方法學(xué)評價(jià)實(shí)驗(yàn)--重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)四方法學(xué)評價(jià)實(shí)驗(yàn)—重復(fù)性實(shí)驗(yàn)二方法學(xué)評價(jià)實(shí)驗(yàn)-重復(fù)性試驗(yàn)

1、精密度：是指同一標(biāo)本在一定條件下多次重復(fù)測定得到的一系列單次測定值之間接近程度。反應(yīng)隨機(jī)誤差大小的指標(biāo)，重復(fù)性試驗(yàn)是評價(jià)方法精密度的常用方法。2、重復(fù)性試驗(yàn)：將同一份標(biāo)本分成數(shù)份實(shí)驗(yàn)標(biāo)本，進(jìn)行多次分析測定（一般為20次），目的在于評價(jià)或驗(yàn)證試驗(yàn)方法的隨機(jī)誤差或不精密度。3、批內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)：在盡可能短的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行5輪，每輪4次測定4、日內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)：在一天內(nèi)作5輪，每輪4次，獲得20個(gè)數(shù)據(jù)。5、日間重復(fù)性試驗(yàn)：每天測定一份，連測20天。原理將同一份標(biāo)本分成數(shù)份，在相同條件下（用同樣的方法，同一種試劑和標(biāo)準(zhǔn)品，同一臺(tái)儀器，在同一實(shí)驗(yàn)室由同一人操作），在盡可能短的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行m輪，每輪n次重復(fù)測定，以獲得批內(nèi)精密度數(shù)據(jù)的試驗(yàn)方法（一般為20次，5輪，每輪4次）。其結(jié)果能反映各次測定結(jié)果互相接近的程度，用于客觀評價(jià)測定方法隨機(jī)誤差的大小。一、己糖激酶法測定血清葡萄糖HK法測定葡萄糖的原理還原型NADPH的生成與葡萄糖濃度成正比，在波長340nm監(jiān)測NADPH吸光度，可計(jì)算血清中葡萄糖的含量。葡萄糖?+?ATP←－－→葡萄糖-6-磷酸+?ADP己糖激酶葡萄糖-6-磷酸+NADP+←－－－－－－→6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+葡萄糖-6-磷酸脫氫酶HK法測定血清葡萄糖試劑盒5.55mmol/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液分光光度計(jì)水浴箱試管、吸管等臨床樣本：根據(jù)醫(yī)學(xué)決定水平收集臨床混合血清樣本三份（2.8、6.7、11.1mmol/L）（無肉眼可見溶血、脂血、黃疸）【試劑與器材】HK工作液配制：4R1+1R2

HK法加入物質(zhì)（ml）B（空白管）S（標(biāo)準(zhǔn)管）U（標(biāo)本管）血清0.02葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0.02去離子水0.02HK工作液1.01.01.0混勻，37℃水浴，10分鐘，340nm測吸光度微量進(jìn)樣器量程0-100μl

↓↓0μl20μl【注意事項(xiàng)】1.測定標(biāo)本以草酸鉀-氟化鈉為抗凝劑的血漿較好。因?yàn)槠洳粌H能抗凝，還能抑制糖分解2.本法用血量甚微，操作中應(yīng)先加試劑后加標(biāo)本，再吸試劑反復(fù)沖洗吸管（3次）3.使用微量進(jìn)樣器前應(yīng)浸在溶液中來回拉幾次，將針尖內(nèi)氣泡排盡。使用時(shí)容量指示芯拉動(dòng)不得超過商標(biāo)圖案，謹(jǐn)防拉出。使用后應(yīng)立刻進(jìn)行清洗，防止芯子卡死、針尖堵塞。

次數(shù)輪數(shù)123412345血清樣本按照前述HK法血糖測定方法進(jìn)行20次（5輪4次）平行測定。【操作步驟】【原始數(shù)據(jù)記錄】【數(shù)據(jù)處理】

Au

血清葡萄糖（mmol/L）=×5.55As

次數(shù)輪數(shù)1234123451.檢驗(yàn)20次測定數(shù)據(jù)中的離群值，如存在異常值應(yīng)剔除。對小樣本量的測定，可以用Grubbs檢驗(yàn)，其統(tǒng)計(jì)學(xué)公式是：

Xd為離群值；X、s分別為包括離群值在內(nèi)的均值、標(biāo)準(zhǔn)差，如果計(jì)算的G值大于系數(shù)表中相應(yīng)顯著性水平的a和測定次數(shù)n時(shí)的臨界值Ga.n，則將Xd作為異常值舍去。G=測定次數(shù)顯著性水平測定次數(shù)顯著性水平(n)0.050.01(n)0.050.01112.2342.484372.8343.204122.2852.549382.8453.216132.3312.607392.8563.228142.3722.658402.8673.239152.4092.705412.8773.250162.4432.747422.8863.261172.4752.785432.8963.272182.5042.821442.9053.282192.5312.853452.9143.292202.5572.884462.9233.301212.5802.912472.9313.310222.6032.939482.9403.319232.6242.963492.9483.328242.6442.987502.9563.337252.6633.009603.033.41（1）只有一個(gè)離群值的情況：設(shè)有n個(gè)測定數(shù)（X1<‥<Xn)，其中X1為離群值，即可利用上述公式，直接對X1進(jìn)行檢驗(yàn)。（2）如果離群值是兩個(gè)或兩個(gè)以上，分布在均數(shù)的同一側(cè)，例如X1、X2都是離群值，則首先檢驗(yàn)最內(nèi)側(cè)的一個(gè)數(shù)據(jù)（X2），即通過檢驗(yàn)決定X2是否應(yīng)該舍棄。如果X2應(yīng)該舍棄，X1自然該舍棄。如果X2不應(yīng)舍去，再檢驗(yàn)X1。（3）如果離群值是兩個(gè)或兩個(gè)以上，分布于均數(shù)兩側(cè)，則分別檢驗(yàn)X1和Xn是否應(yīng)該舍去。如有一個(gè)數(shù)據(jù)決定舍去，那么再檢驗(yàn)另一個(gè)數(shù)據(jù)時(shí)，測定次數(shù)應(yīng)該作為減少一次來處理，而且此時(shí)應(yīng)選擇99%的置信水平式中Si2為5輪各次測定值的方差，即：Si2=(3)變異系數(shù)(CV%)＝×100%（1）批內(nèi)均數(shù)=（2）批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差（Sw）=2.按照批內(nèi)精密度的計(jì)算公式計(jì)算5輪每輪4次測定值的平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差(S)和變異系數(shù)(CV

)【評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)】

批內(nèi)不精密度的判斷限是1/4允許總誤差（TEa）范圍，小于或等于判斷限的，檢測系統(tǒng)的不精密度可接受；大于判斷限的表示不精密度不符合要求。允許誤差范圍可根據(jù)CLIA88規(guī)定的能力比對試驗(yàn)的TEa確定，血糖的可接受范圍是靶值±0.33mmol/L，或CV<2.5%則方法精密度可接受。TEa=±1/4[（參考值上限–參考值下限）/參考值均值]×100%【注意事項(xiàng)】1.為了縮小測定值的離散程度，操作中必須準(zhǔn)確加人標(biāo)準(zhǔn)液及標(biāo)本量，并嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間，準(zhǔn)確讀數(shù)。

2.引起偶然誤差的原因很多，儀器、溫度、吸量、混勻、標(biāo)準(zhǔn)品的穩(wěn)定性等等，應(yīng)排除這些因素后才能把誤差歸于方法學(xué)。3.用于評價(jià)方法精密度的變異系數(shù)應(yīng)該是剔除離群值之后計(jì)算得到的。醫(yī)學(xué)決定水平2.8、7.0、11.2mmol/L（6.7？？？）

美國實(shí)驗(yàn)室臨床實(shí)驗(yàn)室修正案CLIA^88推薦的臨床化學(xué)項(xiàng)目的允許總誤差TEa

醫(yī)學(xué)決定水平2.8mmol/L7.0mmol/L11.2mmol/L

TEa0.336μmol/L10%10%

批內(nèi)不精密度CV變異系數(shù)或標(biāo)準(zhǔn)差小于或等于TEa的1/4

所以1/4*10%=2.5%即CV小于等于2.5%？？？？

嚴(yán)重溶血Hb2-5.12g/L致使紅細(xì)胞內(nèi)有機(jī)磷脂酸及一些酶類釋放，消耗NADP+，可使葡萄糖測定值下降。

精密度通常以“不精密度”【標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)