斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫分析儀校準(zhǔn)規(guī)范

JJF2035—20231斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫分析儀校準(zhǔn)規(guī)范1范圍本規(guī)范適用于斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫分析儀的校準(zhǔn),其他板型(48孔板或24孔板等)的斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫分析儀可以參照本規(guī)范進(jìn)行校準(zhǔn)。2引用文件本規(guī)范引用了下列文件:ANSI/SLAS4-2004微孔反應(yīng)板.井位置(Microplates—WellPositions)凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本規(guī)范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本規(guī)范。3術(shù)語(yǔ)3.1斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫分析儀enzyme-linkedimmunospotanalyzer通過(guò)在專(zhuān)用微孔反應(yīng)板上包被抗體,捕獲分泌特定細(xì)胞因子的細(xì)胞,然后以酶聯(lián)技術(shù)顯色,形成與細(xì)胞對(duì)應(yīng)的微小斑點(diǎn),最后對(duì)顯色斑點(diǎn)進(jìn)行自動(dòng)顯微計(jì)數(shù)的分析儀器。4概述斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫分析儀(以下簡(jiǎn)稱(chēng)分析儀)主要由成像系統(tǒng)、運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)、控制處理系統(tǒng)和顯示系統(tǒng)組成。分析時(shí),成像系統(tǒng)獲取微孔反應(yīng)板上孔內(nèi)斑點(diǎn)圖像,然后通過(guò)顯示系統(tǒng)進(jìn)行斑點(diǎn)統(tǒng)計(jì),得到該孔內(nèi)斑點(diǎn)總數(shù)。5計(jì)量特性分析儀的計(jì)量特性及計(jì)量特性指標(biāo)見(jiàn)表1。表1斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫分析儀計(jì)量特性計(jì)量特性計(jì)量特性指標(biāo)斑點(diǎn)計(jì)數(shù)示值誤差±5.0%重復(fù)性≤2.0%注:以上技術(shù)指標(biāo)不適用于合格判別,僅供參考。6校準(zhǔn)條件6.1環(huán)境條件6.1.1溫度:(15~30)℃;JJF2035—202326.1.2相對(duì)濕度:不大于80%;6.1.3供電電源:電壓(220±22)V,頻率(50±1)Hz。6.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)模擬斑點(diǎn)計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)采用國(guó)家有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),技術(shù)要求如下:在模擬斑點(diǎn)計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)四角設(shè)置4個(gè)定位孔,其中印有可識(shí)別字符,用來(lái)進(jìn)行檢測(cè)器定位;孔板中間散落設(shè)置4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)數(shù)孔,每一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)數(shù)孔分別含有50個(gè)、100個(gè)、200個(gè)、500個(gè)模擬斑點(diǎn)(位置分布可參考附錄A所示),相對(duì)擴(kuò)展不確定度應(yīng)優(yōu)于3.0%(k=2)。7校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法校準(zhǔn)前按照分析儀使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行調(diào)試,將模擬斑點(diǎn)計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)放入分析儀載物倉(cāng)并固定,采用四角的4個(gè)定位孔進(jìn)行定位(參照附錄A)。7.1斑點(diǎn)計(jì)數(shù)示值誤差分別對(duì)模擬斑點(diǎn)計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)數(shù)孔拍照并計(jì)數(shù),每孔重復(fù)測(cè)量3次, 按式(1)計(jì)算每孔內(nèi)斑點(diǎn)個(gè)數(shù)的測(cè)量值與標(biāo)準(zhǔn)值之間的相對(duì)示值誤差。 ΔNr,i×100%(1)式中:ΔNr,i—第i孔內(nèi)斑點(diǎn)計(jì)數(shù)的相對(duì)示值誤差,%;Ni—第i孔內(nèi)斑點(diǎn)個(gè)數(shù)測(cè)量平均值,個(gè);Ns,i—第i孔內(nèi)斑點(diǎn)個(gè)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)值,個(gè)。7.2重復(fù)性對(duì)模擬斑點(diǎn)計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值為200的標(biāo)準(zhǔn)計(jì)數(shù)孔連續(xù)拍照并計(jì)數(shù)6次,按式(2)計(jì)算斑點(diǎn)個(gè)數(shù)測(cè)量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差,作為分析儀的重復(fù)性表征。RSD=(iN)2××100%(2)式中:RSD—相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差,%;Ni—第i次斑點(diǎn)個(gè)數(shù)測(cè)量的結(jié)果,個(gè);N—6次斑點(diǎn)個(gè)數(shù)測(cè)量結(jié)果的平均值,個(gè)。8校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá)校準(zhǔn)記錄應(yīng)盡可能詳盡地記載測(cè)量數(shù)據(jù)和計(jì)算結(jié)果,推薦的校準(zhǔn)記錄格式見(jiàn)附錄B。示值誤差的測(cè)量不確定度應(yīng)按JJF1059.1—2012的要求評(píng)定,不確定度評(píng)定實(shí)例見(jiàn)附錄D。經(jīng)校準(zhǔn)的儀器應(yīng)出具校準(zhǔn)證書(shū),校準(zhǔn)證書(shū)應(yīng)符合JJF1071—2010中5.12的要求,校準(zhǔn)證書(shū)內(nèi)頁(yè)格式見(jiàn)附錄C。JJF2035—202339復(fù)校時(shí)間間隔由于復(fù)校時(shí)間間隔的長(zhǎng)短是由儀器的使用情況、使用者、儀器本身質(zhì)量等多因素所1年。4附錄A模擬斑點(diǎn)計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)示意圖及孔內(nèi)畫(huà)面圖模擬斑點(diǎn)計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)外形參照標(biāo)準(zhǔn)96孔微孔反應(yīng)板，長(zhǎng)為12.7cm,寬為8.5cm,高為1.3cm,外部包括上、下金屬框架，內(nèi)部包括白色背景紙、高透光塑料膜片和玻璃片，上、下金屬框架依靠螺釘連接緊固。高透光塑料膜片孔位與標(biāo)準(zhǔn)96孔微孔反應(yīng)板一致，結(jié)構(gòu)如圖A.1所示，其中四角的4個(gè)孔為定位孔，孔內(nèi)印有可識(shí)別2004),孔內(nèi)分布直徑為(50±8)μm黑色的模擬斑點(diǎn)，量值分別為(50±1)個(gè)、(100±1)個(gè)、(200±1)個(gè)、(500±2)個(gè)(k=2),如圖A.2所示。28E圖A.1模擬斑點(diǎn)計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)示意圖5(b)B6孔內(nèi)畫(huà)面圖(d)E9孔內(nèi)畫(huà)面圖圖A.2模擬斑點(diǎn)計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)孔內(nèi)畫(huà)面圖JJF2035—20236附錄B校準(zhǔn)原始記錄參考格式送校單位校準(zhǔn)地址儀器型號(hào)儀器編號(hào)制造廠商校準(zhǔn)日期環(huán)境溫度℃相對(duì)濕度%校準(zhǔn)人核驗(yàn)人技術(shù)依據(jù)主要測(cè)量設(shè)備名稱(chēng)/型號(hào)測(cè)量范圍不確定度/準(zhǔn)確度等級(jí)/最大允許誤差檢定/校準(zhǔn)證書(shū)編號(hào)/有效期B.1斑點(diǎn)計(jì)數(shù)示值誤差孔位斑點(diǎn)個(gè)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)值個(gè)斑點(diǎn)個(gè)數(shù)測(cè)量值/個(gè)平均值個(gè)斑點(diǎn)計(jì)數(shù)示值誤差%擴(kuò)展不確定度/%(k=2)E350B6100G6200E9500B.2重復(fù)性孔位斑點(diǎn)個(gè)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)值個(gè)斑點(diǎn)個(gè)數(shù)測(cè)量值/個(gè)平均值/個(gè)重復(fù)性/%G6200JJF2035—20237附錄C校準(zhǔn)證書(shū)內(nèi)頁(yè)推薦格式C.1校準(zhǔn)證書(shū)內(nèi)頁(yè)證書(shū)編號(hào)××××××—××××校準(zhǔn)環(huán)境條件及地點(diǎn):溫度℃地點(diǎn)相對(duì)濕度%其他校準(zhǔn)使用的主要設(shè)備名稱(chēng)/型號(hào)測(cè)量范圍不確定度/準(zhǔn)確度等級(jí)/最大允許誤差檢定/校準(zhǔn)證書(shū)編號(hào)/有效期第×頁(yè)共×頁(yè)JJF2035—20238C.2校準(zhǔn)證書(shū)校準(zhǔn)結(jié)果頁(yè)證書(shū)編號(hào)××××××—××××校準(zhǔn)結(jié)果被校項(xiàng)目及校準(zhǔn)結(jié)果:校準(zhǔn)項(xiàng)目校準(zhǔn)結(jié)果斑點(diǎn)計(jì)數(shù)示值誤差標(biāo)準(zhǔn)值個(gè)測(cè)量平均值個(gè)示值誤差%%擴(kuò)展不確定度(k=2)%重復(fù)性/%以下空白第×頁(yè)共×頁(yè)JJF2035—20239附錄D斑點(diǎn)計(jì)數(shù)示值誤差測(cè)量結(jié)果的不確定度評(píng)定示例D.1測(cè)量模型ΔNr×100%(D.1)式中:ΔNr—斑點(diǎn)計(jì)數(shù)相對(duì)示值誤差,%; N—斑點(diǎn)個(gè)數(shù)測(cè)量平均值,個(gè);Ns—斑點(diǎn)個(gè)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)值,個(gè)。D.2合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算公式分析儀測(cè)量重復(fù)性引入的不確定度u(N)、模擬斑點(diǎn)計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度u(Ns)之間不相關(guān),所以標(biāo)準(zhǔn)不確定度可按式(D.2)得到:uc=2u2(N)+-2u2(Ns)(D.2) D.3.1重復(fù)性引入的不確定度 D.3.1重復(fù)性引入的不確定度u(N)。D.3.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度u(Ns)。D.4不確定度分量的計(jì)算D.4.1重復(fù)性引入的不確定度u(N)對(duì)模擬斑點(diǎn)計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中的同一孔位,重復(fù)進(jìn)行6次測(cè)量,考察測(cè)量方法由重復(fù)性引入的實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)偏差,檢測(cè)數(shù)據(jù)及計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表D.1。表D.1斑點(diǎn)計(jì)數(shù)的6次測(cè)量結(jié)果單位:個(gè)標(biāo)準(zhǔn)值Ns測(cè)量值實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)偏差s505050504950500.4110010099991001001000.522001991982002001991990.755004974984994994985001.05斑點(diǎn)計(jì)數(shù)示值誤差的實(shí)際校準(zhǔn)工作中,以3次測(cè)量平均值為測(cè)量結(jié)果計(jì)算示值誤差,因此斑點(diǎn)計(jì)數(shù)示值誤差校準(zhǔn)中測(cè)量重復(fù)性引入的不確定度計(jì)算見(jiàn)公式(D.3),計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表D.2。u(N)=(D.3)JJF2035—202310表D.2斑點(diǎn)計(jì)數(shù)示值誤差校準(zhǔn)中重復(fù)性引入的不確定度單位:個(gè)標(biāo)準(zhǔn)值Ns測(cè)量值平均值N u(N)50504949490.241001009999990.312001992001991990.445004984994974980.61D.4.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度u(Ns)根據(jù)模擬斑點(diǎn)計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)提供的擴(kuò)展不確定度Us和包含因子ks,按照公式(D.4)計(jì)算,計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表D.3。表D.3u(Ns)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度(D.4)單位:個(gè)標(biāo)準(zhǔn)值Ns擴(kuò)展不確定度Us包含因子ksu(Ns)50120.50100120.50200120.50500221.00D.5標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表標(biāo)準(zhǔn)不確定度見(jiàn)表D.4。表D.4標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表標(biāo)準(zhǔn)值Ns/個(gè)u(N)/個(gè)靈敏系數(shù)u(Ns)/個(gè) 靈敏系數(shù)-500.240.020.50-0.01961000.310.010.50-0.00992000.440.0050.50-0.00505000.610.0021.00-0.0020D.6合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度以標(biāo)準(zhǔn)值50為例,按照公式(D.2)進(jìn)行計(jì)算合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度uc,其他計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表D.5。uc=2u2(N)+-2u2(Ns)==1.1