獸醫(yī)臨床病理學(、第三節(jié))資料

第三節(jié)臨床化學檢驗一、臨床化學自動分析儀世界上第一臺用于臨床生化檢驗的自動分儀，是美國泰克尼康公司(TECHNICON)，于1957年生產的，儀器名為AutoAnalyzer。是一臺單通道、達續(xù)、流動式自動分析校。最初只用于Glu.BUN測定。報告結果是光密度值。1964年，泰克民康公司又生產出連續(xù)多道自_$析儀SMA(SequentialmultipleAutoanalyzer)，該儀器由電子計算機控制，每小時測150個樣本，每個樣本同時測定20個項目，使連續(xù)流動分析達到了一個新的水平。65年以后，各種自動分析儀器應運而生。I.目前臨床常用的自動分析儀器有：（1）生化分析儀：有全自動、半自動之分國產：上海、北京等，4萬元以上；進口：美國、日本、法國、意大利、瑞士等，10-15萬元;（2）血氣酸堿分析儀；（3）血細胞計數儀；（4）5020型血紅蛋白儀：（5）全自動電位滴定儀：DL5815萬元/臺（6）全自動血液細胞分析儀：BC-2000,15萬元/臺評價自動分析儀器的原則:(1)方法先進(2)(3)(4)(5)(6)(7)(8)(9)重復性好；要有準確重復的分析系統;能自動定時；結果報告醒目、直觀；適應范圍廣，機多用靈敏性好；質量控制1.質量控制的目的保證檢測結果準確可靠，同時起到：(1)了解試驗結果精密度的動態(tài)情況；(2)觀察試驗結果漂移及增降趨勢；從而采取措施預防嚴重誤差的出現。(3)與國家規(guī)定的標準物進行比較，以了解和校正其準確度；(4)為不同測定方法的比較及選擇提供參考；(5)監(jiān)測儀器的工作狀態(tài)；(6)了解操作者的操作水平；____(7)作實驗室間的比較，以利相互交流和提高。2.與質量控制有關的概念【誤差】指的是實驗結果與真實數值之間的差異。①系統誤差（恒定誤差）分析過程中一些經常性出現的原因所成。儀器使用不當分析方法不完善試劑不純環(huán)境改變操作失誤您隨機誤差（偶然誤差）（事先無法預料，出現誤差的大小沒有規(guī)律，完全符合概率論定律。這種誤差通過嚴格操作規(guī)程，認真細致的工作是可以減少。當測定次數增多時，此時誤差可相應抵消。③過失誤差由工作不慎或操作不當而引$。如配錯試劑，搞錯樣本，操作不i確，讀數、id錄或itM*誤等。④絕對誤差即測定值與真值之差。如:稱量為1.655g,實重1.654g,絕對誤差為0.001g。⑤相對誤差：___絕對誤差在真實數值中所占的百分率如上例：相對誤差=0.001/L654X100%=0.06%】測定值與真值之間的符合程度。誤差愈小，準確度越大?！揪芏取棵看螠y定值與算術平均值之間的符合程度。通常把測定值與算術平均值之間的差異稱之為偏差。偏差愈小，精確度愈高。?W1~減少誤差的措施①糾正系統誤差a.校準儀器和量具：b.作陰性、陽性對照；c.用多種方法相互比較:d.用參照標準樣本檢驗。偶然誤差a.精心操作，嚴格執(zhí)行操作規(guī)程；b.固定使用已校正的儀器；c.重復測定取均值等。③消除過失誤差a.作好原始記錄；b.建立核對檢查制度；c.制訂統一的操作規(guī)程，人人遵守。三、臨床化學檢驗（一）.常用的檢驗項目①蛋白質；②葡萄糖；③脂類；④無機離子⑤有機物：BUN,尿酸，肌肝、肌酸；⑥微量元素：Cu、Fe、Mn、Zn、Se、Co、Mo；⑦血氣分析與酸堿平衡等。項檢驗【蛋白質I1.研究進展迅速①蛋白質的合成、降解、轉換更新和代謝調節(jié)②蛋內質生理功能的進一步研究。③蛋白質的遺傳變異，通過它了解遺傳特征。④以新技術對血漿蛋白質進行微量和特異檢測分析。⑤在進化與個體發(fā)育的研究中，發(fā)現不少正常胎兒期蛋白可以在惡性腫瘤患者重新出現。⑥蛋白質實際用于組織與細胞培養(yǎng)。⑦在腫瘤的發(fā)病學研究中廣泛涉及血漿蛋白質。.蛋白質的功能可概括為：_營養(yǎng)作用維持血漿膠體滲透壓維持血漿正常pH值運輸作用免疫與防御功能催化作用代謝調控凝血、抗凝血及纖溶作用等。A'"I蛋5質的分類鹽析法：白蛋白和球蛋白電泳法：白蛋白、＜11、a2、B、Y球蛋白Alb,①凱氏定氮法（參考標準方法）消化蒸餾吸收滴定用濃硫酸將蛋白質消化為硫酸銨;用堿性溶液堿化消化液并蒸餾揮發(fā)（耗時）用酸性溶液（硼酸）吸收氣態(tài)氨（使［H+］丄）用已標定的無機酸滴定，計算總氮量定蛋白（總氮量-非蛋白氮）X6.25=蛋白含量I②

雙縮脲比色法（血漿總蛋白測定推薦方法）原理蛋白質中的肽鍵（-CONHO在堿性條件下與'Cu2+絡合成紫紅色化合物，產生的顏色在一定范圍內與蛋白質含量成正比。此反應和二分子尿素縮合后的產物雙縮脲（H2N-C0-NH-C0-NH2）與堿性銅溶液作用形成紫紅色化合物的反應相似，故稱為雙縮脲反應。此方法簡便、準確、重復性好，但靈敏度較其它方法稍差，是目前臨床上最常規(guī)的方法。紫外分光光度法原理蛋白質分子中的酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白質溶液在280nm處有.?吸收峰?？捎糜跍y定蛋白質但需避免核酸十擾。優(yōu)點)敏感而簡便，可保留蛋白生物活性。需紫外分光光度計及石英比色皿。{缺點.,nf

I_各種蛋白質中芳香族氨基酸含量和比例不同；在280?測定易受游離色aa和酪aa以及尿酸和膽紅素的干擾；導致準確性和特異性受影響。*'■④折光測定法原理溶解在溶液中的固體可增加溶液的光折射率，在固定波長和溫度下，光折射率和血清中蛋白質含量成正比。優(yōu)點簡便、快速，易掌握，重復性較好，適合臨床;缺點準確性較差。⑤自動生化分析儀測定應用TPt:少見，屬相對性；常見于脫水、休克、某些腫瘤等；TPI:肝臟疾病、腎臟疾病、腸道吸收不良At:少見屬相對性，。常見于脫水、休克。AI:肝炎、肝硬化、慢性胃腸疾??；某些寄生蟲感染、長期饑餓或營養(yǎng)不良。G；:飼喂初乳不足、免疫缺陷病;A/G倒置是肝功能損害的一個重要指標。…葡萄糖】(BG—BloodGlucos)I一、血糖的來源、去路和調節(jié)|了糖的來源與去路來源去路圖9-1血糖的來源與去路食物中的糖類-->-——有氧氧化血糖?肝糖原分解-■>3.9?6.7——無氧酵解糖異生作用-〉mmol/L-合成糖原其他單糖轉化-■?-＞轉化為甘油、脂肪酸、氨基酸和其他糖類.糖的生理功能（能量資源和結構材料）①氧化供能：分解代謝提供機體75%能量；②機體組成成分之一糖占機體干重的2%;形成糖原儲存在肝臟與肌肉中：形成糖蛋白和蛋白多糖（激素、酶、受體等）、糖脂（神經組織和細胞膜重要組分）；③轉變作用其它糖及糖衍生物（核糖、脫氧核糖、氨基多糖）等；非糖物質（脂肪、氨基酸核酸）。④糖代謝紊亂->供能障礙->一系列代謝變化。1.血糖水平恒定的生理意義保證重要組織器官的能量供應，特別是某些依賴葡萄糖供能的組織器官I①腦組織不能利用脂酸，正常情況下主要依賴葡萄糖供能；②紅細胞沒有線粒體，完全通過糖酵解獲能；③骨髓和神經組織代謝活躍，經常利用葡萄糖供能。：.血糖濃度的調節(jié)①肝臟調節(jié)轉運調控：肝細胞膜G載體可允許G快速轉運，達到平衡時，肝內外G濃度幾乎相等。；酶的雙向調控：通過神經-激素的作用，使肝細胞內各種糖代謝的酶活性改變。1葡萄糖-6-磷酸酶，可促進肝糖原水解，補充和升高血糖。v

1促進組織攝取葡萄糖，促進肝糖原合成、抑制肝糖原分解、抑制糖異生而降糖。2）神經調節(jié)主要通過下丘腦和自主神經（交感和副交感）直接作用于肝臟獲調節(jié)激素的分泌而影響血糖。③激素調節(jié)降糖激素：胰島素胰島素樣生長因:升糖激素：胰高血糖素腎上腺素生長激素皮質醇甲狀腺激素--級反應+促進或激活---二級反應一抑制圖9-3血糖調節(jié)的主要機制1.高血糖癥與糖尿病高血糖癥：空腹血漿血糖(FPG)>7.3mmol/L(130mg/dl)高糖飲食；生理性：情緒緊張；腎上腺分泌見于糖尿?。粌确置谙俨±硇裕汗δ芸哼M；顱內壓升高刺激血糖中樞；脫水。尿糖：若血糖濃度高于腎糖閾值9.Ommol/L,即超過了腎小球濾過率，出現尿糖。糖尿病(diabetesmellitus,DM)定義：是一種慢性、復雜的代謝紊亂性疾病，系胰島素相對或絕對不足，或利用缺陷引起。臨床特征：血糖持續(xù)升高，甚至出現糖尿?！叭嘁簧佟保憾嗄?、多飲、多食、體重減輕。發(fā)病機制①胰腺0細胞的自身免疫性損傷②機體對胰島素的作用產生抵抗.低血糖癥低血糖癥是指血糖濃度低于2.2mniol/L時臨床出現一系列因血糖濃度過低引起的癥候群。I發(fā)病原因來源＜去路(①激素效應：升血糖激素缺乏，降血糖激素過剩。②肝臟疾?。焊喂乐負p傷致肝糖原減少和糖異生嚴重障礙。③長期饑餓或劇烈運動時代謝率增加，血糖消耗過多。酮體形成過多引起血中含量增高，稱為酮血癥。酮體：乙酰乙酸（20%）、羥丁酸（78%）、丙酮（2%）三者統稱為酮體原因：①糖尿?、谔菙z入不足：脂肪動員③糖原儲存過多：脂肪動員④堿中毒：代償NADH+H*NAD+兩酮CH3CHCH2COOH/D(-)-p-羥丁酸/0IfQUQQUI糖代謝障礙1旨肪酸分解/a2酰乙sP?羥丁酸脫氫晦SES臨床意義：___如有酮體存在，需確定酮酸中毒狀態(tài)；酮血癥的診斷對指導胰島素治療最有價值。.體液葡萄糖的測定方法1.無機化學法Folin-Wu法，基于葡萄糖醛基的還原性Cu2+—Cu+;

特異性差。2.有機化學法：鄰甲苯胺法、聯苯胺法、氨基聯苯法等鄰甲苯胺+Glu^葡萄糖基胺希夫氏堿（藍綠色）影響因素多。.酶法測定①己糖激酶法（HK法）葡萄糖+ATPHK

葡萄糖-6-磷酸+ADP葡萄糖-6-磷酸+NADP+G-6-PDr

6-磷酸葡萄糖內酯+NADPHNADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加與標本中的葡萄糖濃度成正比。本法特異性高，靈敏度高，干擾因素少，適用于自動化分析，為葡萄糖測定的參考方法，但是試劑較貴。葡萄糖+02+H20■wn②葡萄糖氧化酶法(GOD)>葡萄糖酸內酯+H2022H202+4-氨基安替比林+酚->紅色醌類化合物+H20+02操作簡單，特異性較高，是血糖測定的首選方法.但溶血、GSH、Vc、膽紅素等可引起測定結果負偏差。4.自動生化分析儀測定測定的臨床應用了解況y鯉酗的功能，BSf:①糖尿??；②腎上腺皮質機能亢進;③垂體機能亢進；④反芻獸氨中毒；⑤牛生產癱瘓；⑥用胰島素過量；⑦綿羊腸毒血癥等BS；：①腎皮質功能不全；②胰島素分泌過多③肝功能不全；④牛的酮?。虎菪律仔蟮脱堑?。血脂類】血脂：膽固醇、膽固醇脂、甘油三脂、磷脂等。1.測定方法：)移量法：老方法，現已不用；：化學方法：硫磷鐵反應法強酸試劑顯色法I薄層析法：I酶法測定：70年開始，需紫外分光光度計、氧電極等，昂貴，少用。自動生化分析儀：多釆用酶法測定，試劑盒較貴。應用:動物原發(fā)性血脂癥較少主要是了解繼發(fā)性疾病:如：內分泌障礙；肝臟疾??；胰腺疾??；腎臟病等?！狙杏袡C物】包括尿素痰（BUN）、尿酸、肌酸、肌肝等1.測定方法：半定量試紙法；色譜試紙法；定量比色法；自動生化分析儀測定。}2.臨床應用：i①診斷泌尿系統疾?。旱Y時BUNt，腎功能障礙時肌肝t；

腎炎時尿酸f。②鑒別肝臟疾病：肝病、肝硬化等，BUNI③判斷疾病的預后：肌肝＞50mg/L,提示嚴重腎損傷，預后不良;肌肝〉100mg/L，動物即可死亡?！狙狟機離子測定】包括K、Na、Ca、Pi、Cl、Mg等1.測定方法：火焰光度法：離子選擇電極法；化學法：仍常用原子吸收分光光度法：較理想，儀器較貴;2.臨床應用了解機體離子的代謝狀況。:【微量先素測定】包括Cu、Fe、Mn、Zn、Se、Co、Mo等1.測定方法：原子吸收分光光度法；極譜儀法。2.臨床應用①微量元素與生長發(fā)育的關系Cu>Fe>Mn>Zn>Co、I等促生長；_缺乏其中一種，可引起發(fā)育停滯。___給發(fā)育不良的動物補Mn、Co，可加速生長，增加體重。_____________...........②微量元素能影響內分泌：r)鉛、鎘、汞過多會干擾內分泌的功能。缺Fe:①出現糖尿??；②生殖器官發(fā)育不全;③性功能紊化。缺Mn:①胰島數目少；②Glu利用I;③精子數目I;缺Zn:①性功能I；②睪丸縮?。虎劬由赏ｎD。C.微量元素與疾病