上市藥品雜質(zhì)檢驗(yàn)中未知色譜峰的識(shí)別與調(diào)查

Part1、識(shí)別未知色譜峰

查看每一個(gè)批次產(chǎn)品色譜圖，將每一張樣品色譜圖放大到基線進(jìn)行檢查，確保小的色譜峰能夠被發(fā)現(xiàn)。進(jìn)樣稀釋液或空白溶液其色譜圖與樣品色譜圖進(jìn)行對(duì)比排除溶劑峰。色譜柱空體積后出現(xiàn)的任何非典型色譜圖中的色譜峰，都認(rèn)為是潛在的未知色譜峰。Part2、評(píng)估未知色譜峰

當(dāng)未知色譜峰低于檢驗(yàn)方法的檢測(cè)限(信噪比≥3)，無(wú)需進(jìn)一步調(diào)查此未知峰，當(dāng)未知峰高于檢驗(yàn)方法的檢測(cè)限，計(jì)算未知峰的含量，未知色譜峰應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)方法或質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行計(jì)算。對(duì)于單一活性成分的產(chǎn)品，活性原料主峰在檢測(cè)器響應(yīng)范圍內(nèi)的，可用未知色譜峰的響應(yīng)值除以活性原料峰的響應(yīng)值（峰高或峰面積，取決于檢驗(yàn)方法），并以百分?jǐn)?shù)進(jìn)行報(bào)告；對(duì)于多個(gè)活性成分的產(chǎn)品，可用未知色譜峰的響應(yīng)值除以最小主峰的響應(yīng)值，并以百分?jǐn)?shù)進(jìn)行報(bào)告；當(dāng)色譜圖中主峰超過(guò)檢測(cè)器響應(yīng)值或者沒(méi)有主峰時(shí)，應(yīng)配制與調(diào)查閾值相當(dāng)?shù)膶?duì)照品溶液進(jìn)行計(jì)算未知色譜峰的大小，可以用對(duì)照品內(nèi)標(biāo)法或小濃度對(duì)照品外標(biāo)法進(jìn)行定量。盡量采用活性原料對(duì)照品溶液進(jìn)行配制，如果不能實(shí)現(xiàn)時(shí)，可以選擇與活性原料結(jié)構(gòu)相似或者響應(yīng)值相似的物質(zhì)配制對(duì)照品溶液（例如，降解產(chǎn)物或工藝雜質(zhì)）；對(duì)于殘留溶劑，利用和未知色譜峰最近分離出特定溶劑的響應(yīng)因子與活性成分樣品量進(jìn)行計(jì)算，得出未知色譜峰的含量。計(jì)算未知色譜峰的結(jié)果應(yīng)該精確到調(diào)查閾值所要求的精確度，再與調(diào)查閾值比較，按照ICH的標(biāo)準(zhǔn)(Q3A和Q3B)執(zhí)行調(diào)查閾值。如果產(chǎn)品中含有多個(gè)有效成分，調(diào)查閾值的確定應(yīng)使用最高日攝入量的活性原料，再進(jìn)行比較。未知色譜峰的含量未超出調(diào)查閾值時(shí)，不需要發(fā)起實(shí)驗(yàn)室調(diào)查，實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄未知色譜峰的含量。未知色譜峰的含量超出調(diào)查閾值時(shí)，則將其色譜圖與技術(shù)文件中色譜圖對(duì)比，將含有未知色譜峰的色譜圖與檢驗(yàn)方法、已發(fā)實(shí)驗(yàn)室調(diào)查、注冊(cè)文件或其他技術(shù)文件中色譜圖進(jìn)行對(duì)比，如果發(fā)現(xiàn)的未知色譜峰為可查明的雜質(zhì)，且其含量未超過(guò)文件記錄的可接受標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)需進(jìn)行調(diào)查，根據(jù)檢驗(yàn)方法和相關(guān)的文件報(bào)告該色譜峰。但需注意技術(shù)文件應(yīng)有充分的數(shù)據(jù)證明此未知色譜峰的安全性。Part3、發(fā)起實(shí)驗(yàn)室調(diào)查制劑產(chǎn)品調(diào)查閾值

當(dāng)未知色譜峰首次出現(xiàn)且超出調(diào)查閾值，或其含量超過(guò)已有文件記錄的可接受標(biāo)準(zhǔn)，需發(fā)起實(shí)驗(yàn)室調(diào)查。實(shí)驗(yàn)室調(diào)查需排除色譜峰是否為人為引入的非藥品本身含有的色譜峰。人為引入的色譜峰一般產(chǎn)生的原因如下：空白稀釋液進(jìn)樣稀釋空白溶液，確定未知色譜峰是否為稀釋空白溶液引入。查看色譜圖信息確認(rèn)未知峰是否在任一空白稀釋液的譜圖中出現(xiàn)。如果在進(jìn)樣樣品稀釋液色譜圖中出現(xiàn)了未知峰，則可以得出結(jié)論，未知峰為人造峰。樣品溶液如果不是稀釋溶液引起的，則需重新進(jìn)樣原始樣品溶液，重新進(jìn)樣的原始樣品溶液發(fā)現(xiàn)未知色譜峰需確認(rèn)相對(duì)保留時(shí)間與每個(gè)出現(xiàn)未知峰的色譜圖中是否一致。色譜系統(tǒng)引入確認(rèn)未知色譜峰不是由前一針樣品殘留或?qū)φ掌窔埩?。確認(rèn)整個(gè)液相系統(tǒng)和所使用的色譜柱未受到污染。如果樣品溶液每次重進(jìn)樣均未發(fā)現(xiàn)該色譜峰，且該峰在之前的進(jìn)樣中未重復(fù)出現(xiàn)，則表明該未知峰可能是色譜系統(tǒng)引入的色譜峰。樣品制備過(guò)程重新按照之前的方法制備兩份樣品進(jìn)樣，如果在新制備的兩份樣品中至少一針未發(fā)現(xiàn)未知色譜峰，則歸因于色譜系統(tǒng)或樣品制備過(guò)程導(dǎo)致。如果實(shí)驗(yàn)室調(diào)查無(wú)法確認(rèn)未知峰為人造峰，實(shí)驗(yàn)室調(diào)查總結(jié)將未知峰報(bào)告為未查明色譜峰。Part4、偏差調(diào)查

經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室調(diào)查，未查明色譜峰非實(shí)驗(yàn)室原因?qū)е?，?yīng)發(fā)起偏差調(diào)查，需要發(fā)起偏差調(diào)查的情況包括：新的未查明色譜峰；以往出現(xiàn)的未查明色譜峰，且含量高于歷史數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)；以往出現(xiàn)的未查明色譜峰，含量未超過(guò)歷史數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)，但該標(biāo)準(zhǔn)未被文件記錄為可接受的標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)未知色譜峰進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，同時(shí)確定未知雜質(zhì)的來(lái)源。推薦確定原因之后，通過(guò)相應(yīng)措施將未知雜質(zhì)降低到閾值以下。如無(wú)法將其降低，需對(duì)雜質(zhì)的毒理進(jìn)行研究確定其可接受標(biāo)準(zhǔn)并將其寫(xiě)入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。注：如果在穩(wěn)定性加速實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)未查明色譜峰，則應(yīng)該與標(biāo)簽注明的儲(chǔ)存條件的樣品進(jìn)行比較，以決定是否需要下一步的行動(dòng)。如果是因?yàn)樽兏a(chǎn)生的未知色譜峰，建議即使含量未超過(guò)閾值也應(yīng)對(duì)其進(jìn)行調(diào)查，確定是否為基因毒性雜質(zhì)。Part5、未查明色譜峰的檢驗(yàn)方法更新

未知色譜峰調(diào)查完成后，需將色譜峰更新至檢驗(yàn)方法等相關(guān)文件中，更新檢驗(yàn)方法時(shí)，應(yīng)考慮更新未查