免疫分析法與轉(zhuǎn)基因食品檢測

第五章免疫分析法與轉(zhuǎn)基因食品檢測5.1免疫分析法5.2轉(zhuǎn)基因食品的分析免疫分析方法：利用抗體與抗原的特異性結(jié)合特性來實現(xiàn)食品中污染物檢測的方法。優(yōu)點：具有專一性、靈敏度高等優(yōu)點。其靈敏度與常規(guī)的儀器分析一致，適合現(xiàn)場篩選！檢測對象：生物性污染物(如病原微生物和寄生蟲)及其代謝產(chǎn)物(如生物毒素)的檢測和分析，化學(xué)污染物，如農(nóng)藥、獸藥抗生素和激素等的殘留分析。免疫學(xué)方法的種類：非常多，目前用于食品安全檢測的有：免疫凝集和沉淀法、放射免疫法、熒光免疫法、膠體金免疫層析法、酶聯(lián)免疫法（ELISA）等。5.1免疫分析法篩（查）選（Screening）的快速、半定量檢測方法之一ELISA方法為定量方法，靈敏度和特異性最高，單個檢測成本最低，靈敏度可達ng/kg級。ELISA方法

意大利Tecna公司美國Idexx公司英國Randox公司

Laboratories公司德國R-Biophanm公司

國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局曾經(jīng)推薦Randox公司的ELISA試劑盒作為動物激素和抗生素殘留的首選篩查方法。放射免疫方法

放射免疫檢測系統(tǒng)中最成功的是美國CHARMScience公司Charm6600/7600抗生素快速檢測系統(tǒng)，該檢測系統(tǒng)利用專一性受體來識別同一類抗生素中的母環(huán)，并以最快的速度同時檢測同一抗生素族在樣品中的殘留情況。目前CharmⅡ7600檢測系統(tǒng)對于β-內(nèi)酰胺類、氯霉素類、四環(huán)素類、磺氨類、鄰氯青霉素及堿性磷酸酶的檢測已被FDA認(rèn)可。

采用同位素標(biāo)記技術(shù)來檢測抗原抗體的高靈敏度方法，檢測限一般低于10-6g/kg！膠體金免疫層析法以競爭性免疫為基礎(chǔ)理論，用膠體金標(biāo)記特異性抗體并固化在玻璃纖維上，被檢組分與固化在硝酸纖維素膜上的抗原與膠體金標(biāo)記抗體競爭性的結(jié)合，以固化抗原的檢測點是否顯色及顯色深淺來判斷是否有待測組分及含量，此方法是速測技術(shù)研究的熱點。試紙條方法為定性方法，其特點為操作簡單，樣本處理后檢測時間短，但靈敏度比ELISA試劑盒低5～10倍，特異性差，僅適合殘留限量要求不高的少數(shù)藥物的粗篩。

生物傳感器技術(shù)

生物傳感器由生物識別元件、信號轉(zhuǎn)換器和檢測器等幾部分組成。其工作原理是：生物識別元件中的生物材料(例如抗體)特異性地識別待檢測的物質(zhì)，產(chǎn)生相應(yīng)的信號，轉(zhuǎn)換器將信號轉(zhuǎn)換成電信號，并通過檢測器進行分析，電信號的大小和待檢測物質(zhì)之間存在相關(guān)性。生物傳感器把檢測用的生物材料固定在生物識別元件上，在檢測過程中無需添加或只需添加少量的其他試劑，是典型的“無試劑”分析方法。優(yōu)點：靈敏度高、選擇性好、可微型化、便于攜帶，以及測定簡便迅速、檢測成本較低等優(yōu)點，表現(xiàn)出其他方法無法比擬的優(yōu)勢，在食品安全及品質(zhì)控制現(xiàn)場和在線檢測中發(fā)揮著越來越重要的作用。表面等離子體共振（SPR）快速檢測技術(shù)、DNA電化學(xué)生物傳感器測定鉛。

生物芯片

生物芯片(biologicalchip)的概念是20世紀(jì)80年代中期提出的。生物芯片主要包括DNA芯片和蛋白質(zhì)芯片(proteinchip)。生物芯片可按預(yù)先的設(shè)計，在面積很小(通常只有一到幾平方厘米)的硅片、玻璃片或高分子聚合物薄片上同時排列、固定大量的生物識別分子，例如DNA片段、RNA片段、抗原(或抗體)分子或蛋白質(zhì)(肽)等，所以在食品安全檢測中可實現(xiàn)同時檢測多個指標(biāo)，例如同時檢測多種抗生素和農(nóng)藥殘留等，表現(xiàn)出非常誘人的應(yīng)用前景。但是由于生物芯片相關(guān)的儀器設(shè)備比較昂貴，所以目前在食品安全檢測中的應(yīng)用還非常有限。方法檢測對象國內(nèi)外對比化學(xué)檢測技術(shù)有機磷靈敏度低酶抑制檢測技術(shù)有機磷和氨基甲酸酯國內(nèi)假陽性、假陰性率高，二十余家生產(chǎn)廠商，多種速測卡、速測儀，GB/T5009.199-2003；NY/T448-2001國外測定樣品和農(nóng)藥種類有限，歐美作為普查農(nóng)藥殘留和田間實地檢測的基本手段；AOAC官方方法964.17免疫分析法

有機磷類、氨基甲酸酯類、硫代氨基甲酸酯類、有機氯類、三嗪類、擬除蟲菊酯類和酰胺類等幾十種農(nóng)藥國內(nèi)研究活躍，但未有真正推廣使用的商品化產(chǎn)品國外技術(shù)成熟，靈敏度高，F(xiàn)AO推薦方法，美國USDA、EPA、AOAC制定了評定標(biāo)準(zhǔn)，但經(jīng)認(rèn)證的有限，經(jīng)EPA認(rèn)證的免疫試劑盒約有4個廠家的26種試劑盒：EPA方法4010、EPA方法4015EPA方法4040等生物傳感器有機磷、氨基甲酸酯國內(nèi)處于研究階段國外電導(dǎo)型生物傳感器、光尋址電位型傳感器、安培型傳感器，處于研究和應(yīng)用階段，并未廣泛推廣使用農(nóng)藥快速檢測技術(shù)目前我國有機磷及氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留速測產(chǎn)品的關(guān)鍵酶主要依賴進口或來自傳統(tǒng)遺傳育種家蠅的頭部蛋白提取液，酶純度低，活性不穩(wěn)定；進口酶主要來源于電鰻，屬不同生物種，對農(nóng)藥檢測靈敏度偏低。適宜對象：甲胺磷、乙酰甲胺磷、樂果、敵敵畏、對硫磷、甲基對硫磷、甲拌磷、辛硫磷、倍硫磷、久效磷、殺撲磷、馬拉硫磷、氧化樂果、抗蚜威、伏殺磷、內(nèi)吸磷、克百威、涕滅威、滅多威、敵百蟲、甲萘威、二嗪磷。農(nóng)業(yè)部蔬菜農(nóng)藥普查指標(biāo)：甲胺磷、乙酰甲胺磷、樂果、敵敵畏、氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、毒死蜱、六六六、滴滴涕、多菌靈、百菌清、三唑酮等。方法檢測對象國內(nèi)外對比免疫分析法ELISA方法獸藥的單殘留檢測國內(nèi)鹽酸克侖特羅、磺胺二甲嘧啶試劑盒、試紙等20余種產(chǎn)品，假陽性率高，市場占有率大約50%左右獸藥的單殘留檢測、多殘留檢測國外廣泛應(yīng)用，意大利Tecna公司、美國Idexx公司、英國Randox公司、Laboratories公司和德國R-Biophanm公司等均有產(chǎn)品，2001年國家質(zhì)檢總局推薦Randox公司的ELISA試劑盒作為動物激素和抗生素殘留的首選篩查方法，AOAC的官方網(wǎng)站上登記有15個廠家的100多種商品試劑盒，經(jīng)FDA認(rèn)證或AOAC確證的試劑盒占50多種放射免疫方法檢測同一類抗生素國內(nèi)DB33/T473-2004：放射免疫快速檢測β-內(nèi)酰胺類、磺胺類和氨基糖苷類鏈霉素型藥物殘留量檢測同一類抗生素國外美國CHARMScience公司Charm6600/7600抗生素快速檢測系統(tǒng)，可測β-內(nèi)酰胺類、氯霉素類、四環(huán)素類、磺氨類、鄰氯青霉素等，F(xiàn)DA認(rèn)可膠體金試紙條少數(shù)獸藥國內(nèi)研究活躍，但未有真正推廣使用的商品化產(chǎn)品國外靈敏度比ELISA試劑盒低5～10倍，特異性差，僅適合殘留限量要求不高的少數(shù)獸藥的粗篩蛋白芯片多殘留獸藥的檢測國內(nèi)有微陣列芯片產(chǎn)品，但因價格相對較高，未推廣使用國外有多種商品化芯片，但靈敏度需進一步提高獸藥快速檢測技術(shù)食品中農(nóng)藥、獸藥殘留監(jiān)控技術(shù)及產(chǎn)品克侖特羅快速檢測試劑盒紅霉素快速檢測試劑盒粘桿菌素快速檢測試劑盒林可霉素快速檢測試劑盒呋喃妥因快速檢測試劑盒己烯雌酚快速檢測試劑盒鹽霉素快速檢測試劑盒慶大霉素快速檢測試劑盒新霉素快速檢測試劑盒磺胺二甲基嘧啶快速檢測試劑盒氯霉素快速檢測試劑盒呋喃它酮快速檢測試劑盒磺胺二甲氧嘧啶快速檢測試劑盒呋喃唑酮快速檢測試劑盒四環(huán)素類藥物快速檢測試劑盒泰樂菌素快速檢測試劑盒萊克多巴胺快速檢測試劑盒鏈霉素快速檢測試劑盒磺胺七合一檢測試劑盒磺胺喹惡啉試劑盒恩諾沙星檢測試劑盒玉米赤霉醇檢測試劑盒喹諾酮類總殘留（十二合一）檢測試劑盒阿維菌素類藥物多殘留酶聯(lián)免疫試劑盒鹽酸克倫特羅快速檢測試紙條鹽酸克倫特羅快速檢測試劑盒氯霉素快速檢測試紙條氯霉素快速檢測試劑盒磺胺間甲氧嘧啶快速檢測試劑盒有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留酶抑制法檢測試劑盒毒死蜱酶抑制法試劑盒甲胺磷殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒對硫磷殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒3,5,6-三氯二吡啶醇膠體金快速檢測試紙條苯菌靈膠體金快速檢測試紙條除草定膠體金快速檢測試紙條毒死蜱膠體金快速檢測試紙條禾草靈膠體金快速檢測試紙條甲草胺膠體金快速檢測試紙條乙草胺膠體金快速檢測試紙條甲萘威膠體金快速檢測試紙條甲霜靈膠體金快速檢測試紙條綠麥隆膠體金快速檢測試紙條霜霉威膠體金快速檢測試紙條西瑪津膠體金快速檢測試紙條溴苯腈膠體金快速檢測試紙條異丙草胺膠體金快速檢測試紙條異丙甲草胺膠體金快速檢測試紙條莠去津膠體金快速檢測試紙條丁草胺檢測試紙問題：獸藥殘留快速檢測50%以上依賴進口儀器和試劑盒（卡），價格較高，如萊克多巴胺檢測試劑盒3200元/96次，而國產(chǎn)試劑盒因價格與國外進口產(chǎn)品差距不大（是進口產(chǎn)品價格的80%左右），推廣受到限制。5.2轉(zhuǎn)基因食品的分析轉(zhuǎn)基因食品屬于新資源食品轉(zhuǎn)基因食品的安全性是國際、國內(nèi)的熱點話題安全性如何評價？轉(zhuǎn)基因食品檢測技術(shù)：主要有PCR（核酸水平）；其他檢測手段還有ELISA（蛋白質(zhì)水平）、質(zhì)譜分析、近紅外光譜技術(shù)等人類染色體組型圖

芳香胺類的致癌物

二萘胺CAS號：91-59-84-氨基聯(lián)苯CAS號：92-67-1２-甲基苯胺CAS號：95-53-4聯(lián)苯胺CAS號：92-87-560兆個細(xì)胞；

23對染色體（單細(xì)胞內(nèi)的染色體拉成直線

大約有1.83米長）；

20000~25000個基因（比老鼠多

1%）；

30億個堿基對（單倍體）GenBank70,000多種生物的核苷酸序列的數(shù)據(jù)庫人類遺傳信息基本數(shù)據(jù)：/genbank/我們這個星球上最偉大的秘密轉(zhuǎn)基因食品檢測原理：通過基因擴增技術(shù)（PCR），在體外由引物介導(dǎo)的DNA聚合酶催化的聚合反應(yīng)，能夠在短時間快速準(zhǔn)確的將一個目的序列大量復(fù)制。過程是首先在90-95℃的高溫下使模板DNA變性，雙鏈解開，然后降低溫度至40-60℃，兩引物分別與單鏈模板互補區(qū)退火，形成局部雙鏈，延伸擴增的結(jié)果是得到目的片段的復(fù)制品。變性、退火、延伸，3步構(gòu)成一個循環(huán)，目的基因擴增一倍…….。第一步：DNA提取把樣本細(xì)胞核中所含有DNA提取出來，然后進行一定的純化，排除樣本中的雜質(zhì)。第二步：PCR擴增

PCR的中文名為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)，簡單的說，PCR擴增這一步就是把所需要的片段通過酶促反應(yīng)，在PCR儀上進行大量復(fù)制，放大到通過某些專用儀器可以看到的程度。第三步：后PCR反應(yīng)這一步主要是上DNA測序儀檢測的準(zhǔn)備階段，將雙鏈的