紫外可見分光光度法-紫外可見分光光度計（儀器分析課件）

Contents目1紫外-可見分光光度儀2分光光度計類型、特點3分光光度計的使用4定量分析法錄儀器分析紫外-可見分光光度法紫外-可見分光光度法（二）紫外可見分光光度儀構(gòu)成:光源→單色器→吸收池→檢測器→輸出設(shè)備注意:儀器設(shè)備的光路圖,應(yīng)該使用”→”“─”是沒有方向性的,不能用于光路圖儀器分析紫外-可見分光光度法各分光光度計類型、特點單光束分光光度計：分析成本低，雙光束分光光度計：檢測速度加快

，誤差減少，

成本變高

儀器分析紫外-可見分光光度法儀器分析紫外-可見分光光度法紫外-可見分光光度計主要由光源、單色器、吸收池、檢測器和信號處理器等部件組成。光源的功能是提供足夠強(qiáng)度的、穩(wěn)定的連續(xù)光譜。紫外光區(qū)通常用氫燈或氘燈?？梢姽鈪^(qū)通常用鎢燈或鹵鎢燈。單色器的功能是將光源發(fā)出的復(fù)合光分解并從中分出所需波長的單色光。色散元件有棱鏡和光柵兩種。紫外-可見分光光度計主要由光源、單色器、吸收池、檢測器和信號處理器等部件組成。吸收池又稱為比色皿，作為溶液的容器，其底及兩側(cè)為毛玻璃，另兩面為光學(xué)透光面，為減少光的反射損失，吸收池的光學(xué)面必須完全垂直于光束方向。根據(jù)材質(zhì)可分為玻璃池和石英池兩種，前者用于可見光光區(qū)測定，后者用于紫外光區(qū)。紫外-可見分光光度計主要由光源、單色器、吸收池、檢測器和信號處理器等部件組成。檢測器的功能是通過光電轉(zhuǎn)換元件檢測透過光的強(qiáng)度，將光信號轉(zhuǎn)變成電信號。常用的光電轉(zhuǎn)換元件有光電管、光電倍增管及光二極管陣列檢測器。信號顯示系統(tǒng)：是將檢測器輸出的信號放大，并顯示出來的裝置

儀器分析紫外-可見分光光度法儀器分析紫外-可見分光光度法Contents目1紫外-可見分光光度儀2分光光度計類型、特點3分光光度計的使用4定量分析法錄儀器分析紫外-可見分光光度法紫外-可見分光光度法（二）紫外可見分光光度儀構(gòu)成:光源→單色器→吸收池→檢測器→輸出設(shè)備注意:儀器設(shè)備的光路圖,應(yīng)該使用”→”“─”是沒有方向性的,不能用于光路圖儀器分析紫外-可見分光光度法各分光光度計類型、特點單光束分光光度計：分析成本低，雙光束分光光度計：檢測速度加快

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儀器分析紫外-可見分光光度法

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儀器分析紫外-可見分光光度法儀器分析紫外-可見分光光度法儀器分析紫外-可見分光光度法分光光度計的使用1.接通電源，打開儀器開關(guān)，掀開樣品室暗箱蓋，預(yù)熱10分鐘。2.將靈敏度開關(guān)調(diào)至“1”檔（若零點調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”時，需選用較高檔。）3.根據(jù)所需波長轉(zhuǎn)動波長選擇鈕。4.將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內(nèi)，使空白管對準(zhǔn)光路。

儀器分析紫外-可見分光光度法分光光度計的使用5.在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點調(diào)節(jié)器，使讀數(shù)盤指針指向t=0處。6.蓋上暗箱蓋，調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器，使空白管的t=100，指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測定管的光密度值，并記錄。7.比色完畢，關(guān)上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。定量分析1、工作曲線法A∈（0.2,0.8mol/L）Y=a+bx相關(guān)系數(shù)r=b×＞0.999儀器分析紫外-可見分光光度法2、比較法方法的運用要注意適用范圍儀器分析紫外-可見分光光度法Contents目1紫外-可見分光光度儀2分光光度計類型、特點3分光光度計的使用4定量分析法錄儀器分析紫外-可見分光光度法分光光度計的使用1.接通電源，打開儀器開關(guān)，掀開樣品室暗箱蓋，預(yù)熱10分鐘。2.將靈敏度開關(guān)調(diào)至“1”檔（若零點調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”時，需選用較高檔。）3.根據(jù)所需波長轉(zhuǎn)動波長選擇鈕。4.將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內(nèi)，使空白管對準(zhǔn)光路。

儀器分析紫外-可見分光光度法分光光度計的使用5.在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點調(diào)節(jié)器，使讀數(shù)盤指針指向t=0處。6.蓋上暗箱蓋，調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器，使空白管的t=100，指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測定管的光密度值，并記錄。7.比色完畢，關(guān)上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。定量分析1、工作曲線法A∈（0.2,0.8mol/L）Y=a+bx相關(guān)系數(shù)r=b×＞0.999儀器分析紫外-可見分光光度法2、比較法方法的運用要注意適用范圍儀器分析紫外-可見分光光度法Contents目1特點2方法原理3紫外分光光度法的分析應(yīng)用錄儀器分析紫外-可見分光光度法紫外-可見分光光度法由于分子中的價電子能級躍遷產(chǎn)生紫外吸收光譜，其特點如下：1、與其它光譜分析方法相比，紫外可見分光光度法事物儀器設(shè)備和操作都比較簡單，費用少，分析速度快。2、紫外可見分光光度法的靈敏度高。3、紫外可見分光光度法的選擇性好。4、紫外可見分光光度法的精密度和準(zhǔn)確度較高。儀器分析紫外-可見分光光度法二、方法原理:單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時，在一定的濃度范圍內(nèi)被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比，其關(guān)系可以用朗伯-比爾定律定量表示。對于有機(jī)物軌道:電子圍繞分子或原子運動的幾率儀器分析紫外-可見分光光度法三、常用術(shù)語軌道:電子圍繞分子或原子運動的幾率儀器分析紫外-可見分光光度法１、價電子種類σ電子（單電子）、π電子（成雙電子）、n電子（未成鍵孤電子：Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｐ等）

O∶←n電子

‖

←π電子C—H

|

←σ電子H

儀器分析紫外-可見分光光度法２、分子軌道

σ（成鍵軌道）

σ＊（反鍵軌道）

π（成鍵軌道）

π＊（反鍵軌道）

n非鍵軌道軌道能級（能量）：σ＜π＜n＜π＊＜σ＊

儀器分析紫外-可見分光光度法躍遷所需能量大小σ→σ＊＞n→σ*＞π→π*＞n→π*儀器分析紫外-可見分光光度法３、紫外吸收光譜的相關(guān)概念生色團(tuán)：具有一個或多個不飽和鍵和未共用電子對的基團(tuán)。在200-1000nm產(chǎn)生特征吸收峰的基團(tuán)。助色團(tuán)：含有未共用電子對的氧原子、氮原子或鹵素原子的基團(tuán)。

-OH,-I,-NHR、-OR,-NH2儀器分析紫外-可見分光光度法紅移：共軛作用或引入助色團(tuán)使吸收峰向長波長方向移動。藍(lán)移：失去助色團(tuán)或共軛作用減弱，可使吸收峰向短波方向移動。儀器分析紫外-可見分光光度法吸收帶類型吸收帶，指吸收峰在紫外光譜中的譜帶的位置。Ｒ吸收帶、Ｋ吸收帶、Ｂ吸收帶、Ｅ吸收帶儀器分析紫外-可見分光光度法溶劑極性的影響儀器分析紫外-可見分光光度法影響紫外吸收光譜的因素共軛效應(yīng)助色效應(yīng)

超共軛效應(yīng)

溶劑效應(yīng)

儀器分析紫外-可見分光光度法影響因素共軛效應(yīng)超共軛效應(yīng)溶劑效應(yīng)助色效應(yīng)影響紫外吸收光譜的因素共軛效應(yīng)：（紅移）助色效應(yīng)：助色團(tuán)的n電子與發(fā)色團(tuán)的π電子共軛，λ紅移。超共軛效應(yīng)：烷基σ鍵與共軛體系的π鍵共軛，λ紅移。溶劑效應(yīng)：溶劑產(chǎn)生吸收的光的波長極限，當(dāng)大于此波長時溶劑不產(chǎn)生吸收，小于此波長時溶劑會產(chǎn)生明顯吸收。實際操作中要注意避免溶劑效應(yīng)對測定造成的影響。了解常見有機(jī)物的紫外吸收光譜。儀器分析紫外-可見分光光度法三、紫外分光光度法的分析應(yīng)用定性分析λmax,吸收曲線峰形（峰位置），峰數(shù)目結(jié)合紅外分光光度法，更全面。定量分析標(biāo)準(zhǔn)曲線法（工作曲線法）儀器分析紫外-可見分光光度法Contents目1紫外-可見分光光度儀2分光光度計類型、特點3分光光度計的使用4定量分析法錄儀器分析紫外-可見分光光度法紫外-可見分光光度法（二）紫外可見分光光度儀構(gòu)成:光源→單色器→吸收池→檢測器→輸出設(shè)備注意:儀器設(shè)備的光路圖,應(yīng)該使用”→”“─”是沒有方向性的,不能用于光路圖儀器分析紫外-可見分光光度法各分光光度計類型、特點單光束分光光度計：分析成本低，雙光束分光光度計：檢測速度加快

，誤差減少，

成本變高

儀器分析紫外-可見分光光度法

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儀器分析紫外-可見分光光度法分光光度計的使用5.在暗箱蓋開啟