上市藥品雜質檢驗中未知色譜峰的識別與調查

Part1、識別未知色譜峰

查看每一個批次產(chǎn)品色譜圖，將每一張樣品色譜圖放大到基線進行檢查，確保小的色譜峰能夠被發(fā)現(xiàn)。進樣稀釋液或空白溶液其色譜圖與樣品色譜圖進行對比排除溶劑峰。色譜柱空體積后出現(xiàn)的任何非典型色譜圖中的色譜峰，都認為是潛在的未知色譜峰。Part2、評估未知色譜峰

當未知色譜峰低于檢驗方法的檢測限(信噪比≥3)，無需進一步調查此未知峰，當未知峰高于檢驗方法的檢測限，計算未知峰的含量，未知色譜峰應根據(jù)檢驗方法或質量標準進行計算。對于單一活性成分的產(chǎn)品，活性原料主峰在檢測器響應范圍內(nèi)的，可用未知色譜峰的響應值除以活性原料峰的響應值（峰高或峰面積，取決于檢驗方法），并以百分數(shù)進行報告；對于多個活性成分的產(chǎn)品，可用未知色譜峰的響應值除以最小主峰的響應值，并以百分數(shù)進行報告；當色譜圖中主峰超過檢測器響應值或者沒有主峰時，應配制與調查閾值相當?shù)膶φ掌啡芤哼M行計算未知色譜峰的大小，可以用對照品內(nèi)標法或小濃度對照品外標法進行定量。盡量采用活性原料對照品溶液進行配制，如果不能實現(xiàn)時，可以選擇與活性原料結構相似或者響應值相似的物質配制對照品溶液（例如，降解產(chǎn)物或工藝雜質）；對于殘留溶劑，利用和未知色譜峰最近分離出特定溶劑的響應因子與活性成分樣品量進行計算，得出未知色譜峰的含量。計算未知色譜峰的結果應該精確到調查閾值所要求的精確度，再與調查閾值比較，按照ICH的標準(Q3A和Q3B)執(zhí)行調查閾值。如果產(chǎn)品中含有多個有效成分，調查閾值的確定應使用最高日攝入量的活性原料，再進行比較。未知色譜峰的含量未超出調查閾值時，不需要發(fā)起實驗室調查，實驗結果記錄未知色譜峰的含量。未知色譜峰的含量超出調查閾值時，則將其色譜圖與技術文件中色譜圖對比，將含有未知色譜峰的色譜圖與檢驗方法、已發(fā)實驗室調查、注冊文件或其他技術文件中色譜圖進行對比，如果發(fā)現(xiàn)的未知色譜峰為可查明的雜質，且其含量未超過文件記錄的可接受標準，無需進行調查，根據(jù)檢驗方法和相關的文件報告該色譜峰。但需注意技術文件應有充分的數(shù)據(jù)證明此未知色譜峰的安全性。Part3、發(fā)起實驗室調查制劑產(chǎn)品調查閾值

當未知色譜峰首次出現(xiàn)且超出調查閾值，或其含量超過已有文件記錄的可接受標準，需發(fā)起實驗室調查。實驗室調查需排除色譜峰是否為人為引入的非藥品本身含有的色譜峰。人為引入的色譜峰一般產(chǎn)生的原因如下：空白稀釋液進樣稀釋空白溶液，確定未知色譜峰是否為稀釋空白溶液引入。查看色譜圖信息確認未知峰是否在任一空白稀釋液的譜圖中出現(xiàn)。如果在進樣樣品稀釋液色譜圖中出現(xiàn)了未知峰，則可以得出結論，未知峰為人造峰。樣品溶液如果不是稀釋溶液引起的，則需重新進樣原始樣品溶液，重新進樣的原始樣品溶液發(fā)現(xiàn)未知色譜峰需確認相對保留時間與每個出現(xiàn)未知峰的色譜圖中是否一致。色譜系統(tǒng)引入確認未知色譜峰不是由前一針樣品殘留或對照品殘留。確認整個液相系統(tǒng)和所使用的色譜柱未受到污染。如果樣品溶液每次重進樣均未發(fā)現(xiàn)該色譜峰，且該峰在之前的進樣中未重復出現(xiàn)，則表明該未知峰可能是色譜系統(tǒng)引入的色譜峰。樣品制備過程重新按照之前的方法制備兩份樣品進樣，如果在新制備的兩份樣品中至少一針未發(fā)現(xiàn)未知色譜峰，則歸因于色譜系統(tǒng)或樣品制備過程導致。如果實驗室調查無法確認未知峰為人造峰，實驗室調查總結將未知峰報告為未查明色譜峰。Part4、偏差調查

經(jīng)過實驗室調查，未查明色譜峰非實驗室原因導致，應發(fā)起偏差調查，需要發(fā)起偏差調查的情況包括：新的未查明色譜峰；以往出現(xiàn)的未查明色譜峰，且含量高于歷史數(shù)據(jù)標準；以往出現(xiàn)的未查明色譜峰，含量未超過歷史數(shù)據(jù)標準，但該標準未被文件記錄為可接受的標準。對未知色譜峰進行結構鑒定，同時確定未知雜質的來源。推薦確定原因之后，通過相應措施將未知雜質降低到閾值以下。如無法將其降低，需對雜質的毒理進行研究確定其可接受標準并將其寫入質量標準中。注：如果在穩(wěn)定性加速實驗中發(fā)現(xiàn)未查明色譜峰，則應該與標簽注明的儲存條件的樣品進行比較，以決定是否需要下一步的行動。如果是因為變更而產(chǎn)生的未知色譜峰，建議即使含量未超過閾值也應對其進行調查，確定是否為基因毒性雜質。Part5、未查明色譜峰的檢驗方法更新

未知色譜峰調查完成后，需將色譜峰更新至檢驗方法等相關文件中，更新檢驗方法時，應考慮更新未查