期、延時、波寬、初幅度、增量、脈沖數(shù)、間隔可調(diào)。

③自動波寬調(diào)節(jié)：在主周期刺激基礎(chǔ)上自動增、減脈沖的波寬。主要用于時間-強度曲線的測定。主周期、延時、波幅、頻率、首波寬、增量可調(diào)。

④自動頻率調(diào)節(jié)：在串刺激基礎(chǔ)上對刺激脈沖的頻率自動增、減。主要用于單收縮，強直收縮，膈肌張力與刺激頻率的關(guān)系等實驗。串長、波寬、波幅、首頻率、增量、串間隔可調(diào)。

4、換能器定標(biāo)

換能器是將非電生物信號轉(zhuǎn)換為電信號的裝置。由于制造時采用的部件不同及相同部件參數(shù)存在誤差，所以每一個換能器在轉(zhuǎn)換非生物信號時都不可能完全一致（即同樣強度的能量經(jīng)不同打的換能器轉(zhuǎn)換的電壓值不可能絕對一致）。因此，為了準(zhǔn)確地反應(yīng)實驗結(jié)果，就有必要在實驗前對換能器進行校驗，使之盡量減少誤差，保證實驗結(jié)果的真實性和準(zhǔn)確性。各種換能器標(biāo)定的原理一致，僅是裝置有所不同。定標(biāo)包括調(diào)零和標(biāo)定。

(1)調(diào)零:選定“調(diào)零”命令之后,可使系統(tǒng)在輸入端懸空時,偏離基線(紅色0校準(zhǔn)線)的直流輸入信號波形回到基線位置。(2)定標(biāo):

選定“定標(biāo)”命令之后，給換能器一個固定值的標(biāo)準(zhǔn)的信號，再將其固定值輸入系統(tǒng)，以更改原數(shù)值。今后將跟隨該通道實驗名稱一起調(diào)用。（二）藥物對血壓及心率的影響——錄像（三）蛙心起搏點觀察實驗原理心臟的特殊傳導(dǎo)系統(tǒng)具有自動節(jié)律性，但各部分的自動節(jié)律性高低不同。兩棲類動物的心臟起搏點是靜脈竇(哺乳動物的是竇房結(jié))。正常情況下，靜脈竇（竇房結(jié)）的自律性最高，能自動產(chǎn)生節(jié)律性興奮，并依次傳到心房、房室交界區(qū)、心室，引起整個心臟興奮和收縮，因此靜脈竇（竇房結(jié)）是主導(dǎo)整個心臟興奮和搏動的正常部位，被稱為正常起搏點；其他部位的自律組織僅起著興奮傳導(dǎo)作用，故稱之為潛在起搏點。實驗條件蛙或蟾蜍，任氏液，蛙板，蛙類常用手術(shù)器械一套，蛙釘，玻璃分針，秒表，滴管。實驗步驟1．暴露心臟取蟾蜍一只，雙毀髓后背位固定于蛙板上。左手持手術(shù)鑷提起胸骨后方的皮膚，右手持金冠剪剪開一個小口，然后將剪刀由開口處伸入皮下，向左、右兩側(cè)下頜角方向剪開皮膚。將皮膚掀向頭端，再用手術(shù)鑷提起胸骨后方的腹肌，在腹肌上剪一口，將金冠剪緊貼胸壁伸入胸腔（勿傷及心臟和血管），沿皮膚切口方向剪開胸壁，剪斷左右烏喙骨和鎖骨，使創(chuàng)口呈一倒三角形。左手持眼科鑷，提起心包膜。右手用眼科剪刀剪開心包膜，暴露心臟。2．觀察心臟的結(jié)構(gòu)從心臟的腹面可看到一個心室，其上方有兩個心房，房室之間有房室溝。心室右上方有一動脈圓錐，是動脈根部的膨大。動脈干向上分成左右兩分支。用蛙心夾夾住少許心尖部肌肉，輕輕提起蛙心夾，將心臟倒吊，可以看到心臟背面有節(jié)律搏動的靜脈竇（圖11-1）。在心房與靜脈竇之間有一條白色半月形界線，稱為竇房溝。前、后腔靜脈與左、右肝靜脈的血液流入靜脈竇。3．觀察心搏過程仔細(xì)觀察靜脈竇、心房及心室收縮的順序和頻率。在主動脈干下方穿一條線，將心臟翻向頭端，看準(zhǔn)竇房溝，沿竇房溝作一結(jié)扎，稱為斯氏第一結(jié)扎。觀察心臟各部分搏動節(jié)律的變化，用秒表計數(shù)每分鐘的搏動次數(shù)。待心房和心室恢復(fù)搏動后，計數(shù)其搏動頻率。然后在房室交界處穿線，準(zhǔn)確地結(jié)扎房室溝，稱為斯氏第二結(jié)扎。待心室恢復(fù)搏動后，計數(shù)每分鐘心臟各部分的搏動次數(shù)。將實驗結(jié)果以表格形式列出。4.觀察蛙類心臟收縮與電興奮的關(guān)系（1）打開計算機采集系統(tǒng)，接通張力傳感器輸入通道。（2）取一只蟾蜍，暴露心臟。用蛙心夾夾住心尖部，將蛙心夾上的系線繞過滑輪與張力傳感器相連。調(diào)節(jié)滑輪位置，使心臟不離開體腔且能記錄心搏曲線。調(diào)節(jié)掃描速度與心搏曲線的幅度適中。（3）將引導(dǎo)心電的兩個電極夾，分別夾住刺入上下肢皮下的針形電極。接通動物心電輸入通道，觀察心電信號。如果信號不大，可調(diào)節(jié)顯示器增益，直到出現(xiàn)明顯的心電圖信號。（4）調(diào)節(jié)兩個通道的掃描速度一致。用比較顯示方式，仔細(xì)觀察心電圖的P波與心房收縮波、QRS波群與心室收縮波在時間上的相關(guān)性?！舅伎碱}】根據(jù)實驗結(jié)果，分析心電圖相應(yīng)波形早于心臟收縮及各間期的意義？圖8-1蟾蜍心臟背面觀（四）蛙類神經(jīng)肌肉標(biāo)本的制備方法雙毀髓的方法左手握蟾蜍（一般可用紗布包住蟾蜍軀干部），背部向上。用食指按壓其頭部前端，拇指壓住軀干的背部，使頭向前俯；右手持毀髓針，由兩眼之間沿中線向后方劃觸，觸及兩耳后腺之間的凹陷處即是枕骨大孔的位置。將毀髓針由凹陷處垂直刺入，即可進入枕骨大孔。然后將針尖向前刺圖1-1破壞蛙的腦和脊髓入顱腔，在顱腔內(nèi)攪動，以搗毀腦組織。如毀髓針確在顱腔內(nèi)，實驗者可感到針觸及顱骨。此時的動物為單毀髓動物。再將毀髓針退至枕骨大孔，針尖轉(zhuǎn)向后方，與脊柱平行刺入椎管，以搗毀脊髓。徹底搗毀脊髓時，可看到蟾蜍后肢突然蹬直，然后癱軟。此時的動物為雙毀髓動物。如動物仍表現(xiàn)四肢肌肉緊張或活動自如，必須重新毀髓。操作過程中應(yīng)注意使蟾蜍頭部向外側(cè)（不要擠壓耳后腺），防止耳后腺分泌物射入實驗者眼內(nèi)（如被射入，則立即用生理鹽水沖洗眼睛）。2．剝制后肢標(biāo)本方法有兩種。(1)將雙毀髓的蟾蜍背面向上放入蠟盤中。左手持手術(shù)鑷輕輕提起兩前肢之間背部的皮膚，右手持手術(shù)剪橫向剪開皮膚，暴露耳后腺后緣水平的脊柱。用金冠剪橫向剪斷脊柱。左手持手術(shù)鑷提起斷開的脊柱后端，右手用金冠剪沿脊柱兩側(cè)剪開體壁，再剪斷下腹壁肌肉，自基部剪斷內(nèi)臟。然后用蘸有任氏液的左手捏住斷開的脊柱后端，右手向后方撕剝皮膚，同時棄其頭部及內(nèi)臟。將剝干凈的后肢放入盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。清洗手及手術(shù)器械上的污物。(2)將雙毀髓的蟾蜍腹面向上放入蠟盤中，左手持手術(shù)鑷輕輕提起腹壁皮膚，右手持手術(shù)剪將皮膚剪開，再剪開腹壁肌肉。然后用手術(shù)鑷輕輕提起內(nèi)臟，自基部剪斷（勿傷脊神經(jīng)）。左手輕輕托起蟾蜍后肢，使頭部及內(nèi)臟向下，看清支配后肢的脊神經(jīng)發(fā)出部位，于其前方剪斷脊柱。剝皮的操作方法同(1)。注意操作過程中不可將剝皮的標(biāo)本同皮膚、內(nèi)臟等棄物放在一起。圖1－2剝?nèi)ズ笾つw的方法3．分離兩后肢將去皮的后肢腹面向上置于玻璃板上，脊柱端在左側(cè)。用左手拇指及食指壓住標(biāo)本的股部兩側(cè)肌肉，右手持手術(shù)刀于恥骨聯(lián)合處向下按壓刀刃，切開恥骨聯(lián)合。然后用金冠剪剪開兩后肢相連的肌肉組織，并縱向剪開脊柱（尾桿骨留在一側(cè)），使兩后肢完全分離。也可不用手術(shù)刀切開恥骨聯(lián)合，而用左手托起標(biāo)本，右手持金冠剪直接剪開恥骨聯(lián)合。注意：操作要十分小心，切勿剪斷坐骨神經(jīng)。將分開的后肢，一只繼續(xù)剝制標(biāo)本，另一只放入任氏液中備用。4．分離坐骨神經(jīng)將一側(cè)后肢的脊柱端腹面向上，趾端向外側(cè)翻轉(zhuǎn)，使其足底朝上，用固定針將標(biāo)本固定在玻璃板下面的蛙板（木板或硬泡沫塑料板）上。先在腹腔面用玻璃分針沿脊柱游離坐骨神經(jīng)，然后在標(biāo)本的背側(cè)于股二頭肌與半膜肌的肌肉縫內(nèi)將坐骨神經(jīng)與周邊的結(jié)締組織分離直到腘窩，但不要傷及神經(jīng)，其分支待以后用手術(shù)剪剪斷。同樣用玻璃分針將腓腸肌與其下的結(jié)締組織分離并在其跟腱處穿線、結(jié)扎。5.剪去其它不用的組織

操作從脊柱向小腿方向進行。

（1）剪去多余的脊柱和肌肉

將后肢標(biāo)本腹面向上，將坐骨神經(jīng)連同2～3節(jié)脊椎用粗剪刀從脊柱上剪下來。再將標(biāo)本背面向上，用鑷子輕輕提起脊椎，自上而下剪去支配腓腸肌以外的神經(jīng)分支，直至腘窩，并搭放在腓腸肌上。沿膝關(guān)節(jié)剪去股骨周圍的肌肉，并將股骨刮凈，用粗剪刀剪去股骨上端的1/3（保留2/3），制成坐骨神經(jīng)-小腿的標(biāo)本。圖1－3圖1－3（2）完成坐