應(yīng)用多重連接依賴(lài)性探針擴(kuò)增技術(shù)快速診斷遺傳性壓力敏感性周?chē)窠?jīng)病

應(yīng)用多重連接依賴(lài)性探針擴(kuò)增技術(shù)快速診斷遺傳性壓力敏感性周?chē)窠?jīng)病

2遺傳性壓力敏感性周?chē)窠?jīng)?。℉ereditaryNeuropathywithliabilitytoPressurePalsies，HNPP）一種常染色體顯性遺傳的周?chē)窠?jīng)病臨床表現(xiàn)：易嵌壓神經(jīng)分布區(qū)域反復(fù)發(fā)作的運(yùn)動(dòng)及感覺(jué)障礙，常與周?chē)窠?jīng)長(zhǎng)期壓迫和輕微損傷相關(guān)。神經(jīng)電生理檢查：具有彌漫性周?chē)窠?jīng)傳導(dǎo)異常，特別是在易卡壓部位。周?chē)窠?jīng)活檢常可見(jiàn)典型的臘腸樣結(jié)構(gòu)。國(guó)內(nèi)尚缺乏相關(guān)流行病學(xué)資料，芬蘭西南部的流行病學(xué)調(diào)查顯示其人群患病率約16/100000。HNPP發(fā)病機(jī)制HNPP的致病基因?yàn)橹車(chē)枨实鞍?2（peripheralMyelinprotein22，PMP22）基因。突變類(lèi)型：PMP22基因以及附近1.5Mb大片段雜合缺失—85%PMP22基因內(nèi)突變—15%HNPP分子診斷技術(shù)檢測(cè)技術(shù)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)熒光原位雜交（FISH）定量分析耗時(shí)長(zhǎng)、操作繁瑣、通量低Real-timePCR快速、操作簡(jiǎn)便、定量分析對(duì)DNA質(zhì)量要求高、通量低MLPA快速、操作簡(jiǎn)便、定量分析對(duì)DNA質(zhì)量要求相對(duì)低（20-200ng）、通量高M(jìn)LPA技術(shù)簡(jiǎn)介多重連接依賴(lài)性探針擴(kuò)增（multiplexligation-dependentprobeamplification，MLPA）是一種新興的基因半定量分析技術(shù)。通過(guò)利用多重連接依賴(lài)性探針可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目的基因的各外顯子，以對(duì)其拷貝數(shù)進(jìn)行定量分析。具有簡(jiǎn)便、快速、高靈敏度及特異度的優(yōu)點(diǎn)。本研究采用MLPA技術(shù)對(duì)HNPP患者進(jìn)行快速基因診斷。研究方法8例臨床以及肌電圖診斷為HNPP的患者男：女=6:2；年齡：13-55歲。4名患者有陽(yáng)性家族史，分別來(lái)自?xún)蓚€(gè)家系（如下圖）。簽署知情同意書(shū)后，從外周血提取研究對(duì)象基因組DNA，運(yùn)用MLPA技術(shù)對(duì)位于17p11.2區(qū)域1.5Mb片段上的PMP22基因、TEKT3基因及COX10基因進(jìn)行拷貝數(shù)分析。臨床資料以及EMG結(jié)果注釋?zhuān)?周?chē)\(yùn)動(dòng)神經(jīng)受累癥狀包括壓迫后出現(xiàn)的垂腕、手指背伸困難、手指不能合攏、垂足、足背屈困難、肌肉萎縮、肌力減退。**周?chē)杏X(jué)神經(jīng)受累癥狀包括壓迫后出現(xiàn)肢體麻木、感覺(jué)減退。通過(guò)MLPA技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，8名患者中有7名患者存在PMP22基因、TEKT3基因及COX10基因雜合缺失。研究結(jié)果8名臨床擬診為HNPP患者的MLPA結(jié)果分析HNPP雜合缺失檢出率為87.5%。HNPP臨床癥狀具有多樣性，神經(jīng)電生理和神經(jīng)活檢組織病理檢查常缺乏特異性。因此，基因診斷仍是HNPP診斷的關(guān)鍵。研究中，1名患者未發(fā)現(xiàn)PMP22基因雜合缺失，可能系PMP22基因內(nèi)突變，需進(jìn)一步測(cè)序驗(yàn)證。研究討論研究討論目前已有國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道一些家系HNPP患者并非通常的1.5Mb大片段缺失，而是出現(xiàn)PMP22基因內(nèi)小片段缺失。但本研究8名患者均未發(fā)現(xiàn)此類(lèi)基因變異，目前PMP22基因部分外顯子缺失所致的HNPP在國(guó)內(nèi)尚未有報(bào)道，國(guó)內(nèi)是否存在該缺失類(lèi)型尚需進(jìn)一