二陳湯配伍機(jī)制研究

二陳湯配伍機(jī)制研究

二陳湯是宋代太平惠民和菊花的基礎(chǔ)。它對除濕和粘液也很有效。組合嚴(yán)謹(jǐn),君臣協(xié)調(diào),衍生者多,療效可靠。本文試用混料均勻設(shè)計法對二陳湯進(jìn)行拆方研究,通過藥效實驗,經(jīng)數(shù)據(jù)分析,對復(fù)方中的君臣佐使關(guān)系進(jìn)行科學(xué)的驗證,解釋傳統(tǒng)方劑結(jié)構(gòu)關(guān)系和作用機(jī)制,并最終闡明復(fù)方的配伍機(jī)制。1實驗材料1.1特芬材料方中藥材由同濟(jì)堂藥房提供,并由貴陽中醫(yī)學(xué)院生藥教研室劉芃教授鑒定,半夏、陳皮、茯苓、甘草4味藥材均為2005版《中國藥典》收載品種。1.2實驗動物昆明種小鼠(貴陽醫(yī)學(xué)院動物房提供),體重(20±2)g,雌雄對半。1.3試劑和機(jī)器氨水、碳酸氫鈉、酚紅(上海虹光化學(xué)廠);980-A型超聲霧化器(上海醫(yī)械五機(jī)廠),721-分光光度計(上海第三分析儀器廠)。2在中藥配方優(yōu)化中的應(yīng)用混料均勻設(shè)計法是混料設(shè)計與均勻設(shè)計相結(jié)合的一種實驗設(shè)計方法,常用于各種化學(xué)配方的優(yōu)化,亦可用于中藥方劑配伍的優(yōu)化及機(jī)制的研究。本實驗以方中四味藥材為4個因素,使用DPS軟件選擇4因素11水平(U411)混料均勻試驗表,并以原處方總量45g為各處方總量,按照比例得到不同的11個處方(表1)。3藥理學(xué)實驗3.1實驗指標(biāo)的選擇藥理實驗則根據(jù)二陳湯的主治功效,同時兼顧標(biāo)本兼治、中西結(jié)合等原則,選擇止咳、祛痰兩項指標(biāo)進(jìn)行實驗。通過文獻(xiàn)查閱,分別采用氨水引咳法、酚紅法對上述兩個指標(biāo)進(jìn)行具體實驗。實驗對象均為(20±2)g小白鼠,給藥劑量均為成人劑量的10倍。3.2制備不同的水溶劑對不同一公里水的加8倍量水煮按照混料均勻設(shè)計表中各處方量稱取各藥材,按其傳統(tǒng)的提取工藝進(jìn)行煎煮,即加8倍量水,煎煮2次,每次30min。合并煎煮液,過濾后濃縮,并于減壓干燥器中將溶劑揮干,得干浸膏,取干浸膏研磨后用蒸餾水溶解,定容至60mL即可。3.3動物咳嗽次數(shù)觀察取(20±2)g小鼠110只,雌雄各半,隨機(jī)分為11組,按照0.1mL/10g劑量灌胃給藥,每12h1次,連續(xù)3天,末次給藥前禁食12h,給藥后60min,放入噴霧器內(nèi),恒壓噴霧濃氨水溶液20s,取出小鼠放置于合適的透明容器中,觀察2min內(nèi)動物咳嗽次數(shù)。3.4小鼠的光度計檢測取(20±2)g小鼠110只,雌雄各半,隨機(jī)分為11組,0.1mL/10g灌胃,每12h1次,連續(xù)3天,末次給藥前禁食12h,給藥后30min,腹腔注射0.8%酚紅溶液(0.1mL/10g),40min后把小鼠處死,迅速剝離氣管,用0.1mL4.2%的NaHCO3溶液沖洗氣管3次,沖洗液加入10mL試管(事先加入2mL0.9%的生理鹽水和0.5mL4%的NaOH溶液,編號備用),用721-分光光度計測定溶液的吸光度,檢測波長546nm,記錄吸收值。以上兩項藥理實驗結(jié)果見表1。3.5病理數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析3.5.1因子間的量化和序化對兩個系統(tǒng)或兩個因素之間關(guān)聯(lián)性大小的量度,稱為關(guān)聯(lián)度。關(guān)聯(lián)度分析的目的就是對信息不完全與“少數(shù)據(jù)不確定”的系統(tǒng)作因子間的量化和序化。將表1中的處方組成與藥理實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)度分析,結(jié)果見表2(表中所示為關(guān)聯(lián)系數(shù))。由表2中看出,方中4味藥與藥理指標(biāo)的關(guān)聯(lián)序分別為:止咳實驗中半夏﹥陳皮﹥甘草﹥茯苓;化痰實驗中半夏﹥陳皮﹥茯苓﹥甘草。此關(guān)聯(lián)序闡明了方中四味藥對以上兩個藥理指標(biāo)結(jié)果的影響的大小,同時止咳與化痰實驗中半夏為第一影響因素,陳皮為第二影響因素。3.5.2完整回歸方程二次多項式逐步回歸分析是二次多項式回歸分析和逐步回歸分析相結(jié)合的一種多元回歸分析方法。近年來較多用于中藥復(fù)方的研究,同時此方法可以得到回歸方程,更有利于對結(jié)果進(jìn)行闡釋。將表1中的處方組成與藥理實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行二次多項式逐步回歸分析,結(jié)果見表3~5。止咳實驗的回歸方程:Y=35.5188-0.4878X2-0.0560X1×X1-0.0160X3×X3+0.0251X1×X2+0.0006X1×X3-0.0191X1×X4,(R﹥0.95,P﹤0.05),其各因素最優(yōu)比例為X1(30.28):X2(29.11):X3(18.77):X4(10.94);化痰實驗的回歸方程為:Y=36.7528+2.0739X1+2.1449X3-0.1047X1×X1+0.1357X2×X2-0.4073X3×X3+0.1747X1×X4,(R﹥0.95,P﹤0.01),其各因素最優(yōu)比例為X1(1.97):X2(2.06):X3(1.25):X4(0.70)。以上數(shù)據(jù)表明,在兩個藥理指標(biāo)中四味藥的比例與原方中各藥比例幾無明顯差異。3.6復(fù)配實驗方法學(xué)精密稱取最佳處方(即原方:半夏15g,陳皮15g,茯苓9g,甘草6g),按照3.2中方法制備樣品溶液備用。止咳實驗的陽性對照使用復(fù)方可待因,化痰實驗的陽性對照使用2%的氯化銨水溶液;二者均使用0.9%生理鹽水作為陰性對照,給藥劑量均為0.1mL/10g,按照3.3和3.4中方法分別進(jìn)行實驗,并做方差分析,結(jié)果如表6。結(jié)果顯示,各實驗指標(biāo)數(shù)據(jù)與陰性對照相比有顯著性差異,且優(yōu)于代入回歸方程所得的理論值。4茯苓、甘草的配比對臨床療效的影響經(jīng)混料均勻試驗設(shè)計,綜合以上兩個藥理指標(biāo),對復(fù)方中藥二陳湯的配伍關(guān)系和配伍劑量進(jìn)行分析,結(jié)果如下:根據(jù)各組試驗關(guān)聯(lián)度分析以及二次多項式逐步回歸分析結(jié)果,方中半夏與陳皮對于各藥理指標(biāo),均系影響藥效的主要因素,證明方中半夏辛溫而燥,最善于止咳化痰為主藥;輔以陳皮理氣,燥濕化痰,使氣順痰消的科學(xué)論述;茯苓與甘草兩味藥,均不是影響藥效的主要因素,但總體來看,又都體現(xiàn)出一定的輔助增強(qiáng)藥效的作用,這一點也符合佐以茯苓健脾滲濕,濕無所聚,則痰無由生;使以甘草和中健脾,調(diào)和諸藥,脾運健則濕自化,濕已去則痰自消的方解的論述。同時從各藥的不同水平來看,半夏與陳皮都體現(xiàn)出樂一定的用量依存性。根據(jù)二次多項式逐步回歸分析結(jié)果,所得到的處方中各藥的最佳配比與原方并無明顯差異,故我們維持原處方量不變,即半夏15g,陳皮15g,茯苓9g,甘草6g。本實驗在一定程度上證明了傳統(tǒng)中醫(yī)理論關(guān)于復(fù)方中藥君臣佐使的配伍關(guān)系及組方規(guī)律,同時也表明了二陳湯組方的科學(xué)性。5兩個病理指標(biāo)的選擇存在著一定的局限性由于拆方試驗研究有很多種方法,而每個方法都存在自身的局限性,本研究采用的混料均勻設(shè)計法盡管在一定程度上比其它方法有所提高,但也不可避免存在著一定的弊端,主要是數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析方法選擇的局限和統(tǒng)計過程