顯齒蛇葡萄中總黃酮和二氫楊梅素的含量測(cè)定

顯齒蛇葡萄中總黃酮和二氫楊梅素的含量測(cè)定

野生蛇是屬于葡萄科的蛇科植物。它是屬于梅科可達(dá)亞科的。w.t.旺[a.kon]a.phl。var.g洛斯代達(dá).maoye]還有甜茶藤、天竺葵、兔子、紅五爪金龍、牙蛇等。主要分布在湖南、湖北、廣西、廣東、云南、貴州、江西、福建等省區(qū)。我國(guó)廣西和湖南等省區(qū)壯族和瑤族人民常用莖葉作飲料。味甘淡,性涼,具有清熱解毒,祛風(fēng)濕,強(qiáng)筋骨之功效,主治皮膚癬癩,黃疸型肝炎,感冒風(fēng)熱,咽喉腫痛,急性結(jié)膜炎,癰癤。經(jīng)初步化學(xué)研究,藤茶中主要有效成分為黃酮類化合物,從中分得二氫楊梅素,經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)表明,具有明顯拮抗去甲腎上腺素和高K+所致的兔胸主動(dòng)脈條收縮反應(yīng)及鈣拮抗作用,且毒性低,可作為抗心律失常、抗心肌缺血、抗高血壓的新型藥物。本文對(duì)顯齒蛇葡萄中總黃酮及二氫楊梅素的含量進(jìn)行了測(cè)定,為今后對(duì)顯齒蛇葡萄的進(jìn)一步研究及充分開(kāi)發(fā)利用此藥材奠定了基礎(chǔ)。1點(diǎn)樣定量毛細(xì)管CS-930型薄掃描儀(日本島津),島津UV-265FW分光光度計(jì),751DG紫外分光光度儀(上海儀器總廠),硅膠G(青島海洋化工廠),點(diǎn)樣定量毛細(xì)管(DrummondScientificCo.USA)。二氫楊梅素對(duì)照品(由本院周天達(dá)教授提供,經(jīng)光譜鑒定,含量99.95%),顯齒蛇葡萄A.grossedentala(Hand-Mazz)W.T.Wang(湖南江華縣林業(yè)科學(xué)研究所提供,本院周天達(dá)教授鑒定),所用試劑均為分析純。2方法和結(jié)果2.1熱回流提取法供試品溶液顯齒蛇葡萄約1g(粉碎,過(guò)20目篩),精密稱定,置索氏回流器中,石油醚適量加熱回流2h,95%乙醇于80℃加熱回流提取4h,得醇提取液,放冷,過(guò)濾,濾液水浴蒸除部分乙醇,濃縮液移至10ml容量瓶中,95%乙醇定容,吸取1ml置10ml容量瓶中,定容。對(duì)照品溶液精密稱取二氫楊梅素對(duì)照品10.50mg,加95%乙醇溶解并定容至10ml。2.2最大吸收波長(zhǎng)測(cè)定精密吸取二氫楊梅素對(duì)照品溶液0.3ml和供試品溶液0.5ml,分別置于10ml容量瓶中,精密加入5%AlCl3溶液3ml,95%乙醇定容,搖勻后室溫放置40min,隨行空白,掃描。結(jié)果供試品和對(duì)照品的吸收?qǐng)D譜一致,最大吸收波長(zhǎng)為314nm(見(jiàn)圖1)。精密吸取對(duì)照品溶液0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5ml分別置10ml容量瓶中,照2.2.1項(xiàng)下進(jìn)行,于314nm處測(cè)定吸收度。以對(duì)照品溶液的體積為橫坐標(biāo),吸收度為縱坐標(biāo),回歸方程A=5.48X-0.054,r=0.9995(n=5)。精密吸取樣品液0.5ml置于10ml容量瓶中,照2.2.1項(xiàng)下進(jìn)行,測(cè)定吸收度。根據(jù)回歸方程計(jì)算總黃酮含量,結(jié)果見(jiàn)表1。2.3透明膠紙密封二氫楊梅素檢測(cè)定量毛細(xì)管吸取供試品溶液1μl,對(duì)照品溶液2μl,分別點(diǎn)樣于硅膠G-CMC-Na薄層板(105℃活化0.5h)上,甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶8∶5)展開(kāi),展距15cm,3%FeCl3乙醇溶液噴霧,顯色后,覆蓋相同大小的玻璃板,四周用透明膠紙密封。二氫楊梅素斑點(diǎn)呈紫色,薄層掃描圖見(jiàn)圖2。故選λS=440nm,λR=650nm,反射法鋸齒掃描,狹縫1.2mm×1.2mm,SX=3,靈敏度中,背景校正。準(zhǔn)確吸取對(duì)照品溶液2,4,6,8,10μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,展開(kāi),顯色,覆蓋玻璃后掃描測(cè)定各斑點(diǎn)的面積積分值。以對(duì)照品點(diǎn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),斑點(diǎn)面積積分值為縱坐標(biāo),回歸方程Y=1338X+927,r=9951,二氫楊梅素在0.21～1.05μg具良好的線性關(guān)系。采用外標(biāo)兩點(diǎn)法測(cè)定含量。吸取樣品液5μl及對(duì)照品溶液3μl和6μl點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,展開(kāi),顯色,掃描,計(jì)算各樣品中二氫楊梅素的含量,結(jié)果見(jiàn)表1。已知含量的顯齒蛇葡萄粉末,分別添加對(duì)照品溶液,100℃烘干,按供試品溶液的制備方法,掃描測(cè)定,計(jì)算回收率,結(jié)果見(jiàn)表2。4顯齒蛇葡萄互氮化產(chǎn)品分離效果4.1本品含有大量色素,采用石油醚脫脂除去雜質(zhì),較好地解決了斑點(diǎn)重疊和拖尾現(xiàn)象。4.2樣品在進(jìn)行TLC時(shí),以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶8∶5)和甲苯-乙酸乙酯-甲醇(10∶8∶5)為展開(kāi)劑展開(kāi),結(jié)果后者分離效果好。4.3從圖2的展開(kāi)情況看,顯齒蛇葡萄中黃酮主要是二氫楊梅素,另外還含有楊梅素等,但含量很低,故以二氫楊梅素為對(duì)照品。4.4經(jīng)測(cè)定顯齒蛇葡萄中總黃酮含量為43.4%～44.0%,二氫楊梅素的含量高達(dá)37.4%～38.5%,該藥材具有非常重要的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。4.5由于二氫楊梅素的結(jié)構(gòu)中具有鄰三酚羥基,容易氧化,所以總黃酮含量測(cè)