啤酒生產(chǎn)中常見(jiàn)厭氧菌的檢測(cè)與分析

啤酒生產(chǎn)中常見(jiàn)厭氧菌的檢測(cè)與分析

1分析厭氧菌的潛在活動(dòng),培養(yǎng)農(nóng)村菌培養(yǎng)基1、細(xì)菌；2、特殊厭氧菌；3、選擇性好氧菌或選擇性厭氧菌。目前我們所進(jìn)行的試驗(yàn)菌是專性厭氧菌或兼性厭氧菌。在啤酒生產(chǎn)中常見(jiàn)的污染細(xì)菌有:乳酸菌、足球菌、醋酸桿菌、醋酸單胞菌、發(fā)酵單胞菌、多變黃桿菌、大腸菌群等。其中厭氧或兼性厭氧的細(xì)菌有巴氏乳酸桿菌、足球菌、發(fā)酵單胞菌、大腸菌群……。啤酒中的大多數(shù)厭氧菌是潛在危害菌,使啤酒產(chǎn)生雙乙酰,變酸,引起酒液渾濁、失光、變味以及發(fā)酵變性等等。我們要檢查出這些有害厭氧菌,尋找有害厭氧菌的最適培養(yǎng)基。按微生物培養(yǎng)基的用途,培養(yǎng)基可分為四類:1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基;2、鑒別培養(yǎng)基;3、增殖培養(yǎng)基;4選擇培養(yǎng)基。我們所用的既是增殖培養(yǎng)基,又是選擇性培養(yǎng)基。2ph值和氧化還原電位對(duì)菌體生長(zhǎng)的影響2.1營(yíng)養(yǎng)成分的恰當(dāng)配比:一般微生物的碳∶氮=5∶1,厭氧菌必須有充足碳源,才能良好生長(zhǎng),還要有適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)素。2.2滲透壓:培養(yǎng)基內(nèi)各種元素離子的比例需要平衡,濃度過(guò)高,滲透壓大,抑制微生物的生長(zhǎng);濃度偏低,生長(zhǎng)就緩慢,世代時(shí)間長(zhǎng)。2.3pH值:每種菌體均有各自的最適pH值范圍,而厭氧菌的最適pH值約4～6。pH值太高或太都不利于細(xì)菌的生長(zhǎng)。為此在配制培養(yǎng)基時(shí)加入緩沖溶液或調(diào)節(jié)pH值。2.4氧化還原電位:一般的好氧細(xì)菌或兼性好氧菌氧化還原電位對(duì)它們影響不大,但對(duì)專性厭氧菌有較大的毒害作用。因此在培養(yǎng)厭氧菌時(shí),制造無(wú)氧環(huán)境是非常重要的。3材料2.3次1、高壓鍋1臺(tái)2、干燥箱1臺(tái)3、培養(yǎng)箱1臺(tái)4、厭氧罐1只5、厭氧藥1袋6、厭氧催化劑1包7、厭氧指示劑1根8、1ml移液管數(shù)根9、1000ml燒杯1個(gè)10、1000ml容量瓶1個(gè)11、500ml三角瓶數(shù)個(gè)12、棉塞數(shù)團(tuán)13、培養(yǎng)基5種14、培養(yǎng)血數(shù)個(gè)4培養(yǎng)基的配制4.1MH1培養(yǎng)基配方:酵母膏10g放線菌酮20g(進(jìn)口)葡萄糖10g清酒900ml(原濃10°P)醋酸鈉24g瓊脂20g抗壞血酸加至2g去離子水加至1000mlpH5.0MH1培養(yǎng)基配制方法:將酵母膏、葡萄糖、醋酸鈉、抗壞血酸、放線菌酮按配方量稱準(zhǔn)后放入1000ml燒杯中,加入適量清酒,攪拌使之溶解。待全部溶解后,加入剩余清酒,再用HCL調(diào)節(jié)pH值至5.0,最后用蒸餾水定容1000ml。分裝三角瓶,按2%比例加入瓊脂,用高壓鍋在121°C高壓殺菌30min,冷卻備用。4.2MH2培養(yǎng)基配方:酵母膏5g麥芽汁100ml(11%Bx)KH2PO40.5gCaCl20.15gKCL0.4gFeCl0.05g放線菌酮20mg瓊脂20g加水至1000mlpH5.0MH2培養(yǎng)基的配制方法,將以上各配料稱好收入1000ml燒杯中,邊加熱邊攪拌,待全部溶解,冷至室溫,調(diào)節(jié)pH5.0,定容1L,分裝三角瓶。按2%比例加入瓊脂,包扎好,用高壓鍋在121°C高壓下殺菌30min,冷卻備用。4.3MH3培養(yǎng)基配方:番茄汁100ml蛋白胨20g酵母膏10g泛酸鈣2.0g檸檬酸1.1gMgSO040.2gMnSO40.01gFeSO40.5g吐溫800.5g溴甲酚綠0.022gK2HPO40.5gKH2PO40.5g加水至1000mlpH5.0瓊脂20g放線菌酮20mg(進(jìn)口)MH3培養(yǎng)基的配制方法:在適量的熱水中溶解K2HPO4和KH2PO4。隨后逐一按順序溶解番茄汁,蛋白胨、酵母膏、泛酸鈣、檸檬酸,邊加熱邊攪拌,溶解最后加入微量元素,調(diào)節(jié)pH值5.0,定容1L。分裝三角瓶后,按2%比例加入瓊脂,用高壓鍋在121°C高壓殺菌30min,冷卻備用。4.4MH4培養(yǎng)基配方:牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl5g放線菌酮20mg瓊脂20g加水至1000mlpH7.2MH4培養(yǎng)基的配制方法:將牛肉膏、蛋白胨、NaCl、放線菌酮按配方稱量,放入燒杯中加入適量的熱水,邊加熱邊攪拌溶解,待全部溶解后冷卻至室溫,調(diào)節(jié)pH7.2,定容1L。分裝三角瓶后,按2%比例加入瓊脂,用高壓鍋在121°C高壓殺菌30min,冷卻備用。4.5MH5培養(yǎng)基配方:酵母膏5.0g葡萄糖20g瓊脂20g放線菌酮20mg(進(jìn)口)加水至1000mlpH4.8MH5培養(yǎng)基的配制方法:按配方量準(zhǔn)確稱取酵母膏、葡萄糖、放線菌酮,用適量水溶解,調(diào)節(jié)pH4.8,定容1L,分裝三角瓶后,按2%比例加入瓊脂,用牛皮紙包扎,用高壓鍋在121°C高壓殺菌30min,冷卻備用。5專性厭氧/兼性厭氧微生物培養(yǎng)5.1原理:利用選擇性培養(yǎng)基,將待測(cè)樣品接入制成平板的培養(yǎng)基中,將培養(yǎng)皿放入?yún)捬豕迌?nèi),割開(kāi)厭氧藥按指定位置放入罐內(nèi),放入一支厭氧指示劑、一包厭氧催化劑。當(dāng)罐內(nèi)加入10ml水時(shí),使罐內(nèi)產(chǎn)生氫氣,在催化劑作用下發(fā)生化學(xué)反應(yīng),生成水,而使罐內(nèi)形成無(wú)氧狀態(tài),滿足專性厭氧或兼性厭氧微生物生長(zhǎng)條件,在27～30°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)5～7d。5.2操作步驟:5.2.1對(duì)所需儀器及培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。5.2.2取污染殺菌的發(fā)酵液作為試驗(yàn)樣液5.2.3取培養(yǎng)皿若干個(gè),分別做好編號(hào),用1ml的移液管吸取待測(cè)樣于培養(yǎng)皿中。5.2.4將已熔化的培養(yǎng)基(溫度約為45±2°C)倒入已有樣液的培養(yǎng)皿中,立即搖勻。5.2.5將凝固后的培養(yǎng)皿倒扣于厭氧罐中,取一袋厭氧藥(BBLGaspakAnaerobicSystemEnvelopes)和一支厭氧指示劑、厭氧催化劑,剪開(kāi)厭氧藥袋,加入10ml水,立即蓋上蓋子,在27°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6d。6見(jiàn)表17培養(yǎng)基的乳酸菌選擇7.1從以上5種培養(yǎng)基試驗(yàn)結(jié)果情況看,除MH4沒(méi)有厭氧菌落外,其余均有數(shù)量不等的菌落,說(shuō)明MH4培養(yǎng)基不適合厭氧菌生長(zhǎng)。主要原因是MH4培養(yǎng)基碳源不足。7.2雖然MH3長(zhǎng)得菌落數(shù)多而大,但僅能檢出乳酸菌,足球菌未能檢出。原因是足球菌世代時(shí)間長(zhǎng),需更長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)。7.3MH1培養(yǎng)基和MH2培養(yǎng)基的乳酸菌落基本相同。說(shuō)明這兩種乳酸菌的選擇性培養(yǎng)基所選擇的乳