細菌性食源性疾病及其病原學檢驗規(guī)程課件-

細菌性食源性疾病由細菌通過攝食而進入人體的，使人體患感染性或中毒性的一類疾病。屬食源性疾病范疇，主要包括細菌性腸道傳染病和細菌性食物中毒細菌性腸道傳染病屬我國法定傳染病，主要包括霍亂、痢疾、傷寒、副傷寒及新近參照傳染病管理的由腸出血性大腸埃希菌O157引起的出血性腸炎細菌性食物中毒人體攝入了被細菌或其毒素污染的食品后所出現(xiàn)的非傳染性急性、亞急性疾病細菌性食源性疾病處置程序

細菌性食物中毒應急處理程序（附圖1）

首接單位可能是區(qū)縣疾控中心或區(qū)縣衛(wèi)監(jiān)所

衛(wèi)生監(jiān)督所負責調(diào)查處理，疾控檢驗機構(gòu)配合檢驗

細菌性腸道傳染病應急處置程序（附圖1）

聯(lián)合應急處理小組中疾控中心負責流調(diào)和病人采樣，衛(wèi)生監(jiān)督所負責衛(wèi)生調(diào)查和食品環(huán)節(jié)采樣

現(xiàn)場調(diào)查

根據(jù)患者的臨床癥狀，核實診斷，初步判斷是否屬食物中毒或食源性疾病現(xiàn)場流行病學個案調(diào)查衛(wèi)生學調(diào)查確定常見細菌性食源性疾病和食物中毒的樣品采集種類與范圍和相關檢驗項目

細菌性食源性疾病的主要臨床特征（附表1）

細菌性食源性疾病有關癥狀與病原學檢驗項目、檢驗樣品關系（附表2）樣品采集流程樣品采集與送檢流程無菌采樣方法采集及時做好樣品標記，完整填寫采樣送檢申請單（見附表4）詳細填明檢樣名稱、來源、送檢時間、中毒情況、患者主要臨床癥狀、檢驗項目等

樣品采集數(shù)量

學校等集體單位至少采集新發(fā)病人或具有典型的臨床癥狀、未經(jīng)過抗生素治療的樣品（糞便或肛拭）10份

可疑食品應采集5份（留樣食品、原配料、半成品）食品容器、用具和加工設備等環(huán)節(jié)采樣5－10份

食堂或盒飯公司從事食品從業(yè)人員進行肛拭采樣

樣品采集注意事項

采樣用的試管、瓶子、盛器、剪刀、鑷子、棉拭等均應無菌采樣用的生理鹽水、卡里運送培養(yǎng)基及有關試劑等都應該滿足新鮮、無菌的要求，同時應符合采樣所需要的試劑量，卡里運送培養(yǎng)基為5ml/管為宜肛拭、食品和環(huán)節(jié)等采樣，其采樣量須滿足必須開展的檢驗項目的要求，如肛拭采樣至少要用2根棉拭，食品采樣應盡量多于25g（ml）以上采樣的同時，應及時做好樣品標記，完整填寫采樣單。立即將檢樣送檢驗室，并有交接手續(xù)

各類樣品采集方法（1）可疑食物、水樣：將殘余食物或水樣用滅菌鑷子或匙采取后置于滅菌容器中。體積較大的魚、肉應在表面消毒后取內(nèi)部檢樣。罐頭樣品可直接送檢

環(huán)節(jié)樣品：炊事用具如鍋、碗、刀、抹布、操作人員的手等用棉拭涂擦采樣，菜墩用刀刮取表面后將刮取物放入滅菌容器中

各類樣品采集方法（2）糞便、肛拭：糞便標本應盡量在病程早期和治療前采集，同時應采集新鮮糞便，選取有膿血、粘液部分3-5克、水樣便取含絮狀物的2-5ml，盛于無菌容器中及時送檢。若無法獲得糞便時，可用保存液或增菌液濕潤過的棉拭子插入肛門4-5cm深處（小兒2-3cm），輕輕轉(zhuǎn)動一圈，擦取直腸表面的黏液后取出，盛入運送培養(yǎng)基或保存液中送檢。注意為保證多個檢驗項目的開展，同一病人應至少采集2支肛拭

各類樣品采集方法（3）嘔吐物：直接放入無菌容器中及時送檢

咽拭樣品：采集時應將棉簽檫拭咽喉及扁桃體紅腫處（特別是白膜處），然后將棉簽插入4-5ml生理鹽水中，尾部棄去

血液：采集患者急性發(fā)病期（3天內(nèi)）和恢復期（2周左右）各3ml全血分離血清送檢

色原（熒光）氨基酸結(jié)合物氨基酸+色原（熒光）觀察存在于檢品中特種形態(tài)的細菌如霍亂弧菌、彎曲菌，為進一步的檢驗提供有用的信息由細菌通過攝食而進入人體的，使人體患感染性或中毒性的一類疾病。各類樣品采集方法（3）純培養(yǎng)大腸桿菌0157:H7檢測從業(yè)人員：據(jù)食物中毒的情況要求，可采取售貨員或制作食品的工作人員及直接或間接接觸食品的有關人員肛拭檢樣，特別對那些在事件發(fā)生前或現(xiàn)正患有腸炎、發(fā)燒、化膿性及可疑帶菌者進行采樣健康從業(yè)人員體檢致病微生物陽性檢出率的提高靛基質(zhì)大多+（宋內(nèi)-）本菌為革蘭氏陽性桿菌，菌體短小，直或稍彎產(chǎn)毒素埃希氏菌（ETEC）LT（熱敏毒素）與ST（耐熱毒素）在選擇性平皿上，可形成兩類菌落各類樣品采集方法（3）由細菌通過攝食而進入人體的，使人體患感染性或中毒性的一類疾病。1880年：人工培養(yǎng)基發(fā)明初步檢驗→活菌數(shù)、直接鏡檢(涂片→染色→鏡檢)按國標菌落總數(shù)測定方法進行，以了解可疑食品被污染情況健康從業(yè)人員體檢致病微生物陽性檢出率的提高葡萄糖醛酸酶陰性（96%E.該菌的生長范圍為2--42℃（故可用4℃冷增菌以抑制其它雜菌的干擾），最適培養(yǎng)溫度為35--37℃快速檢測細菌生化反應的色原或熒光底物各類樣品采集方法（4）從業(yè)人員：據(jù)食物中毒的情況要求，可采取售貨員或制作食品的工作人員及直接或間接接觸食品的有關人員肛拭檢樣，特別對那些在事件發(fā)生前或現(xiàn)正患有腸炎、發(fā)燒、化膿性及可疑帶菌者進行采樣

樣品送檢

檢樣采取后立即由專人在2小時內(nèi)送區(qū)縣疾病預防控制中心或（和）市疾病預防控制中心實驗室檢驗送檢檢樣時，應附送采樣送檢申請單，并按要求注意冷藏樣品送檢人員應與實驗室收樣或檢驗人員履行樣品交接手續(xù)

樣品檢驗的能級分工

一般食源性細菌性突發(fā)事件由事件發(fā)生所在地區(qū)縣疾控系統(tǒng)檢驗機構(gòu)承擔重大食源性細菌性突發(fā)事件以事件發(fā)生所在地區(qū)縣疾控系統(tǒng)檢驗機構(gòu)承擔為主，市疾控檢驗機構(gòu)應共同參與檢驗工作特大食源性細菌性突發(fā)事件由市疾控檢驗機構(gòu)和事件發(fā)生所在地區(qū)縣疾控系統(tǒng)檢驗機構(gòu)組成的現(xiàn)場檢驗小組共同承擔

檢驗項目的分級區(qū)縣疾控系統(tǒng)檢驗機構(gòu)應承擔霍亂弧菌、副溶血弧菌及其它致病性弧菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽胞桿菌、沙門菌、變形桿菌、致瀉性大腸埃希菌、空腸彎曲菌、小腸結(jié)腸耶爾森菌、志賀菌、溶血性鏈球菌及單核細胞增生李斯特菌引起的食源性突發(fā)事件的樣品檢驗檢驗項目的分級市疾控檢驗機構(gòu)除開展以上全部檢驗項目外，還需承擔金黃色葡萄球菌腸毒素、各類致瀉性大腸埃希菌毒素（或毒素基因）的測定以及區(qū)縣疾控系統(tǒng)檢驗機構(gòu)檢出的霍亂弧菌、大腸埃希菌O157和疑難菌株的最終鑒定工作在一般食源性細菌性突發(fā)事件和重大食源性細菌性突發(fā)事件的樣品檢驗工作中市疾控檢驗機構(gòu)應承擔技術指導和質(zhì)量控制的職責

檢驗技術依據(jù)

GB4789-2003《食品衛(wèi)生微生物檢驗》

GB17012-1997《感染性腹瀉的診斷標準和處理原則》

WS/T8-1996《病原性大腸艾希氏菌食物中毒診斷標準及處理原則》、WS/T9-1996《變形桿菌食物中毒診斷標準及處理原則》、WS/T13-1996《沙門氏菌食物中毒診斷標準及處理原則》、WS/T80-1996《葡萄球菌食物中毒診斷標準及處理原則》、WS/T81-1996《副溶血性弧菌食物中毒診斷標準及處理原則》、WS/T82-1996《蠟樣芽胞桿菌食物中毒診斷標準及處理原則》

細菌性食源性疾病的檢驗宗旨竭盡全力盡快找到病原體快速、準確可與傳統(tǒng)方法不一定完全相同

細菌性食源性疾病樣品檢驗的一般程序

（附圖2）檢驗程序

1.樣品采集

↓2.初步檢驗→活菌數(shù)、直接鏡檢(涂片→染色→鏡檢)↓3.分離培養(yǎng)

(包括增菌培養(yǎng)和直接平板培養(yǎng))↓4.初篩試驗↓5.純培養(yǎng)↓6.全面鑒定直接涂片染色鏡檢

觀察存在于檢品中特種形態(tài)的細菌如霍亂弧菌、彎曲菌，為進一步的檢驗提供有用的信息

一般活菌數(shù)的測定

按國標菌落總數(shù)測定方法進行，以了解可疑食品被污染情況

檢樣的處理

非病源檢樣包括可疑食物、水樣及環(huán)節(jié)樣品等最好按1∶10的比例用胰大豆胨肉湯（TSB）37℃預增菌4～6h以保護和放大目的病原菌病源檢樣因含較多病原菌而一般無須做預增菌處理，但若病源檢樣為服過抗生素后采集的或是從業(yè)人員帶菌查源的檢樣應按檢驗項目要求而進行預增菌處理（直接插入2mlTSB管37℃預增菌4～6h）直接培養(yǎng)

將處理后的非病源檢樣及無須做增菌處理的病源檢樣按檢驗項目要求直接接種于各相應培養(yǎng)基

增菌培養(yǎng)及接種

將預增菌處理后的非病源檢樣、服過抗生素后采集的病源檢樣及從業(yè)人員帶菌查源的檢樣按檢驗項目要求接種各相應增菌液培養(yǎng)

增菌培養(yǎng)后接種于各相應培養(yǎng)基

蔗糖-、動力-、H2S-、靛基質(zhì)+葡萄糖醛酸酶陰性（96%E.細菌性腸道傳染病應急處置程序（附圖1）健康從業(yè)人員體檢致病微生物陽性檢出率的提高套組鑒定可以給細菌一個號碼，代表生物型號碼，以此作為追蹤傳染源的依據(jù)。健康從業(yè)人員體檢致病微生物陽性檢出率的提高細菌性食源性疾病的主要臨床特征一般食源性細菌性突發(fā)事件由事件發(fā)生所在地區(qū)縣疾控系統(tǒng)檢驗機構(gòu)承擔區(qū)縣疾控系統(tǒng)檢驗機構(gòu)應承擔霍亂弧菌、副溶血弧菌及其它致病性弧菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽胞桿菌、沙門菌、變形桿菌、致瀉性大腸埃希菌、空腸彎曲菌、小腸結(jié)腸耶爾森菌、志賀菌、溶血性鏈球菌及單核細胞增生李斯特菌引起的食源性突發(fā)事件的樣品檢驗常規(guī)分離培基及其菌落特征檢驗結(jié)果的判定原則（5）將患者急性期和恢復期的血清做凝集效價的對比，4倍增長可確診若生化反應符合，而血清A-F多價-，考慮：coli，并證實該E.產(chǎn)酸不產(chǎn)氣（除F6產(chǎn)極少量氣泡）疑似傷寒或副傷寒的患者應取發(fā)病一周的血清做肥達氏反應，用作輔助診斷由細菌通過攝食而進入人體的，使人體患感染性或中毒性的一類疾病。1982年美國發(fā)現(xiàn)有種E.培養(yǎng)最適宜溫度為42℃幼齡培養(yǎng)物為革蘭氏陽性，衰老培養(yǎng)物可轉(zhuǎn)為革蘭陰性，呈兩極著色，易誤認為雙球菌。葡萄糖醛酸酶陰性（96%E.可疑菌落的選取常規(guī)分離培基及其菌落特征（附表3）

初篩試驗克氏雙糖/三糖鐵/腸道綜合發(fā)酵管1、管2PCRVIDAS

可疑菌的鑒定

全面生化試驗（API、ATB、VETIK、IDS、SWF、手工鑒定等）

噬菌體試驗

血清分型

毒素或毒素基因測試

毒素或毒素基因測試

霍亂弧菌腸毒素、葡萄球菌腸毒素、EIEC侵襲毒素、ETEC腸毒素按國標方法進行動物試驗或酶聯(lián)免疫試驗（VIDAS等）毒素基因測試：霍亂弧菌腸毒素、葡萄球菌腸毒素、致瀉性大腸埃希菌的所有毒力基因均可用PCR檢測，特別是對致瀉性大腸埃希菌的定論應以毒素或毒素基因為準

患者血清的試驗

疑似傷寒或副傷寒的患者應取發(fā)病一周的血清做肥達氏反應，用作輔助診斷將患者急性期和恢復期的血清做凝集效價的對比，4倍增長可確診細菌性食源性疾病食品、水樣、環(huán)節(jié)樣品檢驗常規(guī)程序（附圖3）

細菌性食源性疾病食品、水樣、環(huán)節(jié)樣品檢驗推薦程序

（附圖4）細菌性食源性疾病人糞便、肛拭、嘔吐物、咽拭樣品檢驗推薦程序

（附圖5）1880年：人工培養(yǎng)基發(fā)明非病源檢樣與病源檢樣檢出占絕對優(yōu)勢但通常致病意義不甚明確的細菌如大腸艾希菌、溶藻弧菌等，且其在種類、生化和/或血清型均一致，同時本次細菌性食源性疾病事件中非患者對照標本中未檢出該菌時，應做該菌的毒素、毒素基因或動物試驗，陽性結(jié)果可報告為細菌性食源性疾病事件的病原體鼠傷寒沙門氏菌1,4,5,12:i:1,2屬我國法定傳染病，主要包括霍亂、痢疾、傷寒、副傷寒及新近參照傳染病管理的由腸出血性大腸埃希菌O157引起的出血性腸炎判斷為腸出血性大腸桿菌（EHEC），除血清型符合0157:H7或H-外，還須證實SLT（VT）陽性注意為保證多個檢驗項目的開展，同一病人應至少采集2支肛拭1970年以前：忙于分離各種細菌，采用生化及血清學鑒定原有篩選培養(yǎng)基的不足：SS、Mac、WS、XLD本菌為革蘭氏陽性桿菌，菌體短小，直或稍彎該菌的生長范圍為2--42℃（故可用4℃冷增菌以抑制其它雜菌的干擾），最適培養(yǎng)溫度為35--37℃將處理后的非病源檢樣及無須做增菌處理的病源檢樣按檢驗項目要求直接接種于各相應培養(yǎng)基可疑食品應采集5份（留樣食品、原配料、半成品）靛基質(zhì)大多+（宋內(nèi)-）1945年Bary自病兒腹瀉便中大量檢出E.↓細菌性食源性疾病有關癥狀與病原學檢驗項目、檢驗樣品關系1982年美國發(fā)現(xiàn)有種E.快速檢測細菌生化反應的色原或熒光底物培養(yǎng)最適宜溫度為42℃coli），人類認識該菌為正常細菌細菌性食源性疾病處置程序檢驗結(jié)果的判定

應以找到病原體或其毒素為最終結(jié)論，在此之前所有的快速檢驗方法如PCR、VIDAS等得到的結(jié)果僅供參考

應注意非病源檢樣與病源檢樣檢出的病原體的統(tǒng)一性

檢驗結(jié)果的判定原則（1）非病源檢樣與病源檢樣檢出的致病意義明確的細菌在種類、生化和/或血清型、毒素型均一致時，可報告為細菌性食源性疾病事件的病原體檢驗結(jié)果的判定原則（2）非病源檢樣與病源檢樣只有一種檢出病原菌時，此檢驗結(jié)果僅供臨床與流行病學診斷參考，其中非病源檢樣的檢驗結(jié)果參考價值較大，病源檢樣只有在同次細菌性食源性疾病事件中的多數(shù)患者樣品中檢出種類、生化和/或血清型、毒素型均一致的病原體時才有參考價值檢驗結(jié)果的判定原則（3）

非病源檢樣與病源檢樣只有一種檢出病原菌時，在與同一次細菌性食源性疾病事件中采集的多數(shù)患者的急性發(fā)病期和恢復期血清發(fā)生有凝集效價顯著升高的，可報告為細菌性食源性疾病事件的病原體，但此結(jié)果僅用作回顧性診斷檢驗結(jié)果的判定原則（4）非病源檢樣與病源檢樣檢出占絕對優(yōu)勢但通常致病意義不甚明確的細菌如大腸艾希菌、溶藻弧菌等，且其在種類、生化和/或血清型均一致，同時本次細菌性食源性疾病事件中非患者對照標本中未檢出該菌時，應做該菌的毒素、毒素基因或動物試驗，陽性結(jié)果可報告為細菌性食源性疾病事件的病原體檢驗結(jié)果的判定原則（5）

樣品中檢出的生化、血清符合致瀉性大腸艾希菌、金黃色葡萄球菌，一定要以毒素、毒素基因測試陽性為最終結(jié)論報告蠟樣芽胞桿菌在非病源檢樣中須達到105cfu/g(ml)以上者才有報告價值

檢驗結(jié)果報告

檢驗技術人員應在收到食源性細菌性突發(fā)事件采樣送檢申請單后立即進行樣品檢驗，并在5日內(nèi)出具檢驗結(jié)果報告。特殊情況需延長出具檢驗報告時限的，應報相應衛(wèi)生行政部門批準一旦檢驗結(jié)果確定后，在檢驗報告還未完成前可先向有關部門電話報告檢驗結(jié)果檢驗報告送達單位：市、區(qū)、縣疾控中心實驗室完成樣品檢驗結(jié)果，將檢驗報告送達樣品送檢單位檢驗樣品的處置

市、區(qū)、縣疾控中心在未完成細菌性食源性疾病和食物中毒的樣品檢驗工作前，所有采集的樣品應在合適的條件下保存，其中對經(jīng)檢驗確屬陰性的或已經(jīng)檢測出病原菌并鑒定的樣品完成檢驗報告后即可消毒銷毀；對經(jīng)檢驗為可疑的、暫時無法確認和需要復測的標本應予保留

檢出病原菌的保存

區(qū)縣疾控中心完成對細菌性食源性疾病和食物中毒樣品檢驗后，對檢到的細菌性食源性疾病和食物中毒病原菌菌株應在3日內(nèi)由專人送市疾控中心，由市疾控中心菌毒種保藏中心統(tǒng)一保存；市疾控中心對細菌性食源性疾病和食物中毒標本中檢到的病原菌，移交市疾控中心菌毒種保藏中心統(tǒng)一保存

細菌檢驗重要篩檢試驗接觸酶試驗氧化酶試驗大腸桿菌0157:H7檢測初步檢驗→活菌數(shù)、直接鏡檢(涂片→染色→鏡檢)檢驗技術人員應在收到食源性細菌性突發(fā)事件采樣送檢申請單后立即進行樣品檢驗，并在5日內(nèi)出具檢驗結(jié)果報告。沙門氏菌具有辛酸酯酶，以β-萘酚辛酯為底物，經(jīng)沙門氏菌酶解，釋出β-萘酚與固蘭作用出現(xiàn)紫紅色培養(yǎng)基的進步利用細菌的專有酶進行快速篩選此菌可以通過水源、食品原料、廚房食物制作中任何一個環(huán)節(jié)的污染傳播給人類。判斷為腸出血性大腸桿菌（EHEC），除血清型符合0157:H7或H-外，還須證實SLT（VT）陽性細菌性食源性疾病有關癥狀與病原學檢驗項目、檢驗樣品關系非病源檢樣與病源檢樣只有一種檢出病原菌時，在與同一次細菌性食源性疾病事件中采集的多數(shù)患者的急性發(fā)病期和恢復期血清發(fā)生有凝集效價顯著升高的，可報告為細菌性食源性疾病事件的病原體，但此結(jié)果僅用作回顧性診斷若生化反應符合，而血清A-F多價-，考慮：產(chǎn)毒素埃希氏菌（ETEC）LT（熱敏毒素）與ST（耐熱毒素）細菌微量快速鑒定系統(tǒng)（自動）

VITEK，ATB本菌為革蘭陰性菌，呈S形、螺旋狀或紡錘葡萄糖醛酸酶陰性（96%E.B–福氏志賀菌6個血清型+X、Y變種；沙門菌ID顯色培養(yǎng)基典型菌落↓葡萄糖醛酸酶陰性（96%E.色原（熒光）糖苷結(jié)合物糖苷+色原（熒光）各類樣品采集方法（1）將患者急性期和恢復期的血清做凝集效價的對比，4倍增長可確診

氧化酶試驗用于分辨G-桿菌中腸桿菌科及弧菌科兩類細菌

革蘭陰性桿菌陽性反應

弧菌科陰性反應腸桿菌科接觸酶試驗用于分辨G+球菌中葡萄球菌及鏈球菌陽性反應葡萄球菌

革蘭陽性球菌陰性反應鏈球菌接觸酶接觸酶-+

沙門菌檢測概況1880年發(fā)現(xiàn)，至今已有2600種有動力（除雞-雛沙門菌）大多產(chǎn)H2S

（除副甲傷寒沙門菌等）產(chǎn)酸大多產(chǎn)氣（除傷寒、雞-雛沙門菌）靛基質(zhì)-、蔗糖-、乳糖-甘露醇+符合腸桿菌科特征（葡萄糖+、硝酸鹽還原+、氧化酶-）沙門菌的初篩腸道綜合發(fā)酵管1：甘露醇（上斜面）+葡萄糖（下直面）+產(chǎn)氣腸道綜合發(fā)酵管2：蔗糖-、動力+、H2S+、靛基質(zhì)-血清凝集（1）A-F多價+OH1H2血清凝集（2）若生化反應符合，而血清A-F多價-，考慮：Vi抗原（傷寒、副丙傷寒沙門菌）遮蔽，煮沸后再凝亞利桑那菌：遲緩發(fā)酵乳糖，延長Mac平板培養(yǎng)時間至4天可能是A-F以外的沙門菌：如O39：Hb，2旺次渥沙門菌在上海地區(qū)多見極可能是檸檬酸桿菌報告方式A群

甲型副傷寒沙門菌1,2,12:aB群

乙型副傷寒沙門菌1,4,5,12:b:1,2

鼠傷寒沙門氏菌1,4,5,12:i:1,2

C群

丙型副傷寒沙門菌6,7,vi:c:1,5

豬霍亂沙門菌6,7,:c:1,5D群

腸炎沙門菌1,9,12:g,m

傷寒沙門菌1,9,vi:d

雞雛沙門菌1,9,12:-

志賀菌檢測概況至今已有4群（A、B、C、D）、32種（A-痢疾志賀菌10個血清型；B–福氏志賀菌6個血清型+X、Y變種；C-鮑氏志賀菌15個血清型、D-宋內(nèi)1個血清型，S，R兩相）無動力乳糖-

（除宋內(nèi)遲緩發(fā)酵+）不產(chǎn)H2S產(chǎn)酸不產(chǎn)氣（除F6產(chǎn)極少量氣泡）靛基質(zhì)大多+（宋內(nèi)-）蔗糖-甘露醇+（痢疾志賀菌為-）符合腸桿菌科特征（葡萄糖+、硝酸鹽還原+、氧化酶-）志賀菌的初篩腸道綜合發(fā)酵管1：甘露醇（上斜面）+/-葡萄糖（下直面）+不產(chǎn)氣腸道綜合發(fā)酵管2：蔗糖-、動力-、H2S-、靛基質(zhì)+大多產(chǎn)H2S（除副甲傷寒沙門菌等）coli引起出血性腸炎（HC）和溶血性尿毒綜合征（HUS）微生物診斷的演化(B)大腸桿菌0157:H7檢測1970年以后：電腦化+細菌數(shù)值分類鑒定的應用樣品送檢人員應與實驗室收樣或檢驗人員履行樣品交接手續(xù)屬食源性疾病范疇，主要包括細菌性腸道傳染病和細菌性食物中毒健康從業(yè)人員體檢致病微生物陽性檢出率的提高應注意非病源檢樣與病源檢樣檢出的病原體的統(tǒng)一性此菌可以通過水源、食品原料、廚房食物制作中任何一個環(huán)節(jié)的污染傳播給人類。甘露醇+（痢疾志賀菌為-）非病源檢樣與病源檢樣檢出占絕對優(yōu)勢但通常致病意義不甚明確的細菌如大腸艾希菌、溶藻弧菌等，且其在種類、生化和/或血清型均一致，同時本次細菌性食源性疾病事件中非患者對照標本中未檢出該菌時，應做該菌的毒素、毒素基因或動物試驗，陽性結(jié)果可報告為細菌性食源性疾病事件的病原體葡萄糖醛酸酶陰性（96%E.ABCD4組O抗原多價凝集血清群沙門菌ID顯色培養(yǎng)基典型菌落食堂或盒飯公司從事食品從業(yè)人員進行肛拭采樣檢驗技術人員應在收到食源性細菌性突發(fā)事件采樣送檢申請單后立即進行樣品檢驗，并在5日內(nèi)出具檢驗結(jié)果報告。1970年以后：電腦化+細菌數(shù)值分類鑒定的應用蔗糖-、動力+、H2S+、靛基質(zhì)-TrackingContaminationinProduction檢驗結(jié)果的判定原則（2）血清凝集（1）ABCD4組O抗原多價凝集血清群O單價型特異抗原種特異抗原（3，4，6，7）血清凝集（2）若生化反應符合，而血清A-F多價-，考慮：A、C群志賀菌O抗原外有K包膜抗原遮蔽，煮沸后再凝可能是EIEC，再做大生化以鑒別（產(chǎn)氣、ONPG）宋內(nèi)的R相菌，用R相血清凝集可能是蜂窩哈夫尼亞菌，做大生化以鑒別可能是類志賀鄰單胞菌，觀察動力、氧化酶報告方式痢疾志賀菌1型福氏志賀菌2a型福氏志賀菌X變種鮑氏志賀菌13型宋內(nèi)志賀菌S相大腸桿菌O157：H7檢測氨基肽酶屬食源性疾病范疇，主要包括細菌性腸道傳染病和細菌性食物中毒各類樣品采集方法（3）細菌性食源性疾病食品、水樣、環(huán)節(jié)樣品檢驗推薦程序此菌可以通過水源、食品原料、廚房食物制作中任何一個環(huán)節(jié)的污染傳播給人類。種特異抗原（3，4，6，7）有動力（除雞-雛沙門菌）產(chǎn)毒素埃希氏菌（ETEC）LT（熱敏毒素）與ST（耐熱毒素）宋內(nèi)的R相菌，用R相血清凝集區(qū)縣疾控系統(tǒng)檢驗機構(gòu)應承擔霍亂弧菌、副溶血弧菌及其它致病性弧菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽胞桿菌、沙門菌、變形桿菌、致瀉性大腸埃希菌、空腸彎曲菌、小腸結(jié)腸耶爾森菌、志賀菌、溶血性鏈球菌及單核細胞增生李斯特菌引起的食源性突發(fā)事件的樣品檢驗革蘭陰性桿菌常規(guī)分離培基及其菌落特征葡萄糖醛酸酶陰性（96%E.coli有兩類：正常E.常用呈色的色原有：α、β萘酚，鄰位或?qū)ξ幌趸樱瑢ο趸桨?，酚酞?-氨4-硝基苯各類樣品采集方法（1）食堂或盒飯公司從事食品從業(yè)人員進行肛拭采樣注意為保證多個檢驗項目的開展，同一病人應至少采集2支肛拭DNA RNA 蛋白質(zhì)樣品中檢出的生化、血清符合致瀉性大腸艾希菌、金黃色葡萄球菌，一定要以毒素、毒素基因測試陽性為最終結(jié)論報告疫濃縮增菌技術概況1885年德國人艾希自人畜腸腔分離出（E.coli），人類認識該菌為正常細菌1945年Bary自病兒腹瀉便中大量檢出E.coli，并證實該E.coli是病源逐漸認識E.coli有兩類：正常E.coli和致瀉E.coliEIEC、EPEC、ETEC1982年美國發(fā)現(xiàn)有種E.coli引起出血性腸炎（HC）和溶血性尿毒綜合征（HUS）1987年levine提出EHEC概念，指出SLT毒素是病因1996年日本9000名兒童暴發(fā)，11人死亡，E.coliO157：H71999年我國暴發(fā)？大腸桿菌0157:H7檢測大腸桿菌O、H抗原不同分成200多血清型山梨醇不發(fā)酵（95%E.coli發(fā)酵）葡萄糖醛酸酶陰性（96%E.coli陽性）判斷為腸出血性大腸桿菌（EHEC），除血清型符合0157:H7或H-外，還須證實SLT（VT）陽性李斯特菌檢測該菌1926年被確認為是人獸共患病菌，但很快受到重視：分布廣泛，在全世界的土壤、水中都有存在，溫帶比熱帶更多見易感動物多，除人類外，迄今已從42種哺乳動物，22種禽類、魚類、甲殼動物中分離出來，其中易感性最高的是牛、兔、犬、貓低溫下可生長，雖然此菌屬于中溫型，但其生長溫度寬，為1—45℃在4－6℃的低溫下也可繁殖。因此，放在冰箱中的食品，或經(jīng)冷藏運輸?shù)氖称?，如有此菌存在，它們都可生長繁殖并使人致病1988年世界衛(wèi)生組織證實為食物中毒病原菌：此菌可以通過水源、食品原料、廚房食物制作中任何一個環(huán)節(jié)的污染傳播給人類。主要的食品有4種：①牛乳和乳制品：②肉類，特別是牛肉及其制品；③蔬菜、沙拉等食品；④海產(chǎn)品概況本菌為革蘭氏陽性桿菌，菌體短小，直或稍彎在22℃～25℃環(huán)境可形成4根鞭毛，故在25℃肉湯培養(yǎng)物中運動活潑，37℃基本無動力。幼齡培養(yǎng)物為革蘭氏陽性，衰老培養(yǎng)物可轉(zhuǎn)為革蘭陰性，呈兩極著色，易誤認為雙球菌。

形態(tài)、動力與染色本菌營養(yǎng)要求不高，在20-25℃培養(yǎng)有動力，穿刺培養(yǎng)，2-5天可見倒立傘狀生長該菌的生長范圍為2--42℃（故可用4℃冷增菌以抑制其它雜菌的干擾），最適培養(yǎng)溫度為35--37℃初期在5%羊血瓊脂平板上菌落細小、露滴狀、光滑、透明，后變灰暗。單核細胞增生李斯特菌、綿羊李斯特菌、西爾李斯特菌在血平板上的菌落有狹窄的β-溶血環(huán)

培養(yǎng)特性彎曲菌檢測本菌為革蘭陰性菌，呈S形、螺旋狀或紡錘生長要求為微量的有氧條件培養(yǎng)最適宜溫度為42℃在選擇性平皿上，可形成兩類菌落1.第一型菌落不溶血、灰白色、扁平、濕潤、有光澤、有擴散趨勢，看上去象水滴，有從接種劃線向外擴散的傾向2.第二型菌落不溶血、菌落是分散單個的(直徑1～2mm)凸起，完整發(fā)亮的菌落形態(tài)、培養(yǎng)特性1945年Bary自病兒腹瀉便中大量檢出E.D群腸炎沙門菌1,9,12:g,m霍亂弧菌腸毒素、葡萄球菌腸毒素、EIEC侵襲毒素、ETEC腸毒素按國標方法進行動物試驗或酶聯(lián)免疫試驗（VIDAS等）氨基肽酶靛基質(zhì)-、蔗糖-、乳糖-epidermidis(RawMaterial)根據(jù)患者的臨床癥狀，核實診斷，初步判斷是否屬食物中毒或食源性疾病培養(yǎng)基的進步利用細菌的專有酶進行快速篩選非病源檢樣與病源檢樣只有一種檢出病原菌時，此檢驗結(jié)果僅供臨床與流行病學診斷參考，其中非病源檢樣的檢驗結(jié)果參考價值較大，病源檢樣只有在同次細菌性食源性疾病事件中的多數(shù)患者樣品中檢出種類、生化和/或血清型、毒素型均一致的病原體時才有參考價值各類樣品采集方法（3）靛基質(zhì)大多+（宋內(nèi)-）產(chǎn)酸大多產(chǎn)氣（除傷寒、雞-雛沙門菌）蠟樣芽胞桿菌在非病源檢樣中須達到105cfu/g(ml)以上者才有報告價值各類樣品采集方法（1）肛拭、食品和環(huán)節(jié)等采樣，其采樣量須滿足必須開展的檢驗項目的要求，如肛拭采樣至少要用2根棉拭，食品采樣應盡量多于25g（ml）以上微生物診斷的演化(A)epidermidis(PersonnelHands)人體攝入了被細菌或其毒素污染的食品后所出現(xiàn)的非傳染性急性、亞急性疾病快速檢測技術在疾病控制系統(tǒng)微生物檢驗中的應用上海市疾病預防控制中心

陳悅

微生物診斷的演化(A)

1673年：顯微鏡發(fā)明1880年：人工培養(yǎng)基發(fā)明1914年：干燥培養(yǎng)基發(fā)明1970年以前：忙于分離各種細菌，采用生化及血清學鑒定微生物診斷的演化(B)

1970年以后：電腦化+細菌數(shù)值分類鑒定的應用1980年：微量快速生化的應用及全自動鑒定系統(tǒng)的產(chǎn)生1985年以后：各種免疫及核酸技術的廣泛應用培養(yǎng)基的進步利用細菌的專有酶進行快速篩選原有篩選培養(yǎng)基的不足：SS、Mac、WS、XLD沙門氏菌具有辛酸酯酶，以β-萘酚辛酯為底物，經(jīng)沙門氏菌酶解，釋出β-萘酚與固蘭作用出現(xiàn)紫紅色大腸埃希氏菌具β-葡萄糖醛酸酶，但以O157：H7為代表的腸出血性大腸埃希氏菌（EHEC）卻不具此酶，故β-葡萄糖醛酸酶陰性已成為初步篩查EHEC的重要特征E.coliO157:H7ID顯色培養(yǎng)基典型菌落O157：H7墨綠色菌落沙門菌粉色菌落沙門菌ID顯色培養(yǎng)基典型菌落細菌微量快速鑒定系統(tǒng)（手工）

API

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細菌鑒定的微量多項試驗套組可使微生物有一標準的鑒定材料，不會因為所使用的培養(yǎng)基不同而鑒定出不同菌名。可縮短鑒定的時間。傳統(tǒng)試管鑒定法需配制各種不同培養(yǎng)基，非常麻煩，而鑒定套組一次可配上好幾百個，可存放。套組鑒定可以給細菌一個號碼，代表生物型號碼，以此作為追蹤傳染源的依據(jù)。細菌微量快速鑒定系統(tǒng)（自動）

VITEK

，

ATBVITEK直接從標本中檢查微生物抗原

應用單克隆抗體結(jié)合各種形式的放射免疫分析（RIA）、酶免疫分析（EIA）、熒光免疫分析（FIA）、時間分辨熒光免疫分析（TrFIA）、化學發(fā)光免疫分析（CIA）、生物發(fā)光免疫分析（BIA）等，足以檢出臨床標本中痕量的微生物抗原，免去細菌或病毒培養(yǎng)過程，直接完成微生物感染的快速診斷

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色原（熒光）糖苷結(jié)合物糖苷+色原（熒光）氨基肽酶色原（熒光）氨基酸結(jié)合物氨基酸+色原（熒光）

快速檢測細