薏苡仁多糖提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

薏苡仁多糖提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

愛斯隆系統(tǒng)水稻科的一種干燥、成熟的種子。它具有健脾除濕、除關(guān)節(jié)疼痛、清熱祛瘀的功效。水腫、氣滯、排尿、補(bǔ)水、痙攣、脾虛和瀉湖。薏苡仁主產(chǎn)于福建、河北、遼寧等地,在我國(guó)大部分地區(qū)均有種植。薏苡仁的主要活性成分為薏苡仁多糖,具有調(diào)節(jié)免疫、抗氧化、抗衰老、降血脂、降血糖、抗腫瘤等作用。臨床上薏苡仁可治疣平痘,可淡斑美白、潤(rùn)膚除皺、美容養(yǎng)顏等。薏苡仁多糖質(zhì)量控制研究的文獻(xiàn)較少,為了有效控制其質(zhì)量,筆者對(duì)薏苡仁多糖提取物的水分、熾灼殘?jiān)?、重金屬和多糖含量進(jìn)行了較為全面和系統(tǒng)的研究,為建立和完善薏苡仁多糖提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系提供了可供參考的依據(jù)。1材料表面1.1旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器sU-2001型紫外可見分光光度計(jì);分析天平(Sartorius,CP225D);RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠);HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司);超聲波清洗器(熊貓集團(tuán)UP5200H);納氏比色管。1.2苯酚、濃硫酸、苯酚對(duì)照品薏苡仁多糖(湖北省藥用植物研發(fā)中心制備,批號(hào)分別為:091214、091215、091216、091217、091218):無(wú)水葡萄糖對(duì)照品(上海君創(chuàng)生物科技有限公司);苯酚,濃硫酸均為分析純;水為蒸餾水。2方法和結(jié)果2.1材料過濾系統(tǒng)2h稱取薏苡仁適量,搗碎,加8倍量95%乙醇回流提取2次,每次2h,過濾;藥渣分別用8倍量、6倍量的水煎煮2次,每次2h,趁熱過濾,合并煎液,減壓濃縮至相對(duì)密度為1.03,室溫下加入95%乙醇,使含醇量達(dá)到80%,靜置,過濾,干燥沉淀,即得2.2試驗(yàn)對(duì)象的特性本品為灰白色的粉末,味淡,略有吸濕性,溶于水,不溶于乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑。根據(jù)5批以上干燥樣品觀察,各批次的特征基本一致。2.3測(cè)試2.3.1樣品的測(cè)定照《中華人民共和國(guó)藥典》2005版一部水分測(cè)定法(附錄ⅨH第一法),對(duì)5批以上薏苡仁多糖樣品進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果水分含量在7.41%-7.83%之間,由于樣品批次不同會(huì)影響水分的含量,故擬定水分不得超過9.0%。2.3.2樣品測(cè)定結(jié)果照《中華人民共和國(guó)藥典》2005版一部熾灼殘?jiān)鼨z查法(附錄ⅨJ),對(duì)5批以上薏苡仁多糖樣品進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果殘?jiān)吭?.08%-1.32%之間,由于產(chǎn)品批次不同,故擬定熾灼殘?jiān)坏眠^1.5%。2.3.3樣品測(cè)定和分析照《中華人民共和國(guó)藥典》2005版一部重金屬檢查法(附錄IXE第二法),對(duì)5批以上薏苡仁多糖樣品進(jìn)行測(cè)定,根據(jù)兩支納氏比色管中顯示的顏色的比較,重金屬均未超過20ppm,故擬定重金屬不得過百萬(wàn)分之二十。2.4椰子糖的含量測(cè)定薏苡仁多糖采用苯酚-硫酸比色法,照紫外-可見分光光度法(《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版一部附錄VA)進(jìn)行含量測(cè)定。2.4.1測(cè)定波長(zhǎng)的確定根據(jù)對(duì)顯色后對(duì)照品溶液和供試品溶液在紫外-可見光譜的測(cè)定,葡萄糖對(duì)照品溶液與薏苡仁多糖供試品溶液在490nm處均有最大吸收,故選擇測(cè)定波長(zhǎng)為490nm。2.4.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取105℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品25mg,置250mL容量瓶中,加適量水溶解,稀釋至刻度,搖勻,即得對(duì)照品溶液(每1mL中含無(wú)水葡萄糖0.1mg)。供試品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的本品2.5mg,置25mL容量瓶中,加適量水溶解,稀釋至刻度,搖勻,即得供試品溶液。2.4.4濃硫酸溶液的配制精密吸取對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL,分別置具塞試管中,加水至2.0mL,各精密加入5%苯酚溶液1mL,搖勻,迅速精密加入濃硫酸5mL,搖勻,放置10min,置40℃水浴中保溫15min,取出后迅速冷卻至室溫,以相應(yīng)的試劑為空白。在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,以吸光度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果見表1和圖1。經(jīng)計(jì)算得回歸方程為:Y=0.05088X+0.1338,r=0.998。葡萄糖濃度在2.50-12.50μg/mL范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。2.4.5儀器精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液0.5mL,置10mL具塞試管中,按“2.4.4”項(xiàng)下自“加水至2mL”起操作,在同一條件下測(cè)定吸光度,重復(fù)測(cè)定5次,結(jié)果RSD為1.48%,表明儀器精密度良好。2.4.6穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取供試品溶液0.5mL(批號(hào)為091214),置10mL具塞試管中,分別在0、2、4、8、12、24h按“2.4.4”項(xiàng)下自“加水至2mL”起操作,測(cè)定吸光度,重復(fù)測(cè)定5次,結(jié)果RSD為1.40%,表明在24h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性良好。2.4.7樣品多糖含量的測(cè)定取干燥至恒重的本品(批號(hào)為091214)5份,每份2.5mg,精密稱定,照“2.4.3”項(xiàng)下的方法依法制備,精密吸取樣品溶液0.5mL,按“2.4.4”項(xiàng)下自“加水至2mL”起操作,同時(shí)以葡萄糖對(duì)照品對(duì)比測(cè)定,計(jì)算多糖的含量。多糖含量=式中c為測(cè)得樣品溶液中葡萄糖的濃度(μg/mL);D為樣品溶液的稀釋倍數(shù):W為取樣量。結(jié)果RSD為1.88%,表明方法重現(xiàn)性良好。2.4.8加樣回收率和精密度取己知含量的樣品粉末(批號(hào)為091214)5份,每份2.5mg(含量為65.54%),精密稱定,分別加入一定量的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品照項(xiàng)下的方法依法制備供試品溶液,精密吸取各供試品溶液0.5mL,置5支10mL具塞試管中,按“2.4.4”項(xiàng)下自“加水至2mL”起操作,依法測(cè)定,結(jié)果見表2,加樣回收率為99.60%,RSD為2.18%。2.4.9樣品測(cè)定按上述測(cè)定方法,對(duì)5批薏苡仁多糖的含量進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見表3,樣品的平均含量為65.68%。3制樣方法的確定由于原藥材產(chǎn)地的差異,其薏苡仁多糖的含量存在一定的差別,再加上各實(shí)驗(yàn)室樣品的制備存在一定的差別,故把測(cè)得的5批樣品的平均含量下