claudin-1表達與膠質瘤侵襲分級和預后的關系

claudin-1表達與膠質瘤侵襲分級和預后的關系

橡膠瘤是最常見的腦腫瘤。其死亡率高和預后差的原因主要與膠質瘤的分化程度、侵襲生長、細胞增殖和血管生成密切相關。腫瘤的組織學分級是重要的預后參數,其中與腫瘤細胞的極性變化密切相關,而控制腫瘤細胞極性的最重要分子成分是細胞的緊密連接。緊密連接由整合素蛋白組成,例如occludin、claudin家族以及連接相關蛋白如ZO-1。目前已知Claudin家族有24個成員,以組織特異性的模式表達。Claudin通過兩個細胞外的環(huán)相互連接。近來有關Claudin基因在不同腫瘤中的表達的研究逐漸增多,但其確切的表達模式尚不知道,僅僅在少量的腫瘤上對有限的Claudin基因進行研究,有關Claudin在膠質瘤進展中的作用目前未見文獻報道。本文應用免疫組化方法研究Claudin-1在膠質瘤中的表達及其與Ki-67、微血管密度的關系,探討Claudin-1的表達在膠質瘤發(fā)生發(fā)展的意義。1材料和方法1.1質瘤兩組年齡的性別分布取自福建醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院病理科2002年1月～2006年12月手術切除膠質瘤存檔蠟塊50例,其中男26例,女24例,年齡15～70歲。所有標本均經常規(guī)4%中性甲醛固定,HE染色,按照WHO腫瘤分類(2000年)神經系統(tǒng)腫瘤病理學與遺傳學分冊標準進行膠質瘤的分級,其中≤Ⅱ級的膠質瘤17例,Ⅲ～Ⅳ級33例。1.2單克隆抗體檢測兔抗人Claudin-1多克隆抗體,購自美國ZYMED公司,鼠抗人Ki-67單克隆抗體(克隆號MIB-1)和CD34單克隆抗體(克隆號QBEnd/10)購自美國NeoMarkers公司,EnVision二步法非生物素免疫組化試劑盒購自美國DAKO公司。所有操作嚴格按照說明進行。用已知乳腺癌Claudin-1陽性切片為陽性對照,PBS代替一抗為陰性對照。1.3細胞內表達分析選擇具有非腫瘤區(qū)、腫瘤與非腫瘤移行區(qū)(交界區(qū))和腫瘤區(qū)的切片進行研究分析。Claudin-1陽性染色者在細胞膜和/或漿有棕黃色顆粒沉著。根據腫瘤細胞膜和/或漿的染色程度以及染色細胞百分率進行分析評分:基本不著色者為0分;著色淡者為1分;著色適中者為2分;著色深者為3分。著色細胞占計數細胞百分率≤5%為0分;6%～25%為1分;26%～50%為2分;≥51%為3分。將每張切片相同區(qū)域的腫瘤細胞著色程度得分與著色細胞百分率得分各自相乘,為每個區(qū)域腫瘤細胞染色的最后得分。得0～1分為陰性(-);得2～3分為弱陽性(+);得4～6分為中等陽性(++);6分以上為強陽性(+++)。1.4微血管密度檢測CD34陽性染色定位于血管內皮細胞,呈棕黃色顆粒沉著,腦組織內孤立的棕黃色血管內皮細胞或細胞簇代表一條單獨得微血管。在10×物鏡下分別在不同的分區(qū)挑選微血管分布最高的區(qū)域,然后在40×物鏡下(0.196mm2/每視野)計數5個視野中被CD34染成棕黃色的血管數目,取其平均值作為微血管密度。分辯不清或染色模糊的細胞不計入。1.5ki-67原子能育種抗劑的評價標準陽性染色者為細胞核呈現深棕色顆粒沉著。分別在不同區(qū)域計數1000個腫瘤細胞中Ki-67陽性標記細胞數即為不同區(qū)域的標記指數。1.6統(tǒng)計處理統(tǒng)計分析采用SPSS12.0軟件進行。計數資料采用χ2檢驗,計量資料組間比較采用t檢驗。2結果2.1cladin-1對膠原瘤的檢查Claudin-1表達與膠質瘤患者的年齡、性別、腫瘤發(fā)生部位其差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)(表1)。2.2不同級別膠質瘤claudin-1表達情況在非腫瘤區(qū),高、低級別的膠質瘤其Claudin-1的表達(圖1a,圖2a)未見明顯差別;在膠質瘤交界區(qū)(侵襲前沿),高級別膠質瘤Claudin-1表達率(圖2b)明顯高于低級別的膠質瘤(圖1b)(P<0.05);而在腫瘤區(qū),低級別膠質瘤Claudin-1的表達率(圖1c)明顯高于高級別的膠質瘤(圖2c)(P<0.05)(表1)。2.3膠質瘤ki-雙n-9ki-雙1除非腫瘤區(qū)外,高級別膠質瘤Ki-67標記指數明顯高于低級別膠質瘤(P<0.05)。對于低級別膠質瘤來說,雖然腫瘤區(qū)的Ki-67標記指數高于非腫瘤區(qū),但無統(tǒng)計學差異;而對于高級別的膠質瘤,腫瘤區(qū)的Ki-67標記指數明顯高于交界區(qū)和非腫瘤區(qū),交界區(qū)也高于非腫瘤區(qū)(P<0.05)(表2)。2.4雙側菌株7的表達低級別膠質瘤不同分區(qū)中Claudin-1的表達與Ki-67的表達未見明顯關系;高級別的膠質瘤,除非腫瘤區(qū)外,高表達Claudin-1的膠質瘤其Ki-67的標記指數明顯高于低表達Claudin-1者(P<0.05)(表1)。2.5低級別膠質瘤中,各組織的mvd的比較在腫瘤區(qū)高級別的膠質瘤的MVD高于低級別膠質瘤的MVD,而在非腫瘤區(qū)和交界區(qū)無明顯差異(P>0.05)。在低級別膠質瘤中,腫瘤區(qū)的MVD高于非腫瘤區(qū)和交界區(qū)的MVD,非腫瘤區(qū)和交界區(qū)間MVD未見明顯差異(P>0.05);而在高級別膠質瘤中,腫瘤區(qū)MVD高于非腫瘤區(qū)和交界區(qū)MVD,交界區(qū)MVD高于非腫瘤區(qū)(P<0.05)(表2)。2.6結果表達數及>級膠質瘤中ki-雙不論在腫瘤區(qū)、交界區(qū)還是非腫瘤區(qū),Claudin-1的表達與MVD未見明顯相關性(P>0.05)(表1)?！鞅硎劲蟆艏壞z質瘤腫瘤區(qū)Claudin-1表達率與<Ⅱ級膠質瘤比較,P<0.05#表示Ⅲ～Ⅳ級膠質Ki-67標記指數與<Ⅱ級膠質瘤比較,P<0.05□表示Ⅲ～Ⅳ級膠質瘤腫瘤區(qū)和交界區(qū)Claudin-1高低表達組Ki-67標記指數間的比較,P<0.05☆表示Ⅲ～Ⅳ級膠質瘤交界區(qū)和腫瘤區(qū)MVD水平與<Ⅱ級膠質瘤比較,P<0.05△表示Ⅲ～Ⅳ級膠質瘤交界區(qū)與非腫瘤區(qū)Ki-67標記指數比較,P<0.05#表示Ⅲ～Ⅳ級膠質瘤腫瘤區(qū)與非腫瘤區(qū)Ki-67標記指數比較,P<0.05□表示Ⅲ～Ⅳ級膠質瘤腫瘤區(qū)與交界區(qū)Ki-67標記指數比較,P<0.05☆表示Ⅲ～Ⅳ級膠質瘤腫瘤區(qū)MVD水平與<Ⅱ級膠質瘤比較,P<0.05○表示膠質瘤交界區(qū)與非腫瘤區(qū)MVD水平比較,P<0.05

表示膠質瘤交界區(qū)與腫瘤區(qū)MVD水平比較,P<0.05◎表示Ⅲ～Ⅳ級膠質瘤交界區(qū)與非腫瘤區(qū)MVD水平比較,P<0.053claudin-1與腫瘤的關系Claudin屬于一類跨膜緊密連接蛋白,目前已發(fā)現有24個家族成員,分子量在～17-27kDa之間,其主要作用是確定通過細胞間分子的大小,第一個Claudin基因(CLDN1)是在篩查與整合素緊密連接蛋白,occludin相互作用的鼠類蛋白時鑒定的,與occludin、連接粘附分子1(JAM1)等其他整合素膜蛋白一起形成特異性的膜功能,包括維持細胞的極性和細胞間屏障功能。緊密連接蛋白表達的降低常導致腫瘤細胞極性消失及細胞間緊密連接功能失常。另外緊密連接蛋白還參與細胞增殖,分化的調節(jié)。Claudin蛋白主要位于細胞膜和/或細胞漿,目前的研究結果不一致,一些研究發(fā)現Claudin蛋白表達下調或不表達,另一些研究發(fā)現表達上調。作者通過觀察腫瘤的侵襲情況,鏡下將膠質瘤分為非腫瘤性區(qū)、腫瘤與非腫瘤交界區(qū)和腫瘤區(qū),通過比較不同區(qū)域中Claudin-1的表達來探討與腫瘤生物學行為間的相關性。結果顯示Claudin-1的表達與患者年齡、性別和發(fā)生部位無關,而與腫瘤的侵襲、組織學分級以及腫瘤的增生密切相關。Sheehan等發(fā)現前列腺癌中Claudin-1表達降低與腫瘤的分級呈負相關,分級越高Claudin-1表達越低,多因素分析提示Claudin-1表達降低是前列腺癌獨立的預后參數。Higashi等也發(fā)現Claudin-1表達的丟失與肝細胞癌的組織學分級、靜脈內癌栓形成明顯相關,低分化和門靜脈癌栓形成的肝細胞癌Claudin-1表達丟失,提示Claudin-1表達下調可作為肝癌患者預后差的標志。目前僅見Claudin-1在膠質母細胞瘤血管內皮細胞中表達的研究。本文也有相似的結果,研究發(fā)現Claudin-1的表達與膠質瘤的侵襲、分級和瘤細胞的增殖明顯相關,高級別的膠質瘤Claudin-1表達降低,即丟失率增加。同時首次發(fā)現一個有趣的Claudin-1表達相反的現象,即Claudin-1的表達模式在腫瘤交界區(qū)與在腫瘤區(qū)明顯不同,在膠質瘤交界區(qū)高級別的膠質瘤其Claudin-1表達率明顯高于低級別的膠質瘤(P<0.05),而在腫瘤區(qū)高級別的膠質瘤其Claudin-1表達率明顯低于低級別的膠質瘤(P<0.05)。這種表達模式相反的現象尚難以解釋,提示在膠質瘤進展的不同階段Claudin-1可能發(fā)揮不同作用,待深入研究。研究發(fā)現Ki-67標記指數與膠質瘤的組織學分級和預后密切相關,Ki-67標記指數越高的膠質瘤患者其生存時間和復發(fā)時間越短本研究也發(fā)現高級別的膠質瘤Ki-67標記指數明顯高于低級別的膠質瘤;同時高級別膠質瘤的腫瘤區(qū)Ki-67標記指數明顯高于交界區(qū)和非腫瘤區(qū),交界區(qū)也高于非腫瘤區(qū)。Halasz等在肝母細胞瘤中發(fā)現Claudin-1的表達與腫瘤細胞的增殖活性負相關,提示侵襲強、高增殖活性的胚胎表型與Claudin-1表達降低/丟失有關。本文研究結果與之相反,顯示高級別的膠質瘤Claudin-1的表達與Ki-67的標記指數呈正相關性,即Claudin