污水微生物的指標(biāo)檢查法

污水總大腸菌群的檢查辦法一、采樣辦法

用采水器或其它滅菌容器采用污水樣1000毫升，放入滅菌瓶內(nèi)，如果是經(jīng)加氯解決的污水，需加1.5%硫代硫酸鈉5毫升中和余氯。二、檢查辦法

總大腸菌群系指一群需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌在37℃恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24小時(shí)，能使乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣?？偞竽c菌群數(shù)系指每升污水中，所含的總大腸菌群的數(shù)目。

（一）初發(fā)酵實(shí)驗(yàn)：以無菌操作將各盛有3倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液5毫升的5支發(fā)酵管內(nèi)，各接種污水樣10毫升，將各盛有單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液約10毫升5支的發(fā)酵管內(nèi)，各接種污水樣1毫升，再將各盛有單料乳糖蛋白臟培養(yǎng)液約10毫升的5支發(fā)酵管內(nèi)，各接種1∶10稀釋的污水樣1毫升（相稱于原污水樣0.1毫升）。將此15支管已接種的發(fā)酵管置于37℃恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24小時(shí)。

（二）平板分離：經(jīng)培養(yǎng)24小時(shí)后，將產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的發(fā)酵管，分別接種于伊紅美蘭培養(yǎng)基或品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，置37℃恒溫箱培養(yǎng)18～24小時(shí)，挑選符合下列特性的菌落，取菌落的一小部分，進(jìn)行涂片、革蘭氏染色、鏡檢。

1伊紅美蘭培養(yǎng)基上的菌落色澤：

（1）深紫黑色，含有金屬光澤的菌落；

（2）紫黑色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；

（3）淡紫紅色、中心色較深的菌落。

2品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上的菌落色澤：

（1）紫紅色，含有金屬光澤的菌落；

（2）深紅色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；

（3）淡紅色，中心色較深的菌落。

（三）復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)：涂片、鏡檢的菌落，如為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，則挑取上述典型菌落1～3個(gè)接種于一支單料乳糖發(fā)酵管內(nèi)，然后置于37℃恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24小時(shí)，產(chǎn)酸產(chǎn)氣者（涉及小量產(chǎn)氣）即證明有大腸菌群存在。

根據(jù)證明有大腸菌群存在的陽性管數(shù)，核對(duì)總大腸菌群近似數(shù)（MpN）檢索表（附表1.1）即是每升污水中的大腸菌群數(shù)。此MPN表中所列數(shù)值系指100毫升水樣中的細(xì)菌數(shù)，因此需將表中的數(shù)值再乘10、為每1000毫升水中的細(xì)菌數(shù)。舉例：某一污水樣接種10毫升的5支管中有5管為陽性；接種1毫升的5支管中有2管為陽性；接種1∶10稀釋水樣1毫升（即原污水樣0.1毫升）的5支管皆為陰性，即成果為5、2、0，查附表1.1得知100毫升污水中總大腸菌群數(shù)為49個(gè)，即1000毫升污水中總大腸菌群數(shù)為49×10＝490個(gè)。

總大腸菌群近似數(shù)（MPN）檢索表附表接種量(毫升)每100毫升水

樣中總大腸菌

群近似數(shù)接種量(毫升)每100毫升水

樣中總大腸

菌群近似數(shù)1010.11010.10

0

0

0

0

00

0

0

0

0

00

1

2

3

4

50

2

4

5

7

90

0

0

0

0

04

4

4

4

4

40

1

2

3

4

58

9

11

13

15

170

0

0

0

0

01

1

1

1

1

10

1

2

3

4

52

4

6

7

9

110

0

0

0

0

05

5

5

5

5

50

1

2

3

4

59

11

13

15

17

190

0

0

0

0

02

2

2

2

2

20

1

2

3

4

54

6

7

9

11

131

1

1

1

1

10

0

0

0

0

00

1

2

3

4

52

4

6

8

10

120

0

0

0

0

03

3

3

3

3

30

1

2

3

4

56

7

9

11

13

151

1

1

1

1

11

1

1

1

1

10

1

2

3

4

54

6

8

10

12

14（總接種量55.5毫升，其中5份10毫升水樣；5份1毫升水樣；5份0.1毫升水樣）

續(xù)表1接種量(毫升)每100毫升水樣中總大腸菌群近似數(shù)接種量(毫升)每100毫升水樣中總大腸菌群近似數(shù)1010.11010.11

1

1

1

1

12

2

2

2

2

20

1

2

3

4

56

8

10

12

15

172

2

2

2

2

20

0

0

0

0

00

1

2

3

4

55

7

9

12

14

161

1

1

1

1

13

3

3

3

3

30

1

2

3

4

58

10

12

15

17

192

2

2

2

2

21

1

1

1

1

10

1

2

3

4

57

9

12

14

17

191

1

1

1

1

14

4

4

4

4

40

1

2

3

4

511

13

15

17

19

222

2

2

2

2

22

2

2

2

2

20

1

2

3

4

59

12

14

17

19

221

1

1

1

1

15

5

5

5

5

50

1

2

3

4

513

15

17

19

22

242

2

2

2

2

23

3

3

3

3

30

1

2

3

4

512

12

17

20

22

25（總接種量55.5毫升，其中5份10毫升水樣；5份1毫升水樣；5份0.1毫升水樣）

續(xù)表2接種量(毫升)每100毫升水樣中總大腸菌群近似數(shù)接種量(毫升)每100毫升水樣中總大腸菌群近似數(shù)1010.11010.12

2

2

2

2

24

4

4

4

4

40

1

2

3

4

515

17

20

23

25

283

3

3

3

3

32

2

2

2

2

20

1

2

3

4

514

17

20

24

27

312

2

2

2

2

25

5

5

5

5

50

1

2

3

4

517

20

23

26

29

323

3

3

3

3

33

3

3

3

3

30

1

2

3

4

517

21

24

28

32

363

3

3

3

3

30

0

0

0

0

00

1

2

3

4

58

11

13

16

20

233

3

3

3

3

34

4

4

4

4

40

1

2

3

4

521

24

28

32

36

403

3

3

3

3

31

1

1

1

1

10

1

2

3

4

511

14

17

20

23

273

3

3

3

3

35

5

5

5

5

50

1

2

3

4

525

29

32

37

41

45（總接種量55.5毫升，其中5份10毫升水樣；5份1毫升水樣；5份0.1毫升水樣）續(xù)表3接種量(毫升)每100毫升水樣中總大腸菌群近似數(shù)接種量(毫升)每100毫升水樣中總大腸菌群近似數(shù)1010.11010.14

4

4

4

4

40

0

0

0

0

00

1

2

3

4

513

17

21

25

30

364

4

4

4

4

44

4

4

4

4

40

1

2

3

4

534

40

47

54

62

694

4

4

4

4

41

1

1

1

1

10

1

2

3

4

517

21

26

31

36

424

4

4

4

4

45

5

5

5

5

50

1

2

3

4

541

48

56

64

72

814

4

4

4

4

42

2

2

2

2

20

1

2

3

4

522

26

32

38

44

505

5

5

5

5

50

0

0

0

0

00

1

2

3

4

523

31

43

58

76

954

4

4

4

4

43

3

3

3

3

30

1

2

3

4

527

33

39

45

52

595

5

5

5

5

51

1

1

1

1

10

1

2

3

4

533

46

63

84

110

130（總接種量55.5毫升，其中5份10毫升水樣；5份1毫升水樣；5份0.1毫升水樣）

續(xù)表4接種量(毫升)每100毫升水樣中總大腸菌群近似數(shù)接種量(毫升)每100毫升水樣中總大腸菌群近似數(shù)1010.11010.15

5

5

5

5

52

2

2

2

2

20

1

2

3

4

549

70

94

120

150

1805

5

5

5

5

54

4

4

4

4

40

1

2

3

4

5130

170

220

280

350

4305

5

5

5

5

53

3

3

3

3

30

1

2

3

4

579

110

140

180

210

2505

5

5

5

5

55

5

5

5

5

50

1

2

3

4

5240

350

540

920

1600

>1600（總接種量55.5毫升，其中5份10毫升水樣；5份1毫升水樣；5份0.1毫升水樣）污水沙門氏菌屬和志賀氏菌屬的檢查辦法一、樣品解決

水樣500毫升，加入滅菌的10%無水碳酸鈉溶液2毫升，混合后，再加入滅菌的10%硫酸鐵溶液1.75毫升，混合均勻。靜置1小時(shí)，傾去上清液（沉淀物約為40毫升左右）。進(jìn)行沙門氏菌屬和志賀氏菌屬培養(yǎng)。

二、增菌培養(yǎng)

1沙門氏菌屬：吸取樣品解決后的沉淀物20毫升，加于20毫升雙料亞硒酸鹽（SF）增菌液內(nèi)，也可加于亞硒酸鹽甘露醇（SFM）或氯化鎂孔雀綠（MM）增菌液內(nèi)。置于37℃或41℃恒溫箱；培養(yǎng)24小時(shí)。

2志賀氏菌屬：吸取樣品解決后的沉淀物20毫升，加于20毫升雙料革蘭氏陰性（GN）增菌液內(nèi)，置于37℃恒溫箱，培養(yǎng)6小時(shí)。

三、平板分離

1沙門氏菌屬：取上述經(jīng)培養(yǎng)的沙門氏菌用增菌培養(yǎng)液，接種沙門氏菌屬——志賀氏菌屬（SS）平板或?？送幸颍℉ekto－en簡稱HE）平板，置于37℃恒溫箱培養(yǎng)24小時(shí)。也可接種亞硫酸鉍（BS）平板，置于37℃恒溫箱，培養(yǎng)48小時(shí)。

2志賀氏菌屬：取上述經(jīng)培養(yǎng)的志賀氏菌用增菌培養(yǎng)液，接種SS平板或HE平板，置于37℃恒溫箱，培養(yǎng)24小時(shí)。

四、挑選菌落

1沙門氏菌屬：挑取在SS平板上，呈無色透明或中間有黑心，直徑1～2毫米的菌落；挑取在HE平板上，呈藍(lán)綠色，有或無黑心，直徑1～2毫米的菌落；挑取在BS平板上，呈黑色，培養(yǎng)基周邊含有金屬光澤的菌落。

2志賀氏菌屬：挑取在SS平板上，呈無色透明，直徑1～1.5毫米的菌落，挑取在HE平板上，呈綠色的菌落。

3每個(gè)平板最少挑取5個(gè)以上可疑腸道病原菌菌落，轉(zhuǎn)種三糖鐵或其它鑒別培養(yǎng)基中，置于37℃恒溫箱；培養(yǎng)18～24小時(shí)。

五、生化實(shí)驗(yàn)及血清學(xué)檢查

1沙門氏菌屬：在三糖鐵培養(yǎng)基中，如不發(fā)酵乳糖，葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，普通產(chǎn)生硫化氫。有動(dòng)力者，先與沙門氏菌A～F群O多價(jià)血清作玻璃片凝集，凡與多價(jià)O血清凝集者，再與O因子血清凝集，以擬定其所屬群別，然后用H因子血清，擬定血清型。雙相菌

應(yīng)證明兩相的H抗原，有Vi抗原的菌型（傷寒和丙型副傷寒沙門氏菌）應(yīng)用Vi因子血清檢查。

化實(shí)驗(yàn)：應(yīng)進(jìn)行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動(dòng)力、尿素實(shí)驗(yàn)。沙門氏菌屬中除傷寒沙門氏菌和雞沙門氏菌產(chǎn)氣外，普通發(fā)酵葡萄糖、產(chǎn)氣、均發(fā)酵甘露醇和麥芽糖（但豬傷寒沙門氏菌、雛沙門氏菌不發(fā)酵麥芽糖），不分解乳糖、蔗糖，尿素酶和靛基質(zhì)為陰性，普通產(chǎn)生硫代氫。除雞、雛沙門氏菌和傷寒沙門氏菌的O型菌株無動(dòng)力外，普通都有動(dòng)力。如遇多價(jià)O血清不凝集而普通生化反映符合上述狀況時(shí)，可加做側(cè)金盞花醇、水楊素和氰化鉀實(shí)驗(yàn)，沙門氏菌均為陰性。

2志賀氏菌屬：在三糖鐵培養(yǎng)基上，葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，無動(dòng)力，不產(chǎn)生硫化氫，上層斜面乳糖不分解。

生化實(shí)驗(yàn)：應(yīng)進(jìn)行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖，蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動(dòng)力、尿素實(shí)驗(yàn)。志賀氏菌屬能分解葡萄糖，但不產(chǎn)氣（福氏志賀氏菌6型