實驗五 激素對血糖濃度的影響

實驗五

激素對血糖濃度的影響

2021/5/91一、實驗?zāi)康?.掌握GOD-POD法測定血糖的原理及方法。2.觀察胰島素、腎上腺素對血糖濃度的影響。3.了解家兔耳緣靜脈取血的方法。2021/5/92二、實驗原理1.血糖是指血液中的葡萄糖。

人體生理血糖水平維持在3.89~6.11mol/l。2.血糖的來源與去路2021/5/933.血糖的激素調(diào)節(jié)降低血糖：胰島素升高血糖：腎上腺素、胰高血糖素、糖皮質(zhì)激素和生長素等。胰島素是唯一降低血糖的激素。

胰島素促進(jìn)肝臟和肌肉將葡萄糖氧化合成糖原，又加強(qiáng)糖的氧化作用，故可以降低血糖。升高血糖的激素以腎上腺素作用迅速而明顯。腎上腺素通過促進(jìn)肝糖原分解而升高血糖。2021/5/944.血糖測定的意義臨床：血糖檢測是目前診斷糖代謝異常相關(guān)疾病的主要依據(jù)?？蒲校涸诖x疾病的研究中，常測定血糖。在某些藥物的研究中，也涉及血糖的測定。2021/5/95測定方法無機(jī)化學(xué)法：Folin-Wu法有機(jī)化學(xué)法：鄰甲苯胺法酶法：葡萄糖氧化酶法5.血糖測定的常用方法2021/5/96（1）葡萄糖＋O2＋H2O（2）4-氨基安替吡啉＋苯酚＋H2O2葡萄糖酸＋H2O2葡萄糖氧化酶（GOD）H2O＋紅色醌類化合物過氧化物酶（POD）505nm光吸收法測定相對血糖濃度6.GOD-POD法原理2021/5/977.朗伯-比爾定律當(dāng)一束平行的單色光通過均勻、無散射的溶液時，在光強(qiáng)度、溫度等條件不變的情況下，溶液吸光度與溶液的濃度及液層厚度的乘積成正比。

Ａ=ＫＣＬ2021/5/98標(biāo)準(zhǔn)管法測定未知樣品含量A標(biāo)=KC標(biāo)LA測=KC測L

C測=A測A標(biāo)×C標(biāo)2021/5/99722G型分光光度計的使用1.接通電源，打開開關(guān)，調(diào)整波長。2.比色杯中加入空白及待測樣品，并放入分光光度計中，注意：加入樣品量不超過比色杯體積的3/4。3.

調(diào)模式為“T（透射比）”，對空白對照進(jìn)行調(diào)“0”（開蓋）和調(diào)“100”（閉蓋）。4.調(diào)模式為“A（吸光度）”，測定待測樣品的吸光度值。2021/5/910三、主要儀器與試劑試劑：胰島素，腎上腺素

酒精，草酸鈉，蛋白沉淀劑

酶酚混合試劑，苯甲酸溶液

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液（100mmol/L）

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（5mmol/L）2021/5/911四、實驗操作1.準(zhǔn)備：正常家兔兩只，實驗前預(yù)先饑餓16h，稱體重,并記錄（kg）。兔子抓取方法：一手抓取頸背部皮膚，另一只手托臀部。2.制備抗凝管：在潔凈、干燥的試管中放入一小勺抗凝劑（草酸鈉）。3.注射前取血：一般以耳緣靜脈取血，拔毛，用乙醇擦洗，使血管充血（彈動幾下），在耳緣靜脈外側(cè)遠(yuǎn)心端用三棱針扎破放血，將血液滴入抗凝管中，約取1~2ml，邊收集邊混勻，以防血液凝固。取血后用干棉球壓迫血管止血。2021/5/9124.注射激素：取血后，一只注射胰島素，0.75U/kg，60min。

另一只注射腎上腺素，0.5mg/kg，30min。

注射方法：皮下注射。肚皮朝上，掂起皮膚，刺入皮下有落空感，回抽無血，緩慢注入激素。5.制去蛋白血濾液：這是注射前的血液。

制備方法：蛋白沉淀劑4ml＋全血0.2ml，混勻，室溫放置7分鐘后，在漏斗上過濾，取濾液，標(biāo)記為注射前的去蛋白血濾液。6.注射后取血并制備血濾液：方法同前，選擇另一只耳朵，注意做好標(biāo)記。注射胰島素的家兔，取血后立即腹腔或皮下注射25%葡萄糖注射液10ml，以免家兔發(fā)生胰島素性休克。2021/5/9137.GOD-POD法測血糖：按下表操作混勻，置37℃水浴15min，調(diào)節(jié)波長505nm，以空白管調(diào)零，分別讀取

A測、A標(biāo)。

讀取6個A值并記錄：A腎前、A腎后、A標(biāo)A胰前、A胰后、A標(biāo)加入物(ml)測定管

(注射前)測定管(注射后)標(biāo)準(zhǔn)管空白管去蛋白血濾液0.50.5––葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液––0.5–蛋白沉淀劑–––0.5酶酚混合試劑3.03.03.03.02021/5/914五、結(jié)果與分析按下式分別計算注射胰島素或腎上腺素前、后血糖濃度：

A測C測＝×C標(biāo)（5mmol／L）