實驗二.蛋白質的兩性反應與等電點測定

實驗二

蛋白質的兩性反響與

等電點測定1整理ppt

了解蛋白質的兩性解離性質

掌握測定蛋白質等電點的方法實驗目的2整理pptPCOOHNH2PCOO-NH3+PCOO-NH2PCOOHNH3+pH=pI+OH-pH>pI+H++OH-+H+pH<pI兼性離子

陽離子陰離子實驗原理3整理ppt

在等電點時蛋白質顆粒上的凈電荷為零，缺乏同電相斥的因素，蛋白質溶解度最小，最容易析出沉淀

維持蛋白質膠體穩(wěn)定的因素：外表電荷、水化膜4整理ppt

本實驗配制了各種不同pH值的緩沖液，沉淀出現(xiàn)最多的緩沖液pH值即為酪蛋白的等電點5整理ppt實驗器材與試劑

大試管、滴管、刻度吸量管

0.5％酪蛋白醋酸鈉溶液

0.01％溴甲酚綠指示劑(指示范圍:

pH3.8-5.4)

0.02MHCL溶液、0.02MNaOH溶液

0.01M醋酸溶液、0.10M醋酸溶液、

1.00M醋酸溶液6整理ppt蛋白質的兩性反響〔1〕實驗步驟取一干凈試管酪蛋白液10滴溴甲酚綠指示劑3滴觀察溶液顏色并解釋現(xiàn)象7整理ppt蛋白質的兩性反響〔2〕滴加0.02MHCL溶液邊滴加邊混勻有最大沉淀產(chǎn)生，觀察溶液顏色變化至沉淀消失，觀察溶液顏色并解釋現(xiàn)象繼續(xù)滴加0.02MHCL溶液邊滴加邊混勻8整理ppt蛋白質的兩性反響〔3〕繼續(xù)滴加0.02MNaOH溶液邊滴加邊混勻有最大沉淀產(chǎn)生，觀察溶液顏色變化至沉淀消失，觀察溶液顏色并解釋現(xiàn)象繼續(xù)滴加0.02MNaOH溶液邊滴加邊混勻9整理ppt

溶液呈藍色蛋白質的兩性反響(1)實驗結果

酪蛋白溶液呈堿性(pH﹥5.4)，使溴甲酚綠指示劑顯藍色10整理ppt[H+]，沉淀蛋白質的兩性反響(2)

出現(xiàn)最大量沉淀時,說明到達了酪蛋白的等電點溶液由藍色變成淺綠色〔3.8﹤pH﹤5.4〕11整理ppt

繼續(xù)加酸，[H+]繼續(xù)增大，pH＜pI。酪蛋白所帶正電荷不斷增加，同電相斥，沉淀溶解

沉淀完全溶解時，溶液顯黃色(pH﹤3.8)12整理ppt[OH-]，沉淀蛋白質的兩性反響(3)

出現(xiàn)最大量沉淀時,說明到達了酪蛋白的等電點溶液由黃色變成淺綠色〔3.8﹤pH﹤5.4〕13整理ppt

繼續(xù)加堿，[OH-]繼續(xù)增大，pH﹥pI。酪蛋白所帶負電荷不斷增加，同電相斥，沉淀溶解

沉淀完全溶解時，溶液顯藍色(pH﹥5.4)14整理ppt結論1：

酪蛋白的等電點在pH3.8-5.4之間pH=pI時，蛋白質溶解度最小

蛋白質是兩性電解質15整理ppt取7支同樣規(guī)格的枯燥試管，精確參加各試劑試管號碼1234567蒸餾水2.43.2—3.01.52.753.381.00M醋酸1.60.8—————0.1M醋酸——4.01.0———0.01M醋酸————2.51.250.62pH3.53.84.14.75.35.65.9

酪蛋白等電點的測定注：單位均為mL16整理ppt

向每個試管中各加0.5%酪蛋白溶液20滴，加一管，立即混勻一管

靜置30分鐘后，以0、+、++、+++、++++表示各管的混濁度，并指出哪一種pH是酪蛋白的等電點17整理ppt1234567沉淀量0++++++++++00

酪蛋白等電點的測定1234567實驗結果18整理ppt結論2：4號試管沉淀量最多

說明4號管溶液的pH值為酪蛋白的等電點，即pI=4.7

什么是蛋白質的等電點？在等電點時，蛋白質溶液為什么容易發(fā)生沉淀？思考題20整理ppt實驗工程實驗原理