液體雙試劑測(cè)定尿酸的臨床應(yīng)用

液體雙試劑測(cè)定尿酸的臨床應(yīng)用

排尿是臨床上常用的生化指標(biāo)。痛、腎、心血管疾病、糖尿病與血清減少有關(guān)。因此,尿酸的檢測(cè)與分析對(duì)臨床診斷、了解病情進(jìn)展,有重要的參考價(jià)值。在日常生化檢驗(yàn)工作中,我們發(fā)現(xiàn)單獨(dú)測(cè)定尿酸時(shí)測(cè)定結(jié)果比較理想,而在測(cè)定完膽堿酯酶(CHE)后緊接著測(cè)尿酸,尿酸的檢測(cè)結(jié)果偏低。筆者懷疑這可能是測(cè)試項(xiàng)目間的交叉污染所致,本文作以下探討。1材料和方法1.1材料表面1.1.1試劑3a4eCHE試劑為寧波美康生物科技有限公司提供的液體雙試劑。CHE試劑1(R1):5,5-二硫代-2-硝基苯甲酸2.5×10-4mol/L及磷酸鹽緩沖液(pH7.7)0.1mol/L;試劑2(R2):硫代丁酰膽堿,濃度為0.006mol/L。尿酸(UA)為德賽診斷系統(tǒng)有限公司提供液體雙試劑。UA試劑1(R1):2,4,6-三溴-3-羥基苯甲酸(TBHBA)1mol/L及磷酸鹽緩沖液(PBS,pH7.0)100mol/L;試劑2(R2):4-氨基安替比林0.3mol/L,鐵氰化鉀10μmol/L,過(guò)氧化物酶(POD)≥2000U/L,尿酸酶≥30U/L,及PBS(pH7.0)100mol/L。校準(zhǔn)品:德國(guó)羅氏診斷有限公司提供。質(zhì)控品:英國(guó)朗道實(shí)驗(yàn)有限公司提供。1.1.2儀器ADVIA1200全自動(dòng)生化分析儀。運(yùn)行狀態(tài)良好。1.1.3參考參數(shù)40份臨床血清標(biāo)本均無(wú)黃疸、無(wú)溶血且無(wú)脂血,其測(cè)定值均在參考范圍內(nèi)。1.2b有污染因素干擾正常開(kāi)機(jī)清洗管道及比色杯,做UA校正且質(zhì)控在控。將本次試驗(yàn)分成8組:Ⅰ組:標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組,單獨(dú)測(cè)定40份標(biāo)本的UA值(確保無(wú)其他因素干擾);Ⅱ組:每份標(biāo)本先測(cè)CHE接著測(cè)UA;Ⅲ組:每份標(biāo)本先測(cè)尿素(UREA)再測(cè)UA;Ⅳ組:每份標(biāo)本先測(cè)CHE加測(cè)不受污染的UREA后再測(cè)UA;Ⅴ組:每份標(biāo)本蒸餾水倍比稀釋后測(cè)UA;Ⅵ組:每份標(biāo)本用CHE的R1試劑倍比稀釋后測(cè)UA;Ⅶ組:每份標(biāo)本用CHE的R2試劑倍比稀釋后測(cè)UA;Ⅷ組:更換清洗管道,加強(qiáng)儀器對(duì)試劑針、樣品針及比色杯的清洗功能后先測(cè)CHE再測(cè)UA。1.3統(tǒng)計(jì)處理采用SPSS11.5軟件分析,比較采用F檢驗(yàn),兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、、、組的檢測(cè)結(jié)果比較表1與對(duì)照組Ⅰ組相比:Ⅱ組的結(jié)果明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ、Ⅷ組的結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與對(duì)照組Ⅴ組相比:Ⅵ組的結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但Ⅶ組的測(cè)定結(jié)果明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1,2。3試劑攜帶污染由表1可以看出,在ADVIA1200全自動(dòng)生化分析儀上,UREA對(duì)UA的測(cè)定無(wú)明顯的影響,而CHE對(duì)UA的測(cè)定有嚴(yán)重的干擾。在CHE和UA中間加測(cè)UREA后,UA的測(cè)定值不受影響,原因可能CHE對(duì)UA的交叉污染導(dǎo)致UA結(jié)果明顯偏低,而這種污染在加測(cè)UREA后又被消除。全自動(dòng)生化儀代替手工,具有多項(xiàng)目、多樣本、檢測(cè)迅速的優(yōu)點(diǎn)。但是由于共用試劑針、樣本針、比色杯及攪拌棒,測(cè)試項(xiàng)目間存在交叉污染,其交叉污染主要表現(xiàn)在:(1)試劑針、樣品針、攪拌棒及比色杯的攜帶污染;(2)前者試劑成分影響后者;(3)前者項(xiàng)目的反應(yīng)顏色影響后者;(4)前者pH值影響后者pH值反應(yīng)環(huán)境。在本實(shí)驗(yàn)中,CHE和UA的試劑的pH值比較接近,對(duì)UA的影響不大。CHE試劑為無(wú)色對(duì)UA的紅色反應(yīng)產(chǎn)物無(wú)影響。從本次試驗(yàn)結(jié)果可看出:CHE對(duì)UA的影響主要是試劑針、樣品針、攪拌棒及比色杯攜帶CHE的R2試劑(硫代丁酰膽堿)對(duì)UA測(cè)定的干擾。試劑攜帶污染原因:(1)一種試劑中含有另一試驗(yàn)的測(cè)定物質(zhì)而直接干擾其測(cè)試結(jié)果;(2)一種試劑中含有改變另一試驗(yàn)反應(yīng)條件或影響其反應(yīng)進(jìn)程的物質(zhì)而間接干擾其測(cè)試結(jié)果。由該試劑引導(dǎo)的反應(yīng)對(duì)下一個(gè)項(xiàng)目的反應(yīng)進(jìn)程帶來(lái)間接干擾。在有試劑污染的情況下,下一個(gè)項(xiàng)目所測(cè)定的是前后2個(gè)項(xiàng)目反應(yīng)的綜合作用結(jié)果。CHE的R2試劑對(duì)UA測(cè)定干擾就是R2試劑影響UA反應(yīng)進(jìn)程。本儀器的反應(yīng)杯是塑料的,相比石英杯更具吸附污染。在2個(gè)測(cè)試項(xiàng)目間用去離子水清洗,如清洗不徹底一個(gè)項(xiàng)目對(duì)緊隨其后的一個(gè)或幾個(gè)項(xiàng)目測(cè)定會(huì)帶來(lái)一定程度的試劑污染,并且隨著儀器使用時(shí)間的累加及儀器狀況的下降,試劑交叉污染的程度會(huì)有所加劇,就會(huì)影響測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性。從表2的Ⅶ組和Ⅴ組數(shù)值的比較可以看出CHE的R2試劑使UA的測(cè)定結(jié)果明顯降低。要消除交叉污染,必須做到:(1)操作人員平時(shí)多留心、多觀察,綜合生化分析儀的工作流程、測(cè)試項(xiàng)目的反應(yīng)原理和試劑的組成來(lái)考慮,合理設(shè)計(jì)項(xiàng)目測(cè)定順序,把受污染項(xiàng)目放在施污染項(xiàng)目之前測(cè)定或者中間插入一個(gè)或幾個(gè)非污染項(xiàng)目,盡可能避免交叉污染,必要時(shí)更換方法及試劑。(2)設(shè)置特殊的沖洗程序,從表1中Ⅷ組數(shù)值與Ⅰ組數(shù)值的比較可以看出,在相鄰項(xiàng)目間增加沖洗次數(shù)或使用酸堿液清洗,才能基本消除試劑針攜帶污染的影響。(3)加強(qiáng)儀器的清洗及維護(hù),