豬偽狂犬的臨床發(fā)病機(jī)制與防治研究分析

豬偽狂犬的臨床發(fā)病機(jī)制與防治研究分析學(xué)位論文題目：豬偽狂犬的臨床發(fā)病機(jī)制與防治研究分析論文選題根據(jù)（涉及國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀、選題的理論意義或?qū)嵱脙r(jià)值、研究的特色及重要參考文獻(xiàn)目錄等）1、國(guó)內(nèi)外豬偽狂犬病臨床發(fā)病機(jī)制研究現(xiàn)狀1.1豬偽狂犬病臨床發(fā)病機(jī)制研究豬偽狂犬?。≒seudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabiesvirus，PRV）引發(fā)的一種可感染多個(gè)動(dòng)物的傳染病，在世界各地都有報(bào)道該病的暴發(fā)，是嚴(yán)重威脅養(yǎng)豬業(yè)的重要疫病之一。PRV的易感宿主種類(lèi)較多，其中有如豬、牛、羊等經(jīng)濟(jì)類(lèi)動(dòng)物，犬、貓等寵物、浣熊、水貂、狐等野生動(dòng)物，也可感染除人外的某些靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物，如恒河猴、狨猴等[1-3],但豬為唯一一種能夠成為潛伏攜帶者的動(dòng)物[4-5]，也是該病毒的貯存宿主。PRV感染豬和攜帶病毒的鼠類(lèi)為PR重要的傳染來(lái)源[6]。PRV感染造成種豬的生產(chǎn)性能下降，如公豬的不育，妊娠母豬的流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎[7-9]，給養(yǎng)豬業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。PR于1813年初次在美國(guó)牛群中發(fā)生，1902年被匈牙利科學(xué)家Aujeszky認(rèn)定為一種獨(dú)特的病。現(xiàn)在，本病呈世界分布。為防控該病，自20世紀(jì)90年代以來(lái)，北美和許多歐洲國(guó)家大規(guī)模使用gE缺失疫苗區(qū)別免疫動(dòng)物和野毒感染動(dòng)物并裁減陽(yáng)性動(dòng)物消亡了該病[10-11]。然而，對(duì)于第三世界國(guó)家如中國(guó)以及豬群密度高的某些國(guó)家或地區(qū)，豬PR仍是動(dòng)物疫病中最嚴(yán)重的疾病之一，如我國(guó)以及豬群密度高的某些國(guó)家或地區(qū)。在中國(guó)，劉永純等在1947年初次分離到PRV，并隨即在牛和豬群中相繼發(fā)現(xiàn)該病毒。到現(xiàn)在為止該病在中國(guó)廣泛流行。為了控制PR，我國(guó)大規(guī)模推廣使用基因缺失疫苗（Bartha-K61）對(duì)豬進(jìn)行免疫接種，一度使豬群PR得到有效控制。然而，自年年終以來(lái)，我國(guó)各地暴發(fā)了豬偽狂犬病，其中諸多地區(qū)免疫過(guò)Bartha-K61疫苗，疫病影響我國(guó)多個(gè)省、市、地區(qū)[16-19]，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。也有證據(jù)顯示在我國(guó)典型Bartha-K61疫苗對(duì)于偽狂犬野毒感染還不能提供完整的保護(hù)力。進(jìn)一步的流行毒株的全基因序列分析揭示，現(xiàn)在分離的流行株與之前分離株涉及Bartha-K61在內(nèi)，其病毒蛋白基因出現(xiàn)了很大的變異，如病毒蛋白堿基的替代、嵌入和缺失，野毒的感染無(wú)疑又給我國(guó)偽狂犬病的防控增添了現(xiàn)實(shí)的困難。PR為皰疹病毒科，皰疹病毒亞科α-皰疹病毒屬組員。從分類(lèi)學(xué)上稱(chēng)為豬Ⅰ型皰疹病毒（SuidherpesvirusI），由于1902年Aujeszky證明該病由病毒引發(fā)，因此該病又稱(chēng)Aujeszkydisease，該病毒為甲型皰疹病毒亞科，水痘病毒屬，它含有皰疹病毒所共有的特性。人I型單純皰疹病毒、馬立克氏病病毒（MDV）等同屬于α-皰疹病毒。1.2PR國(guó)外研究現(xiàn)狀偽狂犬病最早發(fā)生于1813年美國(guó)的牛群中，重要體現(xiàn)為“奇癢”，直到1902年，匈牙利科學(xué)家Aujeszky初次報(bào)道此病，因此，該病被命名為奧耶斯基?。ˋujeszky’sdisease）。美國(guó)、英國(guó)、德國(guó)、法國(guó)、日本等50多個(gè)國(guó)家和地區(qū)都有該病發(fā)生的報(bào)道。聯(lián)邦政府所做的一份血清學(xué)調(diào)查表明，在1974-1984年間，PR在美國(guó)感染率由0.56%增加到8.78%，發(fā)病率增加了15倍。英國(guó)1953年初次報(bào)道本病，1971年后來(lái)，豬開(kāi)始出現(xiàn)嚴(yán)重臨床癥狀，此后，暴發(fā)的次數(shù)和嚴(yán)重程度逐步上升，1983年暴發(fā)的次數(shù)為443次。希臘于1952年首先報(bào)道牛的PR，隨即報(bào)道發(fā)生于綿羊、山羊和水貂，豬的偽狂犬病于1977年初次報(bào)道，1978年被確診，數(shù)據(jù)顯示PR感染范疇不停擴(kuò)大。丹麥最早在1931年的牛群中報(bào)道PR，1964年有報(bào)道豬發(fā)生此病。直至20世紀(jì)70年代，PR并未造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。只有在在牛群中散發(fā)，豬則只發(fā)生于仔豬，出現(xiàn)臨床癥狀和死亡。然而自1978年后來(lái)，PR嚴(yán)重暴發(fā)的次數(shù)越來(lái)越多。PR早期在法國(guó)呈散發(fā)，在1968年以前總共只有19次發(fā)生;1968年后來(lái)臨床上PR發(fā)生急劇上升，并且許多地區(qū)均報(bào)道發(fā)生PR,1983年整個(gè)法國(guó)有344次[66]。原民主德國(guó)20世紀(jì)60年代末期PR開(kāi)始流行，20世紀(jì)70年代早期豬群的發(fā)病率增加了近一倍。但自1966年后采用根除計(jì)劃后豬群PR的感染率明顯下降[67]。瑞典1965年初次報(bào)道PR[68]，感染病例逐年增加，1965-1990年前15年內(nèi)僅有40例，后10年內(nèi)有160例。1989年的一份年度調(diào)查表明當(dāng)年的豬群感染率為5%，豬只的陽(yáng)性率為28%。1977年前西德僅零星出現(xiàn)PR，但之后感染病例數(shù)急劇上升，僅1987年一年的病例多達(dá)1968次，該病重要發(fā)生于德國(guó)豬群喂養(yǎng)集中的北部和西北部，育肥豬也受到影響1.3PR國(guó)內(nèi)研究現(xiàn)狀在中國(guó)，PRV感染首先由劉永純等在1947年貓中分離得到，之后再隨即在牛和豬證明有該病毒的存在。在20世紀(jì)80年代早期，已擬定有18個(gè)地區(qū)（14個(gè)省，1個(gè)直轄市和3個(gè)自治區(qū)的中國(guó)）的動(dòng)物存在PRV感染。即使牛，綿羊，山羊，貓，狗和貂也有感染，但重要發(fā)病動(dòng)物是豬。自上世紀(jì)八十年代后期以來(lái)，PR的發(fā)生率上升，并且在全國(guó)范疇內(nèi)蔓延，這與中國(guó)的養(yǎng)殖量、養(yǎng)殖密度的增加有關(guān)。另外，田間的潛伏感染也是豬群高比例感染PRV的重要因素。在發(fā)病期，豬群仔豬發(fā)病率和死亡率為70-100%。為了控制豬偽狂犬病在中國(guó)的發(fā)病和流行，中國(guó)在1979年引進(jìn)了Bartha-K61株疫苗，并對(duì)其安全性和功效進(jìn)行評(píng)價(jià)。自20世紀(jì)80年代后期以來(lái)，Bartha-K61株疫苗在中國(guó)的應(yīng)用，使得PR得到良好的控制。注射過(guò)疫苗的豬場(chǎng)，新生仔的感染率和死亡率都低于10%[75-76]。然而，PR并未完全被凈化根除，在年前后全部的地區(qū)，始終是地方性或零星出現(xiàn)。PR根除戰(zhàn)略的疫苗接種未能完善實(shí)施，法規(guī)的疏漏和生物安全方法的不夠嚴(yán)格[77-80]，使得PR疫情變得嚴(yán)重。更值得注意的是，自年終以來(lái)，病毒變異已經(jīng)出現(xiàn)，許多免疫過(guò)bartha-k6l疫苗的豬場(chǎng)發(fā)病。根據(jù)近來(lái)的一份報(bào)告顯示，中國(guó)23個(gè)地區(qū)的80.1%調(diào)查農(nóng)場(chǎng)遭受感染PRV的變異株的影響。另外，被調(diào)查的213個(gè)豬場(chǎng)中有58.2%的豬場(chǎng)PR總體感染率或gE抗體陽(yáng)性率從很低于20%增加至超出50%，這闡明我國(guó)的豬群受到野毒PRV嚴(yán)重感染。變異偽狂犬病感染造成的對(duì)豬生產(chǎn)造成重大的經(jīng)濟(jì)影響。在河南省僅一種豬群，就有2600新生仔豬和200頭母豬死于該變異PRV感染，造成了最少一百萬(wàn)元人民幣的直接經(jīng)濟(jì)損失。綿羊和豬的疫苗接種攻毒實(shí)驗(yàn)表明傳統(tǒng)的狂犬病疫苗對(duì)中國(guó)現(xiàn)在流行的變異毒株不能提供完整保護(hù)?，F(xiàn)在分離的變異株全基因組分析顯示了，病毒基因組出現(xiàn)了變異，涉及替代、插入或刪除發(fā)生在大多數(shù)病毒蛋白。強(qiáng)調(diào)現(xiàn)在在我國(guó)野毒感染造成的PR仍繼續(xù)流行和發(fā)生，嚴(yán)重影響我國(guó)動(dòng)物生產(chǎn)，特別是生豬生產(chǎn)。2、選題的理論意義及實(shí)用價(jià)值理論意義：研究通過(guò)流行病學(xué)提示的有關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素：購(gòu)入種豬無(wú)檢疫、消毒不嚴(yán)格、無(wú)全進(jìn)全出、未免疫含PR6種以上豬病、沒(méi)有驅(qū)鳥(niǎo)、滅鼠方法，提出豬場(chǎng)加強(qiáng)喂養(yǎng)管理，做好生物安全方法，嚴(yán)格執(zhí)行常規(guī)免疫，做好重要疫病防控、定時(shí)檢測(cè)、隔離病豬、裁減陽(yáng)性種豬的控制PR方略。防控成果顯示本研究的防控方案含有非常實(shí)用的價(jià)值，為PR的有效防控提供了借鑒。實(shí)際意義：即使近年來(lái)基因缺失疫苗的廣泛應(yīng)用和診療技術(shù)的不停完善，豬偽狂犬病得到一定的控制。但豬群受其它疾病的干擾、養(yǎng)殖環(huán)境的不停變化、疫苗質(zhì)量的層次不齊等因素的影響，部分豬場(chǎng)經(jīng)常發(fā)生偽狂犬病，給養(yǎng)殖戶(hù)帶來(lái)嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失據(jù)報(bào)道近三年來(lái)僅在我國(guó)河南、湖北等地就繼續(xù)發(fā)生和流行，個(gè)別省份較為嚴(yán)重，不同省份豬場(chǎng)發(fā)病率較高，損失嚴(yán)重。3、研究的特色通過(guò)PR病原學(xué)的研究，研究PR的分類(lèi)及其地位，病毒的基本特性，從分子生物學(xué)的角度來(lái)分析PR的臨床發(fā)病機(jī)制。通過(guò)對(duì)病原的檢測(cè)，血清學(xué)檢測(cè)，進(jìn)行對(duì)PR的診療。參考文獻(xiàn)[1]陳溥言,豬偽狂犬病[M].獸醫(yī)傳染病學(xué)（第五版）,:218-220.[2]BoelaertF,DeluykerH,MaesD,eta1.PrevalenceofherdswithyoungSOWSseropositivetopseudorabies(Aujeszky’Sdisease)inNorthernBelgium[J].PreyVetMed,1999,41(4):239-255.[3]孫放,彭麗波.豬偽狂犬病的防控方法[J].養(yǎng)豬技術(shù)顧問(wèn),,2:144.[4]Mettenleiter,T.C.,.Aujeszky'sdisease(pseudorahies)virus:thevirusandmolecularpathogenesis-stateoftheart[J].June1999.Vet.Res(31)99-115.[5]pomeranz,L.E.,Reynold,s.A.E.,Hengartner,C.J.,.Molecularbiologyofpseudorabiesvirus:impactonneurovirologyandveterinarymedicine.Micrnbinl.Mnl.Rinl.Rev.69.462-500.(controlofswine).[6]倪嬌,周緒斌,張馨玉.近期部分規(guī)?；i場(chǎng)豬偽狂犬病野毒抗體檢測(cè)狀況調(diào)查[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),,34(09):201-203.[7]Rziha,HJ.,Mettenleiter,T.C.,Ohlinger,V.,Wittmann,G.,1986.Herpesvirus(pseudorahiesvirus)latencyinswine:occurrenceandphysicalstateofviralDNAinneuraltissues.Virology155.600-613[8]Tong,T.Z.,Fan,H.Y.,Tan,Y.D.,Xiao,S.B.,Ling,J.Y.,Chen,H.C.,Guo,A.Z.,.C3denhancedDNAvaccinationinducedhumoralimmuneresponsetoglycoproteinCofpseudorahiesvirus.Biochem.Biophys.Res.Commun.4,845-851.[9]klupp,B.G.,Hengartner,C.J.,Mettenleiter,T.C.,Enquist,L.W.,.Complete,annotatedsequenceofthepseudorahiesvirusgenome.J.Virol.78,424-440.[10]Muller,T，Hahn,E.C.,Tottewitz,F.,kramer,M”,klupp,B.G”Mettenleiter,T.C.Freuling,C.,.pseudorabiesvirusinwildswineaglobalperspective.ArchVirnl.156.1691-1705.[11]OIE,().ManualofDiagnosticTestsandVaccinesforTerrestrialAnimals.7thEdition.[12]pomeranz,L.E.,Reynold,s.A.E.,Hengartner,C.J.,.Molecularbiologyofpseudorabiesvirus:impactonneurovirologyandveterinarymedicine.Micrnbiol.Mol.Biol.Rev.69.462-500.[13]楊漢春.年豬病流行狀況與年流行趨勢(shì)及防控對(duì)策[J].豬業(yè)科學(xué),,32(2):38-40.[14]郭林.牛偽狂犬病診斷報(bào)告(附犬偽狂犬病一例)[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,1963,11:005.[15]黃壽森,程由銓.牛偽狂犬病的研究(第一報(bào))牛偽狂犬病病毒的分離及若干生物學(xué)特性的研究[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),1966,9(1):21-32.[16]楊慶芳，寧官保，李俊達(dá).豬偽狂犬病毒的分離鑒定田.山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，.39(8):886一889.[17]胡濤，崔保安，楊明凡，等.偽狂犬病病毒gD,gE基因的克隆及轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建[J].中國(guó)防止獸醫(yī)學(xué)報(bào)，,26(2):149-151.[18]彭金美，安同慶，趙鴻遠(yuǎn)，等.豬偽狂犬病病毒新流行株的分離鑒定及抗原差別性分析[J].中國(guó)防止獸醫(yī)學(xué)報(bào)，.35[19]全炎銘.我國(guó)豬偽狂犬病的最新流行動(dòng)態(tài)與防控方法[J].北方牧業(yè),(12):24-25.[20]Wu,R.,Bai,C.,Sun,JChang,S.,Zhang,X,.EmergenceofvirulentpseudorahiesvirusinfectioninnorthernChina.J.Vet.Sci.14.363-365.[21]An,T.Q.,peng,J.M.,Tian,Z.J.,.pseudorahiesvirusvariantinBartha-K61-vaccinatedpigs,China,.Emerg.Infect.Dis.19,1749-1755.[22]Yu,X.,Zhou,Z.,Hu,D.,Zhang,q，.Pathogenicpseudorahiesvirus,China,Emerg.Infect.Dis.20,102一104.[23]Wang,C.H.,Yuan,J.,qin,H.,.AnovelgE-deletedpseudorahiesvirus(pRV)providesrapidandcompleteprotectionfromlethalchallengewiththepRVvariantemerginginBartha-K61vaccinatedswinepopulationinChina.Vaccine32,3379-3385.[24]Luo,Y.,Li,N.,Cong,X.,Wang,.pathogenicityandgenomiccharacterizationofapseudorahiesvirusvariantisolatedfromBartha-K61-vaccinatedswinepopulationinChina.Vet.Microhiol.174.107-115.[25]Yu,X.,Zhou,Z.,Hu,D.,Zhang,q，Han,.Pathogenicpseudorahiesvirus,China,Emerg.Infect.Dis.20,102一104.[26]Pellett,P.H.,Davison,AJ.,Hherle,R.,.Herpesvirales.In:Icing,A.M.q，Adams,M.J.,Carstens,H.I3.,Leflkowitz,HJ.(Gds.),Virustaxonomy:NinthReportoftheInternationalCommitteeonTaxononryofViruses.GlsevierAcademicPress,London,UnitedKingdom,pp.99-107.[27]PannwitzG,FreulingC,DenzinN,etal.Along-termserologicalsurveyonAujeszky’sdiseasevirusinfectionsinwildboarinEastGermany[J].Epidemiologyandinfection,,1(1):1-11.[28]楊慶芳,寧官保.豬偽狂犬病的研究進(jìn)展[J].畜牧獸醫(yī)科技信息,(7):15-18.[29]李春華,王英,蔣鳳英等.豬偽狂犬病研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,,29(3):68-72.[30]EkstrandMI,EnquistL,PomeranzLE.Thealpha-herpesviruses:molecularpathfindersinnervoussystemcircuits[J].Trendsinmolecularmedicine,,14(3):134-40.[31]GlorieuxS,FavoreelH,MeesenG,etal.Differentreplicationcharacteristicsofhistoricalpseudorabiesvirusstrainsinporcinerespiratorynasalmucosaexplants[J].Veterinarymicrobiology,,136(3-4):341-6.重要研究?jī)?nèi)容，擬解決的關(guān)健問(wèn)題或技術(shù)難點(diǎn)以及預(yù)期達(dá)成的目的：1、重要研究?jī)?nèi)容對(duì)我國(guó)-年近十年的豬偽狂犬血清流行性學(xué)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)匯總及gE基因變異狀況研究，并進(jìn)行文獻(xiàn)匯總數(shù)據(jù)分析，擬定在中國(guó)不同地區(qū)的豬種群豬偽狂犬的的發(fā)病狀況及gE基因的進(jìn)化分析，為豬偽狂犬病的有效防控提供指導(dǎo)部分地區(qū)PRV野毒陽(yáng)性豬場(chǎng)的陽(yáng)性病料進(jìn)行g(shù)E基因擴(kuò)增、克隆和遺傳進(jìn)化分析，與國(guó)內(nèi)外參考毒株的核苷酸及推導(dǎo)氨基酸序列進(jìn)行比較，構(gòu)建遺傳進(jìn)化樹(shù)，推測(cè)流行毒株的來(lái)源及親緣關(guān)系，為豬偽狂犬病的防控提供理論指導(dǎo)。2、擬解決的核心問(wèn)題PR的防控難題重要存在下列幾個(gè)方面。第首先，現(xiàn)在對(duì)PRV致病機(jī)理的研究尚不夠進(jìn)一步，缺少更進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)。第二方面，全長(zhǎng)基因組信息的欠缺，PRV基因組GC含量高達(dá)73%，其中g(shù)E基因是PRV的一種糖蛋白基因，位于US8區(qū)，G+C含量為75%，有98%的gE基因密碼子的第二位是G或C，這也是gE基因組擴(kuò)增極其困難的因素。第四方面，疫苗質(zhì)量、豬群免疫力等問(wèn)題造成的疫苗免疫失敗。最后，遺傳變異因素造成其病毒毒力增強(qiáng)。3、預(yù)期達(dá)成的目的研究中，我們對(duì)我國(guó)年-年近十年的豬偽狂犬血清流行性學(xué)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)匯總及gE基因變異狀況研究，并進(jìn)行文獻(xiàn)匯總數(shù)據(jù)分析，擬定在中國(guó)不同地區(qū)的豬種群豬偽狂犬的的發(fā)病狀況及gE基因的進(jìn)化分析，核苷酸序列分析,氨基酸序列分析。重要研究辦法（或技術(shù)路線(xiàn)，實(shí)施方案）：1.血清數(shù)據(jù)檢索在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)和中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索中、英文出版的年至年，有關(guān)豬偽狂犬病血清學(xué)流行病學(xué)研究的文章。中文文獻(xiàn)的檢索是基于核心詞“豬偽狂犬病”，“血清”，“基因”“PRV”“gE”而搜索NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的文獻(xiàn)時(shí)附加詞“中國(guó)”。所得的文章被檢測(cè)多于十份用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）測(cè)定的樣品。選定的文章的參考文獻(xiàn)列表進(jìn)行進(jìn)一步篩選，以確保全部有關(guān)的研究納入。對(duì)收集的豬偽狂犬病毒的血清樣品檢測(cè)成果（測(cè)試數(shù)目和陽(yáng)性數(shù)）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。1.2基因進(jìn)化數(shù)據(jù)檢索豬偽狂犬病毒野毒感染數(shù)據(jù)，隨著時(shí)間、地理位置進(jìn)行分組、全方面展示近十年來(lái)豬偽狂犬病毒的野毒感染狀況。在NCBI搜索過(guò)去10年在中國(guó)獲得的豬偽狂犬病毒gE全基因的進(jìn)化信息并對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。1.3將從GenBank收錄的66株毒株g