幾種美容中藥對腐敗菌的抑菌效果研究

幾種美容中藥對腐敗菌的抑菌效果研究

血液中的養(yǎng)分含量通常含有豐富的養(yǎng)分，容易產(chǎn)生微生物污染。添加抗生素是預(yù)防化妝微生物污染的主要方法。目前化妝品常用防腐劑有對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯和卡松等,隨著化妝品的品種逐漸增多,用于化妝品的防腐劑種類也在增加。但國家對化妝品防腐劑的加樣量與使用生產(chǎn)化妝品的種類和條件有著嚴(yán)格的控制,這主要由于合成防腐劑具有一定的毒副作用,如對皮膚有刺激、過敏反應(yīng)等;并且其防腐效果易受溶解度、微生物種類、pH值等因素影響,因此研發(fā)使用方便、效果好且無毒副作用的天然防腐劑已受到世界各國的普遍重視。中藥作為我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的重要組成部分,藥源廣泛,價(jià)格低廉,含有多種活性成分,具有廣譜抗菌作用,不易產(chǎn)生抗藥性。中藥不僅能抗菌消炎,還有全面的調(diào)理作用。目前,人們已研究了一些中藥對腐敗菌的抑菌效果,但主要集中應(yīng)用于食品保鮮防腐上,用于化妝品防腐的還較少。將中藥用作化妝品防腐劑,不僅可以避免化學(xué)防腐劑的毒性危害,而且還可以提升化妝品的品質(zhì),是一種具有廣闊前景的新型天然防腐劑。因此,本研究選取7種藥食同源的美容中藥(竹茹、蘆根、白芍、白術(shù)、茯苓、白芷、薏苡仁),研究其對腐敗菌的抑菌效果,有望將抑菌效果好的中藥提取液加入到一些化妝品中,既可達(dá)到防腐抑菌效果,又可使化妝品達(dá)到更好的護(hù)膚和美白的功效。1材料和方法1.1菌株和菌株7種美容中藥均購自江蘇省淮安市廣濟(jì)醫(yī)藥連鎖有限公司,分別是竹茹、蘆根、白芍、白術(shù)、茯苓、白芷、薏苡仁。供試菌株為金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大腸桿菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、黑曲霉(Aspergillusniger)。金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和枯草芽孢桿菌采用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng),黑曲霉采用馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基培養(yǎng)。1.2高效電導(dǎo)率測試儀器HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋、DSX-280B不銹鋼手提式滅菌器、BCM-1000超凈工作臺(tái)、DH3600電熱恒溫培養(yǎng)箱、FW80型高速萬能粉碎機(jī)、電爐、天平、牛津杯(內(nèi)徑6mm、外徑8mm、高10mm)和其他實(shí)驗(yàn)室常用玻璃儀器等。1.3方法1.3.1中藥水利益可加味液的制備稱取7種美容中藥粉末各100g,分別用冷水浸泡30min,分2次加水煎煮:第1次加水600mL,第2次加水400mL,均待水開后改用文火煮30min,用紗布過濾;合并2次濾液,除去藥渣,濃縮至100mL,即得到濃度為1g/mL的各種中藥水煎液。經(jīng)過濾滅菌后保存?zhèn)溆谩?.3.2不同介質(zhì)對牛蒡杯的菌落采用牛津杯法測定水煎液抑菌活性。取2.0×108CFU/mL各種待測菌懸液0.1mL,涂布在相應(yīng)凝固平板上,之后每個(gè)平板放入2個(gè)滅菌牛津杯,其中1個(gè)為平行,1個(gè)用作對照(以無菌水為對照)。分別用移液槍取7種美容中藥水煎液加入牛津杯中,細(xì)菌37℃培養(yǎng)24h、黑曲霉28℃培養(yǎng)48h后,移去牛津杯,測定抑菌圈直徑,每組平行3次,取其平均值。1.3.3最低藥濃度試驗(yàn)以1g/mL中藥水煎液作為100%原液,無菌水兩倍法稀釋,得不同濃度提取液系列。配制牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基或馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基,每小試管1960μL分裝,121℃濕熱滅菌,冷卻后備用。準(zhǔn)確移取40μL2.0×108CFU/mL測試菌液加入相應(yīng)的小試管中,再加入中藥提取液2000μL,混勻,每個(gè)濃度做3個(gè)平行。設(shè)置陽性對照(加培養(yǎng)基和菌液,以無菌水代替中藥提取液加入小試管中)和陰性對照(加培養(yǎng)基和中藥提取液,不加菌液),細(xì)菌于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h,黑曲霉于28℃培養(yǎng)48h。肉眼觀察試管濁度,以不顯示濁度的最低藥液濃度作為MIC。并從以上培養(yǎng)物中分別取0.1mL涂布于牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基或馬鈴薯葡萄糖固體培養(yǎng)基平板上,于37℃或28℃下培養(yǎng)后觀察,以進(jìn)一步驗(yàn)證上述試管法的肉眼觀察結(jié)果。1.3.47種中藥水提取物穩(wěn)定性的研究1.3.4.1.紫外穩(wěn)定性將中藥水煎液分別在紫外燈(功率為20W)下處理10、30、60min,再測定其抑菌圈的大小。1.3.4.2.ph氧化用鹽酸和氫氧化鈉將中藥水煎液的pH值分別調(diào)至5、7、9,再測定其抑菌圈的大小。2結(jié)果與分析2.17超聲輔助提取蘆根多糖的抑菌圈7種美容中藥水煎液的抑菌效果如表1所示,抑菌圈直徑越大,抑菌活性越大,由表1可以看出,蘆根、白術(shù)、竹茹、茯苓對4種菌有較好的抑菌效果。蘆根對金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的抑制作用較大,抑菌圈直徑分別為(16.33±0.58)、(15.00±1.00)mm,這可能與蘆根含有多種多聚糖類、黃酮類及甜菜堿等抑菌物質(zhì)有關(guān)。姚以才等也曾研究發(fā)現(xiàn)超聲輔助提取獲得的蘆根多糖對酵母菌屬于極敏感,對金黃色葡萄球菌屬于高敏感,對枯草芽孢桿菌和黑曲霉屬于中敏感。白術(shù)對大腸桿菌的抑制作用最大,抑菌圈直徑為(16.00±1.00)mm,這可能與白術(shù)中含蒼術(shù)酮、倍半萜內(nèi)酯類等揮發(fā)油成分及白術(shù)多糖有關(guān)。竹茹對黑曲霉的抑制作用最大,抑菌圈直徑為(13.00±1.00)mm,這可能與竹茹中富含黃酮類化合物、總糖、內(nèi)酯、氨基酸和有機(jī)酸有關(guān)。茯苓對4種菌的抑菌圈均達(dá)到了10mm以上,這可能與茯苓中含有落新婦苷、異黃杞苷、胡蘿卜苷、皂苷等苷類化合物,琥珀酸、棕檳酸、阿魏酸、莽草酸等有機(jī)酸以及鞣質(zhì)、樹脂等抑菌成分有關(guān)。白芍和白芷對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的抑制圈均可達(dá)到10mm以上,但對于黑曲霉抑制效果較差。白芍的抑菌作用可能與其主要成分芍藥苷有關(guān),此外白芍中的鞣質(zhì)和揮發(fā)油也有抑菌作用。白芷的抑菌作用可能與其中的香豆素類有關(guān)。薏苡仁對4種菌的抑制效果都較差,對黑曲霉幾乎沒有抑制作用。薏苡仁中含有薏苡內(nèi)酯、薏苡多糖和茚類化合物等抑菌物質(zhì),但本試驗(yàn)采用的水煎法不太適合提取這些成分,因此造成試驗(yàn)結(jié)果中抑菌效果較差。2.27不同菌種對枯草芽孢桿菌mic的影響7種美容中藥水煎液對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和黑曲霉的MIC測定結(jié)果如表2至表5所示。由表2可知,蘆根水煎液對金黃色葡萄球菌的抑制作用最強(qiáng),其MIC為31.25mg/mL;其次為竹茹、白術(shù)、茯苓,其MIC為62.5mg/mL;再次為白芍和白芷,其MIC為125mg/mL;薏苡仁水煎液的抑菌效果最差,其MIC為500mg/mL。由表3可知,竹茹、蘆根、白芍、白術(shù)、茯苓水煎液對枯草芽孢桿菌的抑制作用最強(qiáng),其MIC為62.5mg/mL;其次為白芷,其MIC為125mg/mL;薏苡仁水煎液的抑菌效果較差,其MIC為500mg/mL。由表4可知,白術(shù)水煎液對大腸桿菌的抑制作用最大,其MIC為31.25mg/mL;其次為竹茹、蘆根、茯苓,其MIC為62.5mg/mL;再次為白芍、白芷,其MIC分別為125、250mg/mL;薏苡仁水煎液的抑菌效果最差,其MIC為500mg/mL。由表5可知,竹茹水煎液對黑曲霉的抑制作用最大,其MIC為62.5mg/mL;其次為蘆根,其MIC為125mg/mL;再次為白術(shù)和茯苓,其MIC為250mg/mL;白芍和白芷抑菌效果較差,其MIC為500mg/mL;薏苡仁水煎液對黑曲霉幾乎沒抑制作用。2.37關(guān)于中藥水煮溶液的穩(wěn)定性的研究2.3.1不同中藥水煎液的抑菌活性紫外線處理抑菌試驗(yàn)結(jié)果如表6所示。由表6可以看出,7種中藥水煎液經(jīng)紫外線處理后,其抑菌活性沒有明顯的變化,說明這些水煎液中的抑菌物質(zhì)對紫外線具有較高的穩(wěn)定性。2.3.2不同ph值對中藥水餅液抑菌性的影響pH值對7種中藥水煎液抑菌活性的影響測定結(jié)果如表7所示。由表7可以看出,在pH值為5和7時(shí),7種中藥水煎液的抑菌性能沒有受到明顯影響;但是當(dāng)pH值為9時(shí),其抑菌性能呈現(xiàn)不同程度的降低。由此可見,水煎液中的抑菌成分不耐堿,原因是堿處理可能會(huì)使某些抑菌成分與溶液中的堿性成分發(fā)生反應(yīng),從而使該物質(zhì)的抑菌性減小。如白芍中的抑菌成分芍藥苷在堿性環(huán)境下不穩(wěn)定,易降解。3不同中藥提取方法對受試菌的抑菌活性影響本試驗(yàn)采用的是傳統(tǒng)水煎法提取7種美容中藥中的抑菌成分,該方法操作簡單,用水作溶劑提取,可避免其他溶劑對皮膚的傷害;且提取出的抑菌成分能溶于水,且對濕熱穩(wěn)定。但水煎法也存在較多的缺點(diǎn):(1)煎煮法有效成分損失較多,尤其是水不溶性成份;(2)提取液中除有效成分外,往往雜質(zhì)較多,非有效成分不能被最大限度地除去,濃縮率不夠高;(3)高溫操作會(huì)引起熱敏性有效成分大量分解。在本試驗(yàn)中也存在這樣的問題:如茯苓中的某些有效成分(如鞣質(zhì)等)在較高溫度下長時(shí)間暴露于空氣中,易發(fā)生氧化而活性降低,甚至失活,因而造成茯苓水煎劑對受試菌的抑菌活性下降;白芷的主要活性成分香豆素類和白芍中的主要成分芍藥苷易受高溫影響,因而造成白芷和白芍水煎劑對受試菌的抑菌活性下降。目前中藥提取的方法很多,有浸漬法、滲漉法、回流法、水蒸氣蒸餾法、超臨界流體萃取、微波提取、超聲波提取、大孔吸附樹脂法等方法。在今后工作中,可比較不同方法得到的提取液的抑菌效果,為進(jìn)一步開發(fā)化妝品防腐劑提供理論依據(jù)。本試驗(yàn)選用的7種美容中藥均具有較好的美容功能,在潤澤皮膚、美白祛斑治痘、延緩衰老方面有較好的作用。本試驗(yàn)研究它們對腐敗菌的抑菌效果,結(jié)果顯示蘆根、竹茹、白術(shù)、茯苓對4種菌都有較好的抑菌效果。白芍和白芷對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的抑制圈均可達(dá)到10mm以上,但對于黑曲霉的抑制作用較差。在實(shí)際應(yīng)用中,可根據(jù)化妝品的配方,開發(fā)研制少用甚至不用合成防腐劑的天然美白中藥化妝品。此外,本試驗(yàn)只是初步研究了這7種美容中藥水煎液的抑菌性能,關(guān)于其具體抑菌物質(zhì)的研究還不是很透徹,有待于進(jìn)一步深入研究。另外還可