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色譜分離法的由來分析制樣技術干擾組分或待測組分的分離方法干擾組分或待測組分的分離方法萃取分離法沉淀分離法離子交換分離法色譜分離法色譜分離法的由來0101色譜分離法的由來分析制樣技術色譜分離法層析法、色層法或層離法1903年由俄國化學家、植物學家茨維特首創(chuàng)的,用于分離植物色素。由于這一實驗將混合的植物色素分離為不同的色帶,因此茨維特將這種方法命名為色譜法。01色譜分離法的由來分析制樣技術后來采用此方法亦可用于無色組分的分離。故色譜法只不過是一個延用的名詞并非表示只能分離有色組分。目前,各種類型的色譜法,特別適合于分離不穩(wěn)定化合物,結構相似、性質相近的化合物是分離混合物的近代技術?;靖拍?202基本概念分析制樣技術色譜分離法是利用組分在不相混溶的兩相中分配的差異而進行分離的一種方法。例如以洗脫劑洗脫植物色素的提取液,經(jīng)過一段時間洗脫之后,植物色素在色譜柱中實現(xiàn)分離,由一條色素帶分散為葉綠素a、葉綠素b、葉黃素和胡蘿卜素數(shù)條平行的色帶,然后依次對各色素進行分離。色譜法具備的條件0303色譜法具備的條件分析制樣技術首先待分離的混合物中各組分的理化性質有差異,并且差距越大,越易分離。其次具有兩相固定相流動相濾紙或其它載體作為惰性支持物,兩相在惰性支持物上作相對運動,而進行分離。03色譜法具備的條件分析制樣技術最后應進行多次沖洗或展開操作,才能使待分離組分完全分離。總而言之,色譜分離法總是由一種流動相,帶著被分離的物質,流經(jīng)固定相,從而使試樣中的各組分分離。色譜分離法的分類0404色譜分離法的分類分析制樣技術紙色譜法薄層色譜法柱色譜法按固定相的形狀和操作形式的不同分為04色譜分離法的分類分析制樣技術紙色譜法以色譜濾紙為載體的液相色譜法。由于各組分在兩相間進行分配的分配比不同,因此隨著展開劑的向前流動得到分離。纖維素形成紙色譜中的固定相;而有機溶劑為流動相,又稱展開劑。04色譜分離法的分類分析制樣技術基本原理利用待分離組分在固定相和流動相分配或吸附的差異,從而利用使它們在薄層上的移動速度差異得以分離的方法。薄層色譜法04色譜分離法的分類分析制樣技術柱色譜法將氧化鋁或硅膠等吸附劑填充在玻璃柱中作為固定相,然后將試液加在柱上,用一種洗脫劑作為流動相進行洗脫。04色譜分離法的分類分析制樣技術若試液中有A、B兩種組分,則A、B將不斷地在色譜柱內溶解、吸附、再溶解再吸附,吸附能力較弱的物質溶解、吸附的速度都較快,將先被洗脫下來,這樣便可將A、B兩種組分分離。紙色譜法分析制樣技術色譜分離法分類紙色譜法薄層色譜法柱色譜法按固定相的形狀和操作形式的不同分基本概念0101基本概念分析制樣技術紙色譜法又稱紙層析法,是根據(jù)混合物中不同組分在兩相中的分配比不同而進行分離的一種微量分離方法。載體層析紙(濾紙)。固定相濾紙上的吸濕水分。流動相有機溶劑(展開劑)。故紙層析法屬于液-液色譜。層析濾紙的要求0202層析濾紙的要求分析制樣技術要求所選濾紙應質地均勻,厚薄一致。①濾紙應具有一定的機械強度,被溶劑浸濕后能站立。②濾紙纖維應松緊程度適宜,溶劑展開速度合適。③應具有一定純度,不含雜質。④濾紙上應不含有溶于水及有機溶劑的物質。⑤紙色譜法的原理0303紙色譜法的原理分析制樣技術有機混合物點在濾紙(載體)上,做為展開劑的有機溶劑(流動相)自下而上移動。樣品混合物中各組分在水(固定相)或有機溶劑(流動相)中的溶解能力各不相同。各組分會在水與有機溶劑兩相中發(fā)生溶解分配并隨有機溶劑的移動而展開,達到分離的目的。03紙色譜法的原理分析制樣技術層析分離不同組分性質不同的組分分離在濾紙的不同位置上親脂性強的成份在流動相中分配的多一些,隨流動相移動的速度就快一些。親水性強的成份在固定相中分配的多一些,隨流動相移動的速度就慢一些。操作方法0404操作方法分析制樣技術第一步配制試樣溶液第二步裁濾紙第三步畫圓點第四步點樣第五步取展開劑第六步展開第七步顯色固定相和展開劑溶劑。1.5cm×20cm長條層析紙。離濾紙末端約2cm處用鉛筆。毛細管取樣,輕點樣于原點上,晾干,重復3~5次。斑點直徑需<0.5cm取展開劑,將濾紙一端浸入有機溶劑中。濾紙不可觸及試管的內壁,紙條末端浸入展開劑約0.5cm,不能讓試樣點浸入展開劑。噴灑適宜的顯色劑,使各組分顯色。約2cm試樣點04操作方法原點展開后斑點展開劑前沿a1a2bAB分離示意圖實驗結果0505實驗結果通常用比移值Rf衡量各組分的分離程度。RfRf=組分原點中心到展開后的斑點中心的距離a組分原點中心到展開劑前沿的距離bRf范圍0~1。Rf
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