淀粉水解實驗報告

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篇一：淀粉水解糖的制備

淀粉水解糖的制備

一實驗?zāi)康模?/p>

（1）通過實驗，了解淀粉糊化及酶法制備淀粉糖漿的基本原理；

（2）掌握淀粉酶解法制備淀粉糖漿的實驗方法。

二實驗原理

水解淀粉為葡萄糖的方法有三種，即酸解法，酶解法，酶酸法及雙酶法。本實驗采用的是雙酶法將淀粉水解成葡萄糖。首先利用的是α-淀粉酶將淀粉液化，轉(zhuǎn)化為糊精及低聚糖，使淀粉可溶性增加；接著利用糖化酶將糊精及低聚糖進(jìn)一步水解，轉(zhuǎn)化為葡萄糖。

三實驗器材

1，實驗材料

玉米粉α—淀粉酶（2000u／g）糖化酶（50000u／g）

2，儀器設(shè)備恒溫水浴槽真空泵抽濾紙及布氏漏斗

四操作步驟

50克淀粉置于400毫升燒杯中，加水100毫升，攪拌均勻，配成淀粉漿，用5%Na2CO3調(diào)節(jié)pH=—，加入1毫升5%CaCL2溶液，于90-95℃水浴上加熱，并不斷攪拌，淀粉漿由開始糊化直至完全成糊。加入液化型α淀粉酶1克，不斷攪拌使其液化，并使溫度保持在70℃。然后將燒杯移至電爐加熱到95℃至沸，滅活10分鐘。過濾，濾液冷卻到55℃，加入糖化酶1克，調(diào)節(jié)pH=，于60-65℃恒溫水浴中糖化3-4小時，即為淀粉糖漿，若要濃漿，可進(jìn)一步濃縮。稱重

篇二：實驗一淀粉酸水解制糖與還原糖的測定

實驗一淀粉酸水解制糖與還原糖的測定

一、試驗?zāi)康?/p>

①掌握酸法制糖的工藝與方法；②掌握還原糖的測定方法。二、酸水解制糖原理

在淀粉酸水解過程中，有如下三種反應(yīng)：

在水解過程中，淀粉的顆粒結(jié)構(gòu)被破壞，α－－糖苷鍵及α－－糖苷鍵在酸的催化下被切斷，示蹤同位素原子O18研究證明，H＋先與H2O結(jié)合生成H3O＋，H3O＋能與糖苷鍵的氧原子結(jié)合生成不穩(wěn)定化合物Ⅰ，隨后C1－O鍵斷裂生成C1正碳離子Ⅱ，H2O與具有正電荷的C1結(jié)合，再使C1失去H＋，完成糖苷鍵的水解過程。

三、實驗儀器

7230型分光光度計、水浴鍋或電爐、100mL量筒、100mL或50mL容量瓶9個、10mL與2mL移液管各1支、250mL燒杯、250mL錐形瓶2個、布氏漏斗、真空泵、牛皮紙。

四、實驗試劑

淀粉（化學(xué)純）、3,5-二硝基水楊酸（化學(xué)純）、1%硫酸、氫氧化鈉（分析純）、酒石酸鉀鈉、苯酚（化學(xué)純）、亞硫酸鈉（Na2SO3）、葡萄糖（分析純）、無水酒精、粉末CaCO3。

①配制DNS（3,5－二硝基水楊酸）試劑：取克3,5－二硝基水楊酸，g氫氧化鈉，充分溶解于1000mL蒸餾水中。再加入酒石酸鉀鈉克，苯酚（在50℃水浴中融化）5mL，亞硫酸鈉克，完全溶解后盛于棕色瓶中。

②葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取干燥衡重的葡萄糖1g，加1mL1%硫酸，以蒸餾水定容至1000mL。

③1%硫酸；④碘-碘化鉀溶液四、實驗步驟

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定

1

②將各溶量瓶溶液混勻，在水浴鍋或電爐上沸水浴5分鐘，取出后立即用冷水冷卻至室溫，并加水定容，搖勻。

③于550nm處用分光光計測定吸光度A值，以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。

還原糖的制備與測定①淀粉酸水解工藝

取淀粉5~10g，加入250mL錐形瓶，按照固液比1∶10加入1%硫酸，用牛皮紙封好口，在121~125℃水解30min，取出1、2滴置于白瓷板上，加1滴碘-碘化鉀溶液直到不呈藍(lán)色，即為水解終點。冷卻，然后用粉末CaCO3中和至pH值~，減壓過濾，得到含葡萄糖的樣品溶液，測定其體積V0。

②還原糖的測定

平行取待測樣品2份（含糖量為~/L），加入100mL或50mL容量瓶中，再加入3mLDNS試劑，沸水浴5min，冷卻至室溫后，加水定容搖勻，于550nm處用分光光計測量吸光度A，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液所得數(shù)據(jù)建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線，測算待測試樣的平均還原糖濃度，計算淀粉的轉(zhuǎn)化率。

③淀粉的轉(zhuǎn)化率計算

淀粉轉(zhuǎn)化率=

原糖液體積V0?原糖液葡萄糖含量

?100%

投入淀粉量?1000?86%?

注：使用此公式時，應(yīng)注意測定過程中的稀釋倍數(shù)

2

篇三：微生物生理生化反應(yīng)實驗報告

2012年12月4日

姓名系年級2011級生科2班組別四

科目微生物學(xué)實驗題目微生物的生理生化反應(yīng)

微生物的生理生化反應(yīng)

一、實驗?zāi)康?/p>

1.證明不同微生物對各種有機(jī)大分子物質(zhì)的水解能力不同，從而說明不同微生物有著不同的酶系統(tǒng)。2.掌握進(jìn)行微生物大分子物質(zhì)水解試驗的原理和方法。3.了解糖發(fā)酵的原理和在腸細(xì)菌堅定中的重要作用。4.掌握通過糖發(fā)酵鑒別不同微生物的方法。

5.了解吲哚和甲基紅試驗的原理以及其在腸道細(xì)菌鑒定中的意義和方法。

二、實驗儀器與試劑

菌種：枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、普通變形桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：固體淀粉培養(yǎng)基、固體油脂培養(yǎng)基（大分子水解試驗）；葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基、乳糖

發(fā)酵培養(yǎng)基（內(nèi)裝有倒置的德漢氏小管）（糖發(fā)酵試驗）；蛋白胨水培養(yǎng)基（吲哚試驗）；葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基；

試劑：盧戈氏碘液、乙醚、吲哚試劑、甲基紅試劑、蒸餾水、

儀器：酒精燈、接種針、培養(yǎng)皿、試管、試管架、燒杯、量筒、德漢氏小管

三、實驗原理

1.在所有生活細(xì)胞中存在的全部生物化學(xué)反應(yīng)稱之為代謝，代謝過程主要是酶促反應(yīng)過程，由于各種微生物具有不同的酶系統(tǒng)，所以他們能利用的底物不同，或雖利用相同的底物但產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物卻不同，因此可以利用各種生理生化反應(yīng)來鑒別不同的細(xì)菌，尤其是在腸桿菌科細(xì)菌的鑒定中，生理生化試驗占有重要的地位。

2.淀粉的水解：由于微生物對淀粉這種大分子物質(zhì)不能直接利用，必須靠產(chǎn)生的胞外酶將大分子物質(zhì)分解才能被微生物吸收利用.胞外酶主要為水解酶,通過加水裂解大的物質(zhì)為較小的化合物,使其能被運輸至細(xì)胞內(nèi).如淀粉酶水解淀粉為小分子的糊精,雙糖和單糖；而淀粉遇碘液會產(chǎn)生藍(lán)色，因此能分泌胞外淀粉酶的微生物，則能利用其周圍的淀粉，在淀粉培養(yǎng)基上培養(yǎng)用碘處理其菌落周圍不呈藍(lán)色，而是無色透明圈，據(jù)此可分辨微生物能否產(chǎn)生淀粉酶。

3.油脂的水解：在油脂培養(yǎng)基上接種細(xì)菌，培養(yǎng)一段時間后觀察菌苔的顏色，若出現(xiàn)紅色斑點，則說明此中菌可產(chǎn)生分解油脂的酶。

4.糖發(fā)酵試驗：糖發(fā)酵試驗是常用的鑒別微生物的生化反應(yīng),在腸道細(xì)菌的鑒定上尤為重要.絕大多數(shù)細(xì)菌都能利用糖類作為碳源和能源,但是它們在分解糖類物質(zhì)的能力上有很大的差異.有些細(xì)菌能分解某種糖產(chǎn)生有機(jī)酸和氣體;有些細(xì)菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣.例如大腸桿菌能分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣。產(chǎn)酸后再加入溴甲酚指示劑后會使溶液呈黃色，且德漢氏小管中會收集到一部分氣體。若細(xì)菌不能使糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則最后溶液為指示劑的紫色，且德漢氏小管中無氣體。實驗主要用于快速鑒別大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌。

（1）吲哚試驗：是用來檢測吲哚的產(chǎn)生，在蛋白胨培養(yǎng)基中，若細(xì)菌能產(chǎn)生色氨酸酶，則可將蛋白

胨中的色氨酸分解為丙酮酸和吲哚，吲哚與對二甲基苯甲醛反應(yīng)生成玫瑰色的玫瑰吲哚。但并非所有的微生物都具有分解色氨酸產(chǎn)生吲哚的能力，所以吲哚實驗可以作為一個生物化學(xué)檢測

的指標(biāo)。大腸桿菌吲哚反應(yīng)陽性，產(chǎn)氣腸桿菌為陰性。

（2）甲基紅試驗（MR）：某些細(xì)菌在糖代謝過程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者進(jìn)而被分解產(chǎn)生甲酸，

乙酸和乳酸等多種有機(jī)酸，培養(yǎng)基就會變酸，使加入培養(yǎng)基中的甲基紅指示劑由橙黃色轉(zhuǎn)變?yōu)榧t色，即甲基紅反應(yīng)。大腸桿菌為陽性，產(chǎn)氣腸桿菌為陰性。

四、實驗步驟1.淀粉水解實驗

（1）倒平板：按照淀粉培養(yǎng)基配方配制固體淀粉培養(yǎng)基，滅菌，待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右，在酒精

燈火焰旁倒平板，每組兩個平板。（2）用記號筆在平板底部劃成四部分。

（3）接種：在無菌操作臺上，將枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌分別在不

同的部分點種，如圖一所示，注意僅用接種針接觸極少面積的培養(yǎng)基，在平板的反面對應(yīng)部分貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽上分別寫上菌名，以免混淆。（4）培養(yǎng)：將平板倒置，在28℃溫箱中培養(yǎng)兩天。

（5）觀察：取出培養(yǎng)基，觀察各種細(xì)菌的生長情況，打開平板蓋子，滴入少量盧戈氏碘液于平板中，

輕輕旋轉(zhuǎn)平板，使碘液均勻鋪滿整個平板，觀察培養(yǎng)皿中菌落周圍是否有無色透明圈，若有無色透明圈出現(xiàn)，說明淀粉已經(jīng)被水解，為陽性，反之則為陰性。記錄實驗結(jié)果。

圖一：淀粉水解試驗接種示意圖圖二：油脂水解試驗接種示意圖2.油脂水解試驗

（1）倒平板：按照油脂培養(yǎng)基配方配制固體油脂培養(yǎng)基，滅菌，待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右，充分振蕩，

使油脂均勻分布，在酒精燈火焰下倒平板，每組兩個平板。（2）用記號筆在在平板底部劃成四部分。

（3）接種：在無菌操作臺上將枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌分別劃十字線接種于平板相對應(yīng)部分的中心，如圖二所示，并貼好標(biāo)簽，標(biāo)簽上注明菌種的名稱。（4）培養(yǎng)：將平板倒置，在28℃溫箱中培養(yǎng)兩天。

（5）觀察：取出平板，觀察菌苔顏色，如果出現(xiàn)紅斑點，說明脂肪水解，為陽性反應(yīng)。記錄實驗結(jié)果。3.葡萄糖發(fā)酵實驗

（1）培養(yǎng)基的配制：按照糖發(fā)酵培養(yǎng)基配置葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基，分裝至試管中，用膠頭滴管往德漢氏

小管中注滿培養(yǎng)基，再把德漢氏小管倒置放入試管中，注意不要讓德漢氏小管中進(jìn)入空氣，每組五只試管，滅菌。

（2）接種：待培養(yǎng)基冷卻至常溫時，在無菌操作臺上，取葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管2支接入大腸桿菌，

再取兩只接入普通變形桿菌，接種后輕搖試管，使其均勻，防止倒置的小管進(jìn)入氣泡，第五支不接種，作為對照。在各試管外壁上貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽上分別標(biāo)明發(fā)酵培養(yǎng)基的名稱和所接種的細(xì)菌菌名。

（3）培養(yǎng)：把接種后的試管放在試管架上，把試管連同試管架放入培養(yǎng)箱中于28℃下培養(yǎng)兩天。（4）觀察：觀察各試管顏色變化及德漢氏小管中有無氣泡，并記錄實驗結(jié)果。4.乳糖發(fā)酵實驗

（1）培養(yǎng)基的配制：按照糖發(fā)酵培養(yǎng)基配置乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，分裝至試管中，用膠頭滴管往德漢氏小

管中注滿培養(yǎng)基，再把德漢氏小管倒置放入試管中，注意不要讓德漢氏小管中進(jìn)入空氣，每組五只試管，滅菌。

（2）接種：待培養(yǎng)基冷卻至常溫時，在無菌操作臺上，取乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管2支接入大腸桿菌，再

取兩只接入普通變形桿菌，接種后輕搖試管，使其均勻，防止倒置的小管進(jìn)入氣泡第五支不接種，作為對照。在各試管外壁上貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽上分別標(biāo)明發(fā)酵培養(yǎng)基的名稱和所接種的細(xì)菌菌名。（3）培養(yǎng)：把接種后的試管放在試管架上，把試管連同試管架放入培養(yǎng)箱中于28℃下培養(yǎng)兩天。（4）觀察：觀察各試管顏色變化及德漢氏小管中有無氣泡，并記錄實驗結(jié)果。5.吲哚試驗

（1）培養(yǎng)基的配制：按照蛋白胨水培養(yǎng)基配方配制培養(yǎng)基，分裝至試管中，每組五只試管，在高壓蒸氣

鍋內(nèi)滅菌。

（2）接種：待培養(yǎng)基冷卻后，在無菌操作臺上將大腸桿菌接入2支蛋白胨水培養(yǎng)基，產(chǎn)氣腸桿菌接入2

支蛋白胨水培養(yǎng)基，剩余一只試管不接種，作為空白對照，貼好標(biāo)簽。

（3）培養(yǎng)：把接種后的試管放在試管架上，把試管連同試管架放入培養(yǎng)箱中于28℃下培養(yǎng)兩天。（4）觀察：往培養(yǎng)后的蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)加入3~4滴乙醚，搖動數(shù)次，靜置1min，待乙醚上升后，沿試

管避徐徐加入2滴吲哚試劑。在乙醚和培養(yǎng)物之間產(chǎn)生紅色環(huán)狀物為陽性反應(yīng)。觀察加入試劑后試管內(nèi)的顏色反應(yīng)并記錄實驗結(jié)果。6.甲基紅試驗

（1）培養(yǎng)基的配制：按照葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基配方配制培養(yǎng)基，分裝至試管中，每組五只試管，在高

壓蒸氣鍋內(nèi)滅菌。

（2）接種：待培養(yǎng)基冷卻后，在無菌操作臺上將大腸桿菌接入2支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，產(chǎn)氣腸桿菌

接入2支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，剩余一只試管不接種，作為空白對照，貼好標(biāo)簽。（3）培養(yǎng)：把接種后的試管放在試管架上，把試管連同試管架放入培養(yǎng)箱中于28℃下培養(yǎng)兩天。（4）觀察：培養(yǎng)兩天后后，將每支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基培養(yǎng)物內(nèi)加入2滴甲基紅試劑，培養(yǎng)基變?yōu)榧t

色者為陽性，變?yōu)辄S色者為陰性。觀察試管內(nèi)的顏色變化，并記錄實驗結(jié)果。

五、實驗結(jié)果及分析

實驗結(jié)果記錄

淀粉水解試驗:

油脂水解試驗:

葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基：

乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基:

表4.乳糖發(fā)酵試驗結(jié)果（“+”表示陽性，“—”表示陰性）

吲哚試驗:

甲基紅試驗:

六、注意事項

1.淀粉水解試驗中，觀察各種細(xì)菌生長情況時，滴入少量盧戈氏碘液于平板中，應(yīng)輕輕旋轉(zhuǎn)平板，使碘

液均勻鋪滿整個平板。

2.油脂水解試驗中，制備固體油脂培養(yǎng)基時，應(yīng)充分搖蕩，使油脂均勻分布。3.接種前要用記號筆做好標(biāo)記，接種時要對號接種，以免接錯菌種，造成混亂。

4.糖發(fā)酵試驗中，接種后要輕緩搖動試管，使其均勻，防止倒置的小管進(jìn)入