酶制劑發(fā)酵產(chǎn)品檢驗(yàn)-發(fā)酵液中還原糖含量的測(cè)定

子情境：酶制劑發(fā)酵過程檢驗(yàn)--發(fā)酵液中還原糖含量的測(cè)定什么是糖化酶？糖化酶的概述

糖化酶有什么用途？怎樣才能測(cè)得糖化酶中的還原糖的含量呢？以及樣品的預(yù)處理方法？什么是糖化酶？資訊糖化酶是一種習(xí)慣上的名稱,學(xué)名為α-1,4-葡萄糖水解酶(α-1,4-Glucanglucohydrolace)。糖化酶是由曲霉優(yōu)良菌種經(jīng)深層發(fā)酵提煉而成。能把淀粉從非還原性未端水介a-1.4葡萄糖苷鍵產(chǎn)生葡萄糖，也能緩慢水解a-1.6葡萄糖苷鍵，轉(zhuǎn)化為葡萄糖。糖化酶有什么用途？資訊糖化酶的底物專一性較低，它能從淀粉鏈的非還原性未端切開a-1.4鍵，也能緩慢切開a-1.6鍵。因此，它能很快的把直鏈淀粉從非還原性未端依次切下葡萄單位，從而使支鏈淀粉水解成葡萄糖。（一）酒精工業(yè)（二）啤酒工業(yè)（三）釀造工業(yè)（四）味精工業(yè)（五）淀粉糖工業(yè)怎樣才能獲得糖化酶呢？糖化酶在微生物中的分布很廣,在工業(yè)中應(yīng)用的糖化酶主要是從黑曲霉、米曲霉、根霉等絲狀真菌和酵母中獲得,從細(xì)菌中也分離到熱穩(wěn)定的糖化酶,人的唾液、動(dòng)物的胰腺中也含有糖化酶。①根霉固體發(fā)酵法工藝流程:試管菌種→三角瓶款曲擴(kuò)大培養(yǎng)→簾子曲種→通風(fēng)制曲→成品②黑曲霉液體深層發(fā)酵法工藝流程:試管斜面種子→種子擴(kuò)大培養(yǎng)→發(fā)酵→過濾→濃縮→干燥→粗酶制劑發(fā)酵液中還原糖含量的測(cè)定

還原糖含量的測(cè)定斐林試劑法

酶法

3，5－二硝基水楊酸比色法

斐林試劑法測(cè)定還原糖的含量

①堿性酒石酸銅甲液：稱取15g硫酸銅及0.05g次甲基藍(lán)，溶于水中并稀釋至1000mL。②堿性酒石酸銅乙液：稱取50g酒石酸鉀鈉及75gNaOH，溶于水中，再加入4g亞鐵氰化鉀，完全溶解后，用水稀釋至1000mL。③乙酸鋅溶液：稱取1.9g乙酸鋅，加3mL冰乙酸，溶于水并稀釋至100mL。④106g/L亞鐵氰化鉀溶液。⑤1g/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。1．試劑斐林試劑法測(cè)定還原糖的含量樣品處理

標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液

樣品測(cè)定

測(cè)定步驟2．測(cè)定步驟斐林試劑法測(cè)定還原糖的含量3．計(jì)算式中m2—10mL堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于葡萄糖的質(zhì)量（mg）；V—測(cè)定時(shí)消耗樣品溶液的體積（mL）；250—樣品溶液的總體積（mL）；m—稱取試樣質(zhì)量（g）。3，5－二硝基水楊酸比色法測(cè)定還原糖含量

1．試劑①3，5－二硝基水楊酸試劑（DNS）。甲液：溶解6.9g重蒸酚于15.2mL100g/LNaOH溶液中，并稀釋到70mL，在此溶液中加入6.9g亞硫酸鈉。乙液：稱取255g酒石酸鉀鈉，加到300mL100g/LNaOH溶液中，再加入880mL10g/L3,5－硝基水楊酸溶液。將甲液與乙液相混合即得黃色試劑，貯于棕色瓶中。在室溫下放置7～10d后使用。②葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（1mg/mL）。2．測(cè)定步驟葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（1mg/mL）

1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2樣品中還原糖的測(cè)定

33，5－二硝基水楊酸比色法測(cè)定還原糖含量

3，5－二硝基水楊酸比色法測(cè)定還原糖含量

還原糖（%）=n—稀釋倍數(shù)1000—mg換算成gm—稱取試樣質(zhì)量g計(jì)算A—通過樣品液吸光度從葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線查得葡萄糖質(zhì)量mg3，5－二硝基水楊酸比色法測(cè)定還原糖含量

還原糖（%）=n—稀釋倍數(shù)1000—mg換算成gm—稱取試樣質(zhì)量g計(jì)算A—通過樣品液吸光度從葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線查得葡萄糖質(zhì)量mg糖化酶發(fā)酵過程檢驗(yàn)

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