差示紫外分光光度法測(cè)定諾氟沙星排泄率

差示紫外分光光度法測(cè)定諾氟沙星排泄率

諾氟沙星也被稱為氟酸，其化學(xué)名為1-烷基-6-氟1、4-二羥基-4-氧-7-（1-）基-3-硝基溶膠酸。諾氟沙星抗菌譜廣,抗菌作用強(qiáng),臨床上主要用于尿路感染、呼吸道感染、胃腸道感染等。口服后吸收迅速,口服劑量的1/3以原型藥物隨尿排泄。諾氟沙星在尿中的測(cè)定方法,主要有微生物法、紫外分光光度法、熒光分光光度法和高效液相色譜法。作者利用差示紫外分光光度法進(jìn)行測(cè)定,可直接消除尿樣中其他物質(zhì)的干擾,準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好,對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求低,為臨床檢驗(yàn)提供了一個(gè)可行的分析方法。1實(shí)驗(yàn)部分1.1諾氟沙星膠囊UV—265FW分光光度計(jì)(日本島津),WFZ800—D2紫外分光光度計(jì)(北京第二光學(xué)儀器廠),電光分析天平(上海天平儀器廠),諾氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):450—9807),諾氟沙星膠囊(遼寧省錦州市生物化學(xué)制藥廠,批號(hào):96004273;200mg/粒),鹽酸和氫氧化鈉均為分析純?cè)噭?.2試驗(yàn)條件的選擇1.2.1諾氟沙星的吸收光譜和光譜特征精密稱取諾氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品約30mg,置250mL容量瓶中,以HCl(0.01mol/L)溶液溶解并稀釋至刻度,搖勻。精密量取2等份,每份5.0mL,置100mL容量瓶中,分別以HCl(0.01mol/L)和NaOH(0.01mol/L)稀釋至刻度,搖勻。以水為空白,分別在波長(zhǎng)200～400nm掃描。結(jié)果為:諾氟沙星的吸收光譜因pH值不同有明顯的差異,并在波長(zhǎng)276～300nm有最大的吸收度差值(ΔA),且酸液的吸收度大于堿液的吸收度。再以酸液為樣品,以堿液為參比,在波長(zhǎng)276～300nm,測(cè)定吸收度差值(ΔA),其結(jié)果為:276.6nm/0.149、283nm/0.312、285nm/0.325、285.5nm/0.324、286nm/0.318、287nm/0.303。測(cè)定數(shù)據(jù)表明:波長(zhǎng)285nm下測(cè)得的ΔA最大,故選擇285nm為測(cè)定波長(zhǎng)。1.2.2鹽酸吸收度的測(cè)定以氫氧化鈉(0.01mol/L)為參比溶液,以各種不同酸度(0.005、0.01、0.02、0.05、0.1mol/L)的鹽酸溶液為樣品液,于285nm測(cè)定吸收度差值(ΔA)分別為0.325、0.325、0.339、0.338、0.337。結(jié)果表明采用0.02mol/L鹽酸時(shí)ΔA最大。故選擇鹽酸濃度為0.02mol/L。1.2.3模擬堿吸收度差值以鹽酸(0.02mol/L)為樣品液,以各種不同堿度(0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50mol/L)的氫氧化鈉溶液為參比液,于285nm測(cè)定吸收度差值(ΔA)分別為0.062、0.382、0.380、0.363、0.371、0.361。結(jié)果表明采用0.02mol/L氫氧化鈉時(shí)ΔA最大。故選擇氫氧化鈉濃度為0.02mol/L。1.2.4吸收度的測(cè)定精密稱取諾氟沙星約15mg,置100mL容量瓶中,加鹽酸(0.02mol/L)溶液溶解定容。精密量取2等份,每份5mL,各置100mL容量瓶中,分別用鹽酸(0.02mol/L)和氫氧化鈉(0.02mol/L)稀釋至刻度,以堿液為參比液,以酸液為樣品液,在波長(zhǎng)285nm,分別在0、1、2、3、4、6、8h測(cè)定其吸收度差值(ΔA),結(jié)果為0.396、0.406、0.398、0.404、0.386、0.391、0.336,表明樣品在6h內(nèi)穩(wěn)定。1.3分析的效率指標(biāo)的確定1.3.14%鹽酸/鈉標(biāo)準(zhǔn)品溶液精密稱取諾氟沙星約40mg,置100mL容量瓶中,加鹽酸(0.02mol/L)溶液溶解定容,搖勻。精密量取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.5mL上述溶液各2份,置于100mL容量瓶中,加空白尿2mL,分別以鹽酸(0.02mol/L)和氫氧化鈉(0.02mol/L)稀釋定容,搖勻。以酸液為樣品液,以堿液為參比液,于波長(zhǎng)285nm測(cè)定吸收度差值(ΔA),線性回歸后得回歸方程為ΔA=0.0447C+0.0808(r=0.9971),諾氟沙星尿藥濃度在2～12μg/mL呈線性。1.3.2檢測(cè)多l(xiāng)m的a配制諾氟沙星濃度為4、6、8μg/mL的酸堿溶液各6份,按“3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制”項(xiàng)下操作,求得ΔA值的日內(nèi)RSD分別為1.9%、0.8%和0.9%(n=6),日間RSD分別為3.4%、4.2%、1.5%(n=6)。1.3.3吸光度測(cè)定配制諾氟沙星濃度為4、6、8μg/mL的酸堿溶液各2份,按“3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制”項(xiàng)下操作。于285nm測(cè)定吸收度差值(ΔA)。計(jì)算回收率為97.6%,RSD為4.7%(n=6)。1.4尿量的測(cè)定4名男性健康受試者,實(shí)驗(yàn)前1周禁藥,服藥前禁食10h。早晨排尿后,用200mL溫水送服諾氟沙星膠囊1粒(200mg),收集1、2、4、6、8、12、24h的尿液,準(zhǔn)確記錄尿量,過(guò)濾。精密量取濾液1mL各2份,分別置于50mL量瓶中,依法測(cè)定尿液中諾氟沙星濃度,計(jì)算累積排泄量和排泄率(見(jiàn)表1)。2紫外分光光度法a.諾氟沙星主要以原形藥物經(jīng)尿排泄,24h后尿藥排泄率為30.49%～31.96%,與文