PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置、儀器配置

PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置、儀器配制技術(shù)服務(wù)部2021/5/91PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則PCR實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)等級(jí)0102各區(qū)的工作內(nèi)容及配置03實(shí)驗(yàn)室配置及預(yù)算04目錄2021/5/92生物安全的概念生物安全是指由動(dòng)物、植物、微生物等生物體給人類健康和自然環(huán)境造成的危害以及人們所采取的防范措施。生物安全是一個(gè)廣義的概念，它涉及三個(gè)方面：外來物種遷入導(dǎo)致的原生態(tài)系統(tǒng)不良改變或破壞；人為造成的環(huán)境劇烈變化危機(jī)生物的多樣性；科學(xué)研究、開發(fā)、生產(chǎn)和應(yīng)用中，病原或變異生物體的泄露對(duì)人類健康或生存環(huán)境所造成的危害。PCR實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)等級(jí)2021/5/931.危害等級(jí)I（低個(gè)體危害，低群體危害）不會(huì)導(dǎo)致健康工作者和動(dòng)物致病的細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。2.危害等級(jí)Ⅱ(中等個(gè)體危害，有限群體危害)能引起人或動(dòng)物發(fā)病，但一般情況下對(duì)健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會(huì)引起嚴(yán)重危害的病原體。實(shí)驗(yàn)室感染不導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險(xiǎn)有限。3.危害等級(jí)III（高個(gè)體危害，低群體危害）能引起人類或動(dòng)物嚴(yán)重疾病，或造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，但通常不能因偶然接觸而在個(gè)體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的病原體。4.危害等級(jí)Ⅳ(高個(gè)體危害，高群體危害)能引起人類或動(dòng)物非常嚴(yán)重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸在人與人，或動(dòng)物與人，或人與動(dòng)物，或動(dòng)物與動(dòng)物間傳播的病原體。生物因子危害程度分級(jí)PCR實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)等級(jí)2021/5/94PCR實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)等級(jí)根據(jù)安全防護(hù)等級(jí)，分子生物實(shí)驗(yàn)室一般分為以下四級(jí)：2021/5/95依據(jù)：

衛(wèi)生部頒發(fā)的《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號(hào)）

《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號(hào)）

PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則

2021/5/96各區(qū)獨(dú)立注意風(fēng)向因地制宜方便工作“十六字口訣”PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則

2021/5/97各區(qū)獨(dú)立：1.PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)及各區(qū)獨(dú)立：1.1試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)；1.2標(biāo)本制備區(qū)；1.3擴(kuò)增區(qū)；1.4擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)；如使用全自動(dòng)分析儀，區(qū)域可適當(dāng)合并；2.各區(qū)物品獨(dú)立：各區(qū)必須有明確的標(biāo)記，避免不同區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則

2021/5/98注意風(fēng)向：1.工作流向（進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室方向）：為避免交叉污染，進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)；2.空氣流向：應(yīng)在樣本制備區(qū)、擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)等相對(duì)可能出現(xiàn)的“污染物”的區(qū)域安裝負(fù)壓系統(tǒng)（排風(fēng)裝置），在試劑準(zhǔn)備區(qū)安裝正壓系統(tǒng)（新風(fēng)進(jìn)氣系統(tǒng)），以實(shí)現(xiàn)空氣按照試劑準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增（及產(chǎn)物分析）區(qū)方向流動(dòng)；PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則

2021/5/99理想的PCR診斷實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)方案工作流向?qū)Ｓ米呃犬a(chǎn)物分析區(qū)擴(kuò)增區(qū)標(biāo)本制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則

2021/5/910合理的PCR診斷實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)方案PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則

2021/5/911PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則

傳遞窗：雙刃劍方便試劑物品在不同實(shí)驗(yàn)區(qū)間的傳遞；增加交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)；設(shè)計(jì)原則：1.必須為雙開門密封嚴(yán)實(shí)的；2.兩邊門最好是連鎖裝置；3.傳遞窗內(nèi)應(yīng)有紫外照射裝置；2021/5/912各區(qū)的工作內(nèi)容及配置------試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)

試劑準(zhǔn)備區(qū)主要進(jìn)行試劑的儲(chǔ)存、分裝和主反應(yīng)混合液的制備。該區(qū)對(duì)于氣流壓力的控制，本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求。該區(qū)所需的主要物品包括：1、冰箱（2-8℃、-20℃），用于試劑的儲(chǔ)存；2、超凈工作臺(tái)（最好配備），試劑配制的區(qū)域；3、移液器一套（覆蓋1-1000ul，一般0.1-10ul、5-50ul、20-200ul、100-1000ul）及配套吸頭（帶濾芯），用于試劑配制；4、掌上迷你離心機(jī)；5、震蕩混勻儀；6、離心管架、廢液缸（利器盒）等；7、消耗品：一次性無粉乳膠手套、耐高壓處理的離心管、一次性吸水紙；8、安全級(jí)防護(hù)品：移動(dòng)紫外線燈、專用工作服、9、專用辦公用品（簽字筆及記錄本等）；

2021/5/913標(biāo)本制備區(qū)主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí)cDNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域（擴(kuò)增區(qū)）為正壓，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。該區(qū)所需的主要物品包括：1、冰箱（2-8℃、-20℃或-80℃）；2、生物安全柜；3、移液器一套（覆蓋1-1000ul，一般0.1-10ul、5-50ul、20-200ul、100-1000ul）及配套吸頭（帶濾芯）；各區(qū)的工作內(nèi)容及配置------樣本制備區(qū)

2021/5/9144、高速臺(tái)式離心機(jī)（冷凍）、掌上迷你離心機(jī)（雙轉(zhuǎn)子）；5、水浴鍋或金屬浴；6、震蕩混勻儀；7、離心管架、廢液缸（利器盒）等；8、消耗品：一次性無粉乳膠手套、耐高壓處理的離心管、一次性吸水紙；9、安全級(jí)防護(hù)品：移動(dòng)紫外線燈、專用工作服、10、專用辦公用品（簽字筆及記錄本等）；11、核酸提取儀；標(biāo)本制備區(qū)是唯一直接與標(biāo)本接觸的區(qū)域，因此要注意生物安全問題，應(yīng)有洗眼器、并配備一個(gè)急救箱，箱內(nèi)可放置75%乙醇、棉簽、創(chuàng)可貼等急用藥具。各區(qū)的工作內(nèi)容及配置------樣本制備區(qū)

2021/5/915該區(qū)主要進(jìn)行PCR擴(kuò)增，本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域（樣本制備區(qū)）為負(fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。所需的主要物品包括：1、實(shí)時(shí)熒光PCR儀（含電腦打印機(jī)等）；2、移動(dòng)紫外線燈；3、專用工作服；4、