ACE基因的多態(tài)性

實驗1頰粘膜上皮細(xì)胞基因組DNA的抽提及ACE基因多態(tài)性分析1精選ppt一、實驗?zāi)康恼莆諒奈⒘縼碓吹慕M織細(xì)胞中抽提基因組DNA掌握PCR技術(shù)原理了解基因多態(tài)性分析的方法。2精選ppt二、原理基因組DNA抽提堿裂解法抽提基因組DNA〔本實驗〕用蛋白酶K和苯酚提取大分子DNA裂解-蛋白酶K-沉淀法快速提取DNAACE基因多態(tài)性分析PCR方法分析基因多態(tài)性3精選ppt真核生物基因組中非編碼序列多于編碼序列基因組編碼序列非編碼序列調(diào)控序列重復(fù)序列高重復(fù)序列〔串聯(lián)排列，大衛(wèi)星、小衛(wèi)星、微衛(wèi)星〕中重復(fù)序列〔散在分布；局部編碼；Alu家族〕低重復(fù)序列或單拷貝4精選ppt

Alu家族重復(fù)單位：300bp左右；130+31+130bp具Alu酶切位點30-50萬次功能：基因調(diào)控Alu元件的插入、刪除和重組與許多先天性遺傳疾病和癌癥相關(guān)

5精選pptACE基因多態(tài)性分析

(血管緊張素轉(zhuǎn)換酶,Angiotesinconvertingenzyme,ACE)基因診斷：利用現(xiàn)代分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的方法，從DNA、RNA水平檢測基因的存在、結(jié)構(gòu)異常和表達(dá)狀態(tài)，從而對疾病做出診斷的方法?；蚨鄳B(tài)性：指在一隨機婚配的群體中，染色體同一基因座位點上有兩種或兩種以上的基因型，它可決定人體對疾病的易感性、臨床表現(xiàn)多樣性和對藥物治療反響的差異性。6精選ppt理論根底ACE基因第16內(nèi)含子存在一段長度為287bp〔Alu序列〕的插入/缺失〔I/D〕多態(tài)性片段，I/D多態(tài)性與血液ACE水平有明確關(guān)系，DD型ACE水平最高，ID次之，II最低。左室肥大患者中DD型頻率明顯增高。實驗原理以DNA為模板，ACE基因特異的引物序列位于287bp插入/缺失片段的兩側(cè)進(jìn)行PCR擴增，故II型擴增片段長度約為490bp，DD型擴增片段長度約為190bp，ID型擴增片段為２個，分別為190bp和490bp。根據(jù)PCR擴增片段的大小可進(jìn)行多態(tài)性分析。7精選ppt插入片段插入型缺失型490bp190bp8精選ppt操作步驟基因組DNA抽提PCR反響瓊脂糖凝膠電泳檢測9精選ppt1.基因組DNA抽提溶液Ⅰ10ml漱口20秒收集漱口水；3000g×5min×RT，棄上清；溶液Ⅱ250ul重懸沉淀；3000g×1min，棄上清；溶液Ⅲ250ul重懸沉淀，振蕩10秒；〔變性〕轉(zhuǎn)至0.5ml離心管，99℃×5min；加溶液IV50ul振蕩5秒；〔中和〕3000g×1min，上清轉(zhuǎn)移至新0.5ml離心管，取5ul用于PCR.10精選ppt2.PCR反響取消毒的0.5ml離心管，參加以下成分：10×PCRBufferdNTP(2.5mMeach)mix:10μlTaqDNApolymeraseDNA模板5μl引物混合物(10μMeach)2μlddH2O3μl

總體系20μl擴增程序為：94℃變性30s，55℃復(fù)性30s，72℃延伸40s，共反響35個循環(huán)。11精選ppt瓊脂糖電泳檢測