ki-67、p53蛋白在乳腺癌及癌旁組織中的表達(dá)及意義

ki-67、p53蛋白在乳腺癌及癌旁組織中的表達(dá)及意義

乳腺癌是一種嚴(yán)重的女性疾病。近年來。雖然在早期診斷和治療方面取得一定的進(jìn)展,但其死亡率仍無明顯下降。分子生物學(xué)研究表明,乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多基因多階段的變化過程,是由遺傳因素和環(huán)境因素聯(lián)合作用而引起的疾病。Ki-67是細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白,僅在增殖細(xì)胞中表達(dá),被認(rèn)為是較理想的檢測(cè)細(xì)胞增殖活性的指標(biāo),野生型p53是抑癌基因,人類許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展都與其突變有關(guān)。本研究采用免疫組化方法檢測(cè)乳腺癌中Ki-67、p53蛋白的表達(dá),并分析其與臨床病理因素的關(guān)系及兩者的相關(guān)性。1材料和方法1.1患者和患者背景收集2005年1月-2008年5月手術(shù)切除的80例乳腺癌根治術(shù)后組織標(biāo)本,均經(jīng)術(shù)后病理確診為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌?；颊吣挲g31~72歲,中位年齡55歲,術(shù)前均未接受過放療、化療等抗癌治療,按照2004年國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期。實(shí)驗(yàn)選用腫瘤組織及遠(yuǎn)離腫瘤邊緣>2cm的癌旁組織,標(biāo)本取材后用4%中性甲醛固定,組織石蠟處理,常規(guī)石蠟切片。1.2高溫高壓修復(fù)試驗(yàn)采用S-P免疫組化法染色,所有試劑及S-P試劑盒均購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司,試驗(yàn)步驟按說明書進(jìn)行,檸檬酸緩沖液高溫高壓修復(fù),DAB顯色,蘇木精復(fù)染,以已知Ki-67和p53陽性切片作陽性對(duì)照,以PBS液代替一抗作陰性對(duì)照。1.3陽性細(xì)胞比例Ki-67、p53、ER和PR陽性,細(xì)胞呈棕黃色,核著色,每張切片選取3個(gè)高倍視野,顯微鏡下計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞中的陽性細(xì)胞,其百分率的平均值為標(biāo)記指數(shù),陽性細(xì)胞比例分為:陽性細(xì)胞數(shù)<10%為陰性;陽性細(xì)胞數(shù)10%~25%為弱陽性;陽性細(xì)胞數(shù)26%~50%為陽性;陽性細(xì)胞數(shù)>50%為強(qiáng)陽性,陽性結(jié)果呈棕黃色或棕褐色顆粒。C-erbB-2陽性細(xì)胞為膜著色,每張切片選取3個(gè)高倍視野,顯微鏡下計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞中的陽性細(xì)胞,其百分率的平均率為標(biāo)記指數(shù),陽性細(xì)胞比例分為>10%為陽性,其中著色弱且不連續(xù)為弱陽性,著色中等部分不連續(xù)為陽性,著色強(qiáng)且連續(xù)為強(qiáng)陽性。1.4數(shù)據(jù)處理與分析采用SPSS11.5ForWindows統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,采用Chi-square檢驗(yàn)和Spearman等級(jí)相關(guān)分析,P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1改性罪犯,84%,84%,65/80乳腺癌組織中Ki-67、p53蛋白總陽性表達(dá)率分別為63.8(51/80)、68.8%(55/80)(圖1,2)。乳腺癌旁組織中Ki-67、p53蛋白總陽性表達(dá)率分別為8.8(7/80)、11.3%(9/80),Ki-67、p53表達(dá)率在乳腺癌與癌旁組織中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表1)。2.2ki-67和p53蛋白與乳腺癌的臨床病理特性之間的關(guān)系見表22.3ki-67與p53蛋白的關(guān)系見表33ki-66與乳腺癌Ki-67抗原是目前多種惡性腫瘤尤其是乳腺癌研究中的熱門指標(biāo),是一種定位于細(xì)胞核、半衰期短、與細(xì)胞增殖相關(guān)的蛋白,僅在增殖細(xì)胞核中表達(dá),其功能被認(rèn)為與染色質(zhì)相連及細(xì)胞的有絲分裂密切相關(guān)。其在G1后期開始出現(xiàn),S、G2期升高,M期達(dá)高峰,在G0期無表達(dá),半衰期為1小時(shí)或更短。Niewiadomska等報(bào)道Ki-67的表達(dá)與乳腺腫瘤的生長(zhǎng)和浸潤(rùn)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間存在密切相關(guān)性,李梅等采用免疫組化S-P法檢測(cè)60例乳腺癌組織,60例癌旁乳腺正常組織中survivin、p53、Ki-67的表達(dá)。結(jié)果p53和Ki-67在乳腺癌組織中表達(dá)高于癌旁組織,并與乳腺癌病理分級(jí)、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。通過Ki-67抗原的檢測(cè),可以了解惡性腫瘤的細(xì)胞增殖活性,是乳腺癌重要的增殖指標(biāo)。本研究顯示80例乳腺癌組織中Ki-67蛋白陽性表達(dá)率為63.8%,高于癌旁乳腺組織8.8%(P<0.05),其表達(dá)與分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、C-erbB-2表達(dá)相關(guān)。其中分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與腫瘤細(xì)胞增殖活性密切相關(guān),而C-erbB-2參與調(diào)控乳腺腫瘤的細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化,可能在乳腺腫瘤發(fā)生、發(fā)展中,Ki-67和C-erbB-2存在著某種關(guān)系。因此,Ki-67表達(dá)不僅迅速反映乳腺癌細(xì)胞的增殖率,還與乳腺癌的發(fā)展、轉(zhuǎn)移有關(guān),Ki-67表達(dá)的高低對(duì)評(píng)價(jià)細(xì)胞的增殖狀態(tài)、研究腫瘤的生物學(xué)行為及判斷其危害性具有重要意義。P53基因是人類腫瘤中最頻繁突變的抑癌基因,有野生型和突變型兩種亞型,有關(guān)其與乳腺癌的關(guān)系已有諸多報(bào)道。p53在正常細(xì)胞中表達(dá)量極低,但是當(dāng)細(xì)胞受到低氧、紫外線照射、化合物刺激等反應(yīng)后表達(dá)量快速急劇增加并被激活,由于含有一段序列專一性DNA轉(zhuǎn)錄結(jié)合序列,作為轉(zhuǎn)錄因子,p53可調(diào)節(jié)大量靶基因的表達(dá),從而影響細(xì)胞周期阻滯、凋亡、分化、靜息、DNA損傷、血管生成和轉(zhuǎn)移的抑制以及其他功能。當(dāng)P53基因發(fā)生突變,便失去了對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡、DNA修復(fù)等的調(diào)控作用,因而由抑癌基因轉(zhuǎn)變?yōu)榘┗?。在正常組織細(xì)胞中,p53蛋白的半衰期很短,濃度很低,而腫瘤細(xì)胞中有突變p53蛋白,其穩(wěn)定性強(qiáng),大量積聚,可用免疫組化法測(cè)出,多種腫瘤和癌前病變中存在P53基因突變和蛋白表達(dá)。檢測(cè)P53基因的突變有可能成為判斷Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌預(yù)后的指標(biāo)。p53陽性表達(dá)與乳腺癌的復(fù)發(fā)和預(yù)后有關(guān)聯(lián),p53陽性表達(dá)提示患者有復(fù)發(fā)和預(yù)后不良的潛能。本研究顯示p53蛋白在乳腺癌和癌旁組織中表達(dá)分別為68.8%、11.3%,兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。p53蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、C-erbB-2表達(dá)相關(guān),說明p53蛋白表達(dá)水平與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。這一結(jié)果與董桂蘭等研究54例乳腺癌患者有25例p53表達(dá)陽性,陽性表達(dá)率46%,陽性表達(dá)與腫瘤大小有關(guān),而與年齡、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等不相關(guān)的報(bào)道有差異。p53蛋白和C-erbB-2同時(shí)表達(dá)陽性,可能使細(xì)胞增生失去控制,潛在的腫瘤細(xì)胞受到激發(fā),從而導(dǎo)致惡性腫瘤的出現(xiàn)。有資料顯示,C-erbB-2和