雞精液稀釋液保存效果的影響因素

雞精液稀釋液保存效果的影響因素

雞的人工繁殖技術(shù)不僅顯著提高了雞和蛋的繁殖率，而且顯著降低了生產(chǎn)成本。由于母雞數(shù)量大,輸精頻率高,且公雞的采精量少,精子密度高,因此精液需要稀釋。精液稀釋后,能使精子均勻分布,精液量增加,保證每次輸精有足夠劑量的精子,便于給更多母雞輸精,從而提高公雞的利用率,減少飼養(yǎng)成本,增加經(jīng)濟(jì)效益。同時(shí)精液只有經(jīng)稀釋處理后,才能進(jìn)行有效的保存和運(yùn)輸。筆者就影響雞精液稀釋保存效果的相關(guān)因素,如稀釋液物質(zhì)組成、pH值、滲透壓、稀釋比例、稀釋操作、輸精頻率等作一綜述,以期指導(dǎo)制備高受精率的雞精液稀釋液,促進(jìn)現(xiàn)代養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展。1稀釋液的配制當(dāng)雞精液稀釋后,精子的運(yùn)動(dòng)度、ATP利用、氣體交換、離子平衡等都會(huì)受到稀釋液成分和稀釋比例的影響,尤其是高倍稀釋時(shí)。稀釋液保存效果與稀釋液物質(zhì)組成密切相關(guān)。組成最簡(jiǎn)單的稀釋液為生理鹽水和濃度5.7%葡萄糖,而復(fù)雜的稀釋液則成分較多,復(fù)方稀釋液保存效果普遍優(yōu)于單方稀釋液。常用雞精液稀釋液的成分見(jiàn)表1。資料表明,在家禽稀釋液中果糖優(yōu)于葡萄糖,并證實(shí)精子分解葡萄糖的速度很快,而分解果糖較慢,故對(duì)精子的有害酸性程度就非常輕微。張兆旺將三種糖(葡萄糖、蔗糖、果糖)在3~5℃下進(jìn)行精液保存試驗(yàn),結(jié)果表明,果糖稀釋液中精子生存指數(shù)、存活時(shí)間和畸形率優(yōu)于蔗糖,葡萄糖效果最差。谷氨酸鈉對(duì)精子有保護(hù)作用,在葡萄糖-磷酸鹽類(lèi)雞精液稀釋液中,添加谷氨酸鈉優(yōu)于檸檬酸鈉,檸檬酸鈉又優(yōu)于氯化鉀;谷氨酸鈉在單獨(dú)配制稀釋液時(shí)以每100ml含2.40~2.47g為宜。另外,適量的K+、Mg2+對(duì)雞精子的壽命有延長(zhǎng)作用。少量的K+是維持精子正常機(jī)能所必需的;Mg2+具有保護(hù)精子運(yùn)動(dòng)和延長(zhǎng)其壽命的功能。在雞精液稀釋液中加入青霉素、鏈霉素,可以大大減少種雞輸卵管囊膜炎的發(fā)病率,對(duì)提高種蛋受精率和種雞產(chǎn)蛋率有顯著作用。2影響雞座液儲(chǔ)存效果的因素2.1液刑中精子的生存狀況滲透壓是雞精液稀釋液的重要參數(shù)之一。雞精液的滲透壓一般為330~420mOsm/kg,也有測(cè)定結(jié)果為295~360mOsm/kg,張兆旺等測(cè)定了雞精液的滲透壓值為347mOsm/kg。理論上,稀釋液與精液等滲時(shí),精子形態(tài)正常,適于精子生存。黃美玉等用267、368、567mOsm/kg3種不同滲透壓稀釋的精液輸精,結(jié)果368mOsm/kg組種蛋受精率顯著高于其他兩組。同時(shí)發(fā)現(xiàn),在30℃保存條件下,隨著稀釋液滲透壓的升高或降低,精子生存指數(shù)下降,而與雞精液滲透壓相近的稀釋液中精子活力較好,存活時(shí)間較長(zhǎng)。張兆旺等篩選出的3個(gè)優(yōu)等稀釋液的滲透壓在352~362mOsm/kg,3個(gè)良等稀釋液的滲透壓在304~385mOsm/kg,認(rèn)為稀釋液以等滲時(shí)為最好。同時(shí)還發(fā)現(xiàn),在516~576mOsm/kg的高滲環(huán)境中,雞精子會(huì)出現(xiàn)“暫時(shí)性休克”現(xiàn)象,即剛稀釋后,觀察活力為零,隨時(shí)間的延長(zhǎng),活力逐漸回升,但精子生存指數(shù)較低,說(shuō)明雞精子對(duì)高滲環(huán)境的適應(yīng)需要一定時(shí)間,且適應(yīng)能力很有限。張兆旺還觀察到滲透壓值與精子頭部畸形類(lèi)型高度相關(guān),與精子頭部彎曲且膨脹百分?jǐn)?shù)相關(guān)系數(shù)為-0.93,與精子頭部單純彎曲百分?jǐn)?shù)的相關(guān)系數(shù)為0.94。精液稀釋液最佳的滲透壓可能不是一個(gè)定值,而是因稀釋液的成分不同而有變化,如蔗糖和谷氨酸鈉在雞精液稀釋液中也具有延長(zhǎng)精子壽命的特殊作用,可以部分地緩解低滲透壓的不良影響。楊保田等觀察到等滲環(huán)境下精子在檸檬酸鈉溶液中的生存指數(shù)較在葡萄糖、蔗糖和氯化鈉溶液中要高,在稀釋液溶質(zhì)相同的條件下,較低滲透壓的精子活力和生存指數(shù)極顯著高于較高滲透壓,其畸形率顯著低于較高滲透壓。2.2雞精液的稀釋由于雞精子代謝很強(qiáng)烈,能量消耗快,同時(shí)因代謝產(chǎn)物的積累,改變了pH值,導(dǎo)致某些酶的活性被抑制,致使精子喪失受精能力,因此稀釋液pH值很重要。欲使雞精液保存效果好,稀釋液的pH值應(yīng)與其生理范圍盡量靠近(6.8~7.2)。因精子代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一些物質(zhì)使pH值發(fā)生偏離,會(huì)對(duì)精子產(chǎn)生不利影響,只有使精細(xì)胞處在一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的、適宜的環(huán)境中,其代謝才能正常進(jìn)行。因此,雞精液稀釋液緩沖體系的存在是必不可少的。成分全面且緩沖能力強(qiáng)的稀釋液有利于精子活力的維持。為了最大限度地保存精子活率,國(guó)外學(xué)者還提出用兩步稀釋法,即先用pH為6.5的磷酸鹽緩沖液稀釋雞精液,以抑制其新陳代謝,授精時(shí)再用pH為7.5的磷酸鹽緩沖液第2次稀釋,以激活精子的運(yùn)動(dòng)度。不過(guò),這樣操作很不方便,缺乏實(shí)用性。2.3種蛋受精率測(cè)定精液稀釋的最主要目的是增加精液量,稀釋比例越高,精液量增加得越多,種公雞利用率越高。但隨著稀釋倍數(shù)的提高,精液中營(yíng)養(yǎng)保護(hù)成分的濃度和精子濃度也隨之下降。因此,過(guò)高比例的稀釋會(huì)降低受精率。胡松庭等對(duì)雞精液進(jìn)行1∶1、1∶2和1∶3稀釋,結(jié)果稀釋比例為1∶1和1∶2時(shí),種蛋受精率差異不顯著,其中1∶1稀釋組效果最佳,顯著高于1∶3稀釋處理組。尹華貴以1%NaCl和5.7%葡萄糖為稀釋液,研究不同稀釋比、輸精量對(duì)川牧土雞受精率、孵化率的回歸程度。結(jié)果表明,1%NaCl以1∶1稀釋,每次輸100μl,6d輸精1次,效果最佳。簡(jiǎn)仿輝等用Lake氏液以1∶1比例對(duì)優(yōu)質(zhì)麻羽肉用種公雞的精液進(jìn)行稀釋,稀釋后不經(jīng)保存進(jìn)行輸精,將試驗(yàn)組的輸精量(稀釋后)分別確定為30、40、50μl,而對(duì)照組原精液輸30μl,輸精量為30μl的試驗(yàn)組種蛋受精率顯著降低,這可能是由于輸精的總精子數(shù)過(guò)少引起的。目前生產(chǎn)上常采用1∶1~1∶3稀釋,5~7d輸精1次,每只母雞每次輸稀釋后的精液100μl。2.4精子的稀釋種公雞精液的稀釋要遵循以下原則:一是等溫稀釋,就是要把稀釋液的溫度調(diào)節(jié)到與精液相等,最多相差不能超過(guò)2℃,否則,精子成活率將受到不良影響,溫差過(guò)大,還會(huì)導(dǎo)致對(duì)精子的“低溫打擊”,精子的結(jié)構(gòu)和功能將受到很大損傷;二是及時(shí)稀釋,就是采完精液后立即進(jìn)行稀釋,盡可能縮短原精液離體放置的時(shí)間,因?yàn)樵壕用芏却?一遇到氧氣,代謝加劇,而原精液中能源物質(zhì)很少,緩沖體系能力有限,精子會(huì)因能源枯竭和代謝產(chǎn)物堆積的毒性而喪失受精能力;三是按將稀釋液加入精液的方向稀釋,因?yàn)榫佑幸环N生理特性,就是當(dāng)一次稀釋比例過(guò)大時(shí),會(huì)導(dǎo)致精子休克而喪失受精能力。如果錯(cuò)誤地把精液加入稀釋液,則最初的幾滴精液中的精子就會(huì)受到“稀釋打擊”。若按要求把稀釋液加入精液,最初加入的稀釋液對(duì)精子而言,稀釋比例尚很小,幾乎不會(huì)對(duì)精子造成大的損傷,所以是安全的。2.5在精子庫(kù)與稀釋液的配制無(wú)論自然交配或人工授精,雞精子會(huì)很快沿輸卵管上行并到達(dá)輸卵管子宮一陰道交界處的儲(chǔ)精腺(Sperm-hostgland)內(nèi),精子能在此生存24d之久,并具有受精能力。這主要是因?yàn)檩斅压芤褐泻胸S富的蛋白質(zhì)、糖類(lèi)、電解質(zhì)及水等物,輸卵管上皮細(xì)胞還以其頂部質(zhì)膜唾液酸化的多糖-蛋白復(fù)合物暫時(shí)黏附精子頭部,在此處形成精子庫(kù),不僅確保了適當(dāng)條件下有一定數(shù)量的精子到達(dá)受精部位,而且還有益于精子獲得營(yíng)養(yǎng),排除積累的代謝廢物,而保持受精力。因此,人工授精后受精能力持續(xù)時(shí)間依賴(lài)于輸入精子庫(kù)的精子數(shù)量,數(shù)量愈多,受精持續(xù)時(shí)間愈久。除此之外,精液中本身含有很多保護(hù)物質(zhì),如VC、VE、Se-GSH-Px、谷胱甘肽等,能防止雞精子質(zhì)膜的脂質(zhì)過(guò)氧化,從而阻止精子衰老死亡。但精液稀釋后,這些抗氧化劑濃度大大降低,保護(hù)作用微乎其微。如果在稀釋液中添加維生素、過(guò)氧化物歧化酶(SOD)等抗氧化劑可以抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng),增強(qiáng)稀釋液的保存效果,就可能延長(zhǎng)精子的壽命,從而延長(zhǎng)輸精間隔天數(shù)。這將大大降低勞動(dòng)強(qiáng)度和生產(chǎn)成本。目前,國(guó)內(nèi)使用的稀釋液成分極為簡(jiǎn)單,多為生理鹽水、葡萄糖注射液、味精溶液等,不能對(duì)精子進(jìn)行充分保護(hù),且稀釋后必須立即輸精,輸精間隔只能達(dá)到4~7d。在一些發(fā)達(dá)國(guó)家已經(jīng)開(kāi)始研究新型稀釋液,即通過(guò)添加特殊成分以延長(zhǎng)精子存活時(shí)間,使雞人工授精的輸精間隔達(dá)到12~14d而不降低受精率。3稀釋液的使用效果雖然國(guó)內(nèi)許多