hplc法測定注射用頭孢噻鈉他唑巴坦鈉中頭孢噻和他唑巴坦的含量及其有關物質(zhì)

hplc法測定注射用頭孢噻鈉他唑巴坦鈉中頭孢噻和他唑巴坦的含量及其有關物質(zhì)

氨基乙醇鈉注射液為cefotam（cf）和氨基乙醇鈉注射液（tz）的復合制劑。頭孢噻肟為第三代頭孢菌素,他唑巴坦鈉為半合成β-內(nèi)酰胺酶抑制劑,與頭孢噻肟鈉聯(lián)合用藥,可以增強抑菌效果和抗菌譜。《中國藥典》1995年版采用微生物檢定法測定CF含量,2000年版修訂為HPLC法;但未對有關物質(zhì)進行要求?，F(xiàn)用HPLC法,同時測定頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉注射液中兩組分的含量和有關物質(zhì)。1實驗部分1.1高效液相色譜法ShimadzuClass-10VPDAD(日本島津)和Agilent1100系列(安捷侖科技)高效液相色譜儀。頭孢噻肟對照品(中國藥品生物制品檢定所,96.5%);他唑巴坦系原料精制而得(92.0%);頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉注射液(河南欣欣藥業(yè)有限公司);乙腈為色譜純(Merck)公司;其余試劑均為分析純。1.2流動相磷酸二氫鉀法色譜柱為ZORBAXSB-C18(AgilentTechnologies)(4.6mm×250mm,5μm),流動相為乙腈-磷酸二氫鉀溶液(0.03mol·L-1)-10%四丁基氫氧化銨溶液(190∶795∶15)(磷酸調(diào)pH4.0),檢測波長230nm。理論板數(shù)按頭孢噻肟峰計,應不低于3.0×104,頭孢噻肟峰與他唑巴坦峰的分離度符合規(guī)定。1.3組分雜質(zhì)峰的測定1.3.1分別取按處方配比的輔料、CF對照品、TZ對照品流動相溶液以及注射用頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉的流動相溶液各10μl,按“1.2”色譜條件進行測定。結果輔料、CF、TZ及注射用頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉各色譜峰均分離很好,見圖1A～C。1.3.2酸破壞分別取CF、TZ對照品適量,用1mol·L-1的鹽酸溶液溶解后,室溫放置0.5h,用0.1mol·L-1的氫氧化鈉溶液中和,按“1.2”項色譜條件進行測定。結果酸破壞的CF和TZ幾乎未產(chǎn)生新雜質(zhì)峰,主成分峰與雜質(zhì)峰分離良好(圖1D)。1.3.3堿破壞分別取CF、TZ對照品適量,用0.1mol·L-1的氫氧化鈉溶液溶解,室溫下立即用0.1mol·L-1的鹽酸溶液中和,按“1.2”項色譜條件測定。堿破壞的CF、TZ均與其雜質(zhì)峰分離良好(圖1E)。1.3.4氧化破壞分別取CF、TZ對照品適量,用水溶解,加10%的過氧化氫溶液適量,30min后用水稀釋5倍,按“1.2”項色譜條件測定。結果氧化破壞的CF、TZ均與其雜質(zhì)峰分離良好(圖1F)。1.4測量1.4.1高效液相色譜法測定色譜圖取裝量差異項下的內(nèi)容物適量,精密稱定,加流動相溶解并制成約含CF0.90mg·ml-1和TZ0.15mg·ml-1的溶液,照液相色譜法測定,取10μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖;另取CF和TZ對照品適量,同法測定,按外標法計算CF(C16H17N5O7S2)和TZ(C10H12N4O5S)的含量。1.4.2tz-1和tz3gml-1的對照溶液照“1.4.1”項下的方法,取CF和TZ對照品適量,加流動相溶解并稀釋成含CF18μg·ml-1和TZ3μg·ml-1的溶液作為對照溶液,取10μl注入液相色譜儀;另取“1.4.1”項下的溶液作為供試品溶液,同法測定,記錄色譜圖至主峰保留時間的2倍,供試品溶液如顯雜質(zhì)峰,與對照溶液的兩主峰面積之和比較,最大雜質(zhì)峰面積不得大于1.0%,總雜質(zhì)峰面積不得大于4.0%。1.5色譜條件的測定分別精密稱取CF和TZ對照品適量,加流動相制成含CF585.24、780.32、975.40、1170.48、1365.56μg·ml-1和含TZ87.54、116.72、145.90、175.0、204.26μg·ml-1的溶液,濾過,照“1.4.1”色譜條件測定,記錄色譜圖。以樣品濃度對峰面積進行回歸,回歸方程分別為:ACF=162.710C+24.443(r=0.9999);ATZ=3.4288C+2.4161(r=0.9999),線性范圍分別為585.24～1365.56μg·ml-1和87.54～204.26μg·ml-1。1.6加標回收率的測定精密稱取CF、TZ對照品各6份,按處方比例加入輔料,制成含CF480μg·ml-1、TZ200μg·ml-1的溶液,濾過;照“1.2”項色譜條件測定,用回歸方程計算回收率。結果見表1。1.7精密度取“1.6”項下的6號溶液,重復進樣6次,CF和TZ峰面積的RSD=0.67%和RSD=0.79%(n=6)。1.8穩(wěn)定性試驗取“1.7”項下的溶液,分別在0、1、2、3、4h內(nèi)測定,CF和TZ峰面積的RSD分別為0.67%、0.79%。1.9最低檢出量取“1.5”項下溶液,稀釋后進行測定,CF在濃度為4.08μg·ml-1、進樣2μl、S/N>3時,最低檢出量為8.16ng;TZ在濃度為4.92μg·ml-1、進樣2μl、S/N>3時,最低檢出量為9.84ng。1.10測量結果取頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉注射液,按“1.2”項色譜條件測定,含量及有關物質(zhì)測定結果見表2。2流動相的選擇頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉注射液是CF與TZ按照6∶1比例配制成的復方制劑,雜質(zhì)主要是由CF原料引入或降解產(chǎn)生,檢測波長應考慮CF,同時也要兼顧TZ。UV圖和PDA圖中提取得到的光譜圖均顯示,CF在235nm有最大吸收,TZ無明顯的最大吸收,在240nm以上幾乎無吸收,參照TZ原料質(zhì)量標準,同時兼顧兩個組份,選擇230nm作為色譜條件的檢測波長。由于頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉注射液是復方制劑,干擾因素較多,參照有關文獻,分別選擇不同比例的流動相進行試驗,乙腈作為A相,磷酸二氫鉀溶液(0.05mol·L-1)-10%四丁基氫氧化銨(795∶15)(磷酸調(diào)節(jié)pH4.0)作為B相,以頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉注射液的水溶液作為待分離樣品